寡核苷酸
- 山核桃寡核苷酸探针开发及其应用*
的技术瓶颈。寡核苷酸荧光原位杂交技术（oligonucleotide fluorescence in situ hybridization, Oligo-FISH）是一项新的荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH），该技术以长约几十碱基的单链寡核苷酸为探针，可实现对基因组、染色体和特定染色体区段进行精确鉴定和分析，具有简单、经济和高效的特点（Hanet al.，2015；Duet al.，2017；
林业科学 2023年5期2023-08-09
- 原核生物基于环寡核苷酸的抗噬菌体免疫系统研究进展*
原核中基于环寡核苷酸的抗噬菌体免疫系统就是一种新发现的第二信使介导细胞死亡的抗噬菌体系统。1 原核CBASS的发现在细菌与病毒（噬菌体）之间的竞赛中，噬菌体不断更新自己的侵染系统攻破细菌的防线，而细菌为防御噬菌体侵染同样进化出了一系列的防御系统，如众所周知的CRISPR-Cas，限制性修饰系统等，研究发现细菌的抗噬菌体系统都倾向于集中在原核生物基因组的“防御岛”[3]，根据这种与已知防御系统共域化的特性[4]，目前在细菌中发现了多个新型的抗噬菌体系统，如B
福建轻纺 2022年2期2023-01-06
- 粗寡核苷酸的纯化方法现状及进展
26601）寡核苷酸是一种20～30个碱基左右的短链核苷酸，可以用于DNA 测序、PCR 扩增、基因检测、反义核苷酸研究等领域。以寡核苷酸为基础的反义技术是迄今为止实现抑制或消除遗传信息的最常见和最成功的方法[1]。合成寡核苷酸序列的反义效应在20世纪70年代末首次被Zamecnik 和Stephenson 证明。扎米尼克和斯蒂芬森利用劳斯肉瘤病毒（RSV）35S RNA 的5'端和3'端核苷酸序列，确定了21个重复序列，这些重复序列对病毒整合至关重要。他
化工设计通讯 2022年6期2023-01-02
- 一种提高变体库多样性的寡核苷酸设计方法
方法就是从头寡核苷酸合成策略[9]。从头寡核苷酸合成策略包含多种具体实现方法。例如合成改组(synthetic shuffling)通过重叠延伸聚合酶链式反应组装简并寡核苷酸以构建包含不同序列的变体库[10]。基因组装诱变(gene assembly mutagenesis)使用简并寡核苷酸来保证目标位置的饱和诱变并通过基因组装获得变体库[9,11]。当模板序列难以随机化时，基于设计的寡核苷酸组装(assembly of the designed olig
北京生物医学工程 2022年4期2022-08-18
- 植物染色体分子核型技术研究进展
ting)和寡核苷酸荧光原位杂交(oligonucleotide-FISH,Oligo-FISH)技术合成新型探针池的方法，总结其在比较基因组学研究中的应用案例，以期为植物染色体分子核型研究提供参考。1 染色体核型分析染色体核型(karyotype)分析是指一个物种的染色体组在有丝分裂中期的表型，包括染色体数目、长度、着丝点位置、臂比、随体有无等特征总和，是细胞遗传学领域最基础的研究内容[2]。核型分析可以为细胞遗传分类、物种间亲缘关系以及染色体重组研究提
西北农林科技大学学报（自然科学版） 2022年2期2022-02-25
- DNA 合成技术与仪器研发进展概述
技术2.1 寡核苷酸合成技术概述寡核苷酸(Oligonucleotide)是一类多个相邻核苷酸残基以磷酸二酯键连接的短链核苷酸(包括脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)内的核苷酸)的总称，其人工化学合成过程是一个多步连续的反应，目标产物的得率受合成过程中副反应发生(如脱嘌呤等)的影响。因此，化学合成过程中一般先将不参与反应的基团暂时保护起来，经过一轮缩合反应后再将上一轮被保护基团上的保护基脱除下来，以形成目标磷酸二酯键[7]。寡核苷酸化学合成起步于
集成技术 2021年5期2021-10-13
- 人工DNA合成技术：DNA数据存储的基石
2-13］、寡核苷酸药物［14］等开发过程，是这些药物应用不可或缺的技术手段。在农业育种上，人工合成DNA可以用于转基因农作物品种的改造，如将人工改造合成的来源于苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白Cry的编码基因转化到农作物体内［15］，产生了抗虫棉、抗虫稻等系列抗虫品种。在材料领域，基于人工合成DNA制备的DNA纳米机器人被报道成功地将凝血酶带到肿瘤细胞，杀死肿瘤细胞［16］。DNA人工合成技术对合成生物学领域的支撑作用，堪比测序技术对基因组学和精准医学领域的贡献，
合成生物学 2021年3期2021-07-21
- DNA信息存储中关键生化方法的研究
信息的大规模寡核苷酸文库造成的影响，重点介绍了现阶段为解决DNA信息存储中的这些问题所采取的DNA分子合成、保存以及扩增方法，论证了这些生化方法对操纵大规模寡核苷酸文库的可行性和有效性，最后总结并讨论了目前该领域所涉及的生化反应存在以及亟需解决的主要问题。1 合成和均一化方法的优化以实现寡核苷酸文库的均衡性目前DNA合成的方法主要有：芯片合成、柱式合成以及酶促合成［8，33-34］。芯片合成具有可合成任意序列、通量高、成本相对较低等优势［35］；柱式合成具
合成生物学 2021年3期2021-07-21
- 间隔区寡核苷酸DNA微阵列分型在结核分枝杆菌检测中的应用
7]和间隔区寡核苷酸分型(spacer oligonucleotide typing,Spoligotyping)[8-9]被广泛应用，其中Spoligotyping是公认的MTB一线分型方法。Spoligotyping是以聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)为基础，检测MTB基因组中直接重复区(direct repeat,DR)的基因分型方法，Spoligotyping通过识别间隔子的PCR产物来确定DR是否存在,在
新乡医学院学报 2021年4期2021-05-18
- DNA合成、组装与纠错技术研究进展
率和副反应使寡核苷酸合成长度局限于200～300 nt，难以到达 kb 级的基因长度［6-8］。因此更长片段则需通过组装技术拼接寡核苷酸片段，直至获得基因、染色体或基因组长度的DNA［9］。然而，寡核苷酸片段合成和DNA 组装过程会产生很多错误，降低长片段DNA 的正确率。纠错技术的应用可去除DNA 合成和组装过程引入的大量错误，进而降低正确DNA 片段的筛选与测序成本［10］。本文作者将重点综述DNA 合成、组装与纠错技术相关的研究进展，以此期望促进我国
合成生物学 2020年6期2021-01-21
- 反义寡核苷酸药物在精准治疗中的应用进展及其作用机制
及合成的反义寡核苷酸的治疗。本文主要集中讨论部分反义寡核苷酸药物在遗传疾病中相关的临床应用及其作用机制。1 反义寡核苷酸药物对相关疾病治疗的作用机制反义寡核苷酸为化学合成的单链核苷酸分子，通常为13～30个核酸序列的短片段(故称为“寡核苷酸”)，这一核酸序列被设计成为与靶向基因序列互补(故称为“反义”)，通过沃森-克里克(Watson-Crick)碱基配对的方式与特异的RNA序列结合。在生物信息学指导下通过精心设计，使该核苷酸片段对目标RNA具有高度的特异
精准医学杂志 2020年4期2020-08-10
- 核转录因子Sp1在手术创伤后腹膜组织中的活性改变与腹膜粘连形成关系探讨
对Sp1双链寡核苷酸探针进行标记，T4多核苷酸激酶作用下用 ［γ-32P］ATP对其5'端进行标记，经MicroSpinTMG25分离柱纯化后对探针放射活性进行测定。②腹膜组织核转录因子Sp1的DNA结合活性与特异性检测：依据加拿大GENEKA公司生产的Sp1 NUSHIFT检测试剂盒，将 4 μL DNA结合缓冲液 ＋10 μg核蛋白提取物加入0.5 mL Eppendorf管中，在4℃的温度下进行20 min的孵育，将1 μL已标记寡核苷酸双链探针加入
临床医学工程 2020年4期2020-05-13
- 人工RNA结合骨架的可溶性表达及其与寡核苷酸链的相互作用分析
-FAM标记寡核苷酸，通过检测5′-FAM标记寡核苷酸荧光强度的变化来分析ERBS蛋白与寡核苷酸的相互作用。1 材料和方法1.1 材料Escherichia coliDH5α、BL21（DE3）、Rosetta（DE3）感受态细胞、pET-24a-CYFP载体均由浙江师范大学化学与生命科学学院细胞实验室保存；含ERBS基因的载体pUC57-ERBS、寡核苷酸链由生工生物工程（上海）股份有限公司合成；限制性核酸内切酶Not I、Sal I、PCR相关试剂、T
山西农业科学 2020年2期2020-02-29
- 反义寡核苷酸AMO-miR-224在肝癌中的实验研究
224的反义寡核苷酸(AMO-miR-224)，通过实验确定AMO-miR-224在肝癌细胞中起到的作用。反义技术基于碱基互补原理，用特定互补的DNA或RNA或其化学修饰产物，阻断蛋白的转录翻译，使得该基因不能正常表达。本研究假设：miRNA-224可能在SMMC-7721的生长凋亡过程起到重要作用，随即将反义寡核苷酸转染进细胞，观察转染后肿瘤细胞生物学活性的改变。1 材料与方法1.1材料 细胞株购自中国辽宁师范大学生命科学院；胎牛血清(FBS)购自美国G
国际检验医学杂志 2020年3期2020-02-14
- 骨肉瘤特异生物诊断探针制备
一想法。而小寡核苷酸DNA或者RNA具有更多的特点：可以自发卷曲成三维空间结构，可以进行体外化学修饰(连接生物素、氨基、羧基、荧光物质……)，而不改变与配体的结合能力，小寡核苷酸的制备、储存、运输及应用比抗体特别是单克隆抗体显示更多的优势〔1～4〕。蛋白质-核酸可以互相作为配基的理论基础已被引入细胞膜表面配基的研究。指数富集配体的系统进化(SELEX)技术〔5～7〕的出现为肿瘤标志物的筛选及特异诊断探针研制带来了新的契机。SELEX技术的基本原理是利用分子
中国老年学杂志 2020年2期2020-02-07
- 南麦号系列小麦品种的染色体结构演变
作用。依赖于寡核苷酸探针的ND-FISH技术，具有方便、快捷和经济的优点[9-11]。利用寡核苷酸探针和ND-FISH 技术，可以反映不同小麦品种(系)的染色体结构差异[12-15]，同时还可以体现同一串联重复序列的不同区段在不同染色体上的分布差异[12-13]。因此，利用基于寡核苷酸探针的ND-FISH技术，可以快速、方便地分析小麦亲本及其衍生系的染色体结构差异，从而跟踪亲本材料染色体在衍生系中的变异情况，这有助于小麦育种理论的完善和加强。本研究拟利用南
麦类作物学报 2019年5期2019-06-14
- 反义寡核苷酸治疗的分子影像技术进展
i治疗或反义寡核苷酸治疗。反义寡核苷酸治疗在许多疾病的治疗中具有巨大的潜力，目前研究主要集中在眼类疾病、病毒感染、炎性疾病、基因紊乱和肿瘤[2-5]。但反义寡核苷酸治疗药物在生物体内转运至靶点发挥作用过程中也面临许多障碍[6-7]，并且由于一些不可预期的不良反应，反义寡核苷酸治疗还面临着安全方面的考量[4,8-9]。目前包括光学成像、磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)、单光子发射计算机断层显像(singlephoto
医学综述 2019年3期2019-02-25
- 寡核苷酸药物及寡核苷酸制备技术研究进展
，人工合成的寡核苷酸已经广泛应用于靶向基因治疗的研究，主要包括反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotides, ASODN)、小干扰 RNA(Small interference RNA, siRNA)、转录因子诱饵(Decoy)、核酶 (Ribozyme)、脱氧核酶 (DNAzyme)、反基因 (Antigene)、CpG寡核苷酸和核酸适配体(Aptamer) 等。其中ASODN和siRNA是最常用的基因调控工具，获得广泛应用，并已被
生物工程学报 2018年5期2018-06-11
- 寡核苷酸探针套涂染结合基因组原位杂交和分子标记分析准确鉴定小麦-百萨偃麦草异源易位系的研究
。最新发展的寡核苷酸探针套涂染技术可以通过一次FISH准确识别小麦及其亲缘植物染色体，不但能揭示不同品种间染色体的多态性[4-5]，而且还可以不通过GISH分析直接识别我国小麦品种中常见的三种易位系，即T1BL·1RS，T6VS·6AL及相互易位T1RS·7DL和T7DS·1BL[5]，显示了该技术的简单、经济和高效特点。但是，单一的寡核苷酸探针套涂染仍难以准确判断发生在小麦和外源染色体常染色质区或缺少明显带纹特征区段的易位断点，仍然存在一定的局限性[4-
麦类作物学报 2018年3期2018-05-04
- 核酸适配体筛选方法研究进展*
合成一个单链寡核苷酸库，将之于与靶标物质混合，寡核苷酸链与靶标物质结合形成复合物，去除未结合的核酸链后，再将结合的核酸分子与靶标物质分离，以此寡核苷酸分子为模板进行PCR扩增，用其产物进行下一个循环的筛选。经过数次循环，即可得到能与靶标物质高亲和力高特异性结合的核酸适配体分子。本文综述了SELEX技术筛选核酸适配体技术的一些研究进展。自从上世纪90年代L. Gold 和J.W. Szostak创立了用指数富集的配基系统进化(Systematic evolu
陕西医学杂志 2018年3期2018-03-20
- 中英文对照名词词汇（二）
（FA）反义寡核苷酸 antisense oligonucleotide（ASO）反转时间 inversion time（TI）非结核分枝杆菌 nontuberculous Mycobacteria（NTM）非快速眼动睡眠期non⁃rapid eye movement（NREM）非运动症状 non⁃motor symptoms（NMS）肥厚性硬脑膜炎 hypertrophic pachymeningitis（HP）风疹病毒 rubella virus（RV
中国现代神经疾病杂志 2018年4期2018-01-19
- 外源寡核苷酸对大肠杆菌和双歧杆菌生长的影响*
200)外源寡核苷酸对大肠杆菌和双歧杆菌生长的影响*高晓梦1, 2， 苏 健1， 王晓倩1， 李玉芝1， 孔 青1， 董 平1**， 梁兴国1(1. 中国海洋大学食品科学与工程学院，山东 青岛 266003； 2. 山东省莱阳市第九中学，山东 烟台 265200)为研究外源寡核苷酸对2种典型肠道菌—双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescentis)和大肠杆菌(Escherichiacoli)的影响，向核酸营养缺乏型的培养基中分别添加39和6
中国海洋大学学报（自然科学版） 2017年11期2017-10-17
- 基于寡核苷酸探针套painting的小麦“中国春”非整倍体高清核型及应用
子遗传学基于寡核苷酸探针套painting的小麦“中国春”非整倍体高清核型及应用王丹蕊1杜 培1裴自友2庄丽芳1,*亓增军1,*1南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室, 江苏南京 210095;2山西省农业科学院作物科学研究所, 山西太原 030030基于寡核苷酸探针套painting的染色体鉴定技术简单、经济和高效, 可以促进小麦品种及亲缘物种染色体识别和变异体鉴定, 提高染色体工程效率。我们前期开发了寡核苷酸探针套, 包含 pAs1-1、pAs
作物学报 2017年11期2017-10-17
- mt01对人牙周膜细胞中成骨细胞相关因子mRNA表达的影响
上，我们选择寡核苷酸mt01作为促进人牙周膜细胞成骨分化的切入点，分析不同浓度的寡核苷酸mt01对人牙周膜细胞成骨分化的影响，现报道如下。1 对象与方法1.1 对象选择2015年1月-2016年1月在三门峡口腔医院行牙齿正畸时拔除的健康牙齿作为研究对象。1.2 仪器与试剂ODN mt01(大 连 宝 生 物 公 司)；CO2恒温培养箱(美国NAPCO公司生产)，倒置相差显微镜(日本Olympus公司生产)胰蛋白酶(美国Sigma公司生产)；磷酸盐缓冲液(自
中国实验诊断学 2017年8期2017-09-03
- 不同端粒片段通过沉默信息调节因子1/抑癌基因P53促进血管平滑肌细胞凋亡
研究不同端粒寡核苷酸序列对大鼠胸大动脉平滑肌细胞（A7R5） 凋亡的影响，及沉默信息调节因子1（SIRT1）/抑癌基因P53（P53）信号通路是否参与调控端粒寡核苷酸序列诱导A7R5的凋亡。方法：将三种端粒重复序列端粒寡核苷酸序列的二聚体、四聚体、六聚体[TE-12（TTAGGG）2、TE-24（TTAGGG）4、TE-36（TTAGGG）6]转染至A7R5，分别作为TE-12组、TE-24组、TE-36组，另设A7R5空白为阴性对照组。应用流式细胞仪检测
中国循环杂志 2017年6期2017-06-27
- 磁性载药微球联合反义寡核苷酸对人胰腺癌裸鼠模型的疗效观察
微球联合反义寡核苷酸对人胰腺癌裸鼠模型的疗效观察赵会庚 权广前 潘耀振 尹家俊目的 探讨辐射促细胞转染的多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因mdr1反义寡核苷酸(ASON)联合5-氟尿嘧啶磁性载药微球(PEG-5-FU-MAMS)治疗裸鼠人胰腺癌的效果。方法 通过构建裸鼠人胰腺癌耐药肿瘤模型基础上，肿瘤局部以2 Gy60Coγ辐射，瘤内注射阳性脂质体介导的mdr1反义寡核苷酸(ASON)，经磁导下利用磁性载药微球(PEG-5-M
实用癌症杂志 2017年2期2017-03-08
- miR-497靶向Bcl-2调控肝癌细胞增殖及凋亡的研究
ics及对照寡核苷酸，采用RT-PCR、Western blot检测组织中miR-497及Bcl-2蛋白表达，采用MTT法检测各组细胞增殖活性，采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡，采用双荧光素酶报告基因检测细胞荧光酶活性。结果：1）与远癌正常组织相比，肝癌组织中miR-497表达明显降低（P＜0.05），Bcl-2蛋白表达明显增高（P＜0.05）；2）与转染对照寡核苷酸相比，转染miR-497可使HepG2中miR-497表达增高（P＜0.05），Bcl-2蛋
中国肿瘤临床 2016年16期2016-09-19
- 利用吗啉代寡核苷酸技术下调早期斑马鱼胚胎lmna基因的初步研究
利用吗啉代寡核苷酸技术下调早期斑马鱼胚胎lmna基因的初步研究刘丰1,2，黄慧敏1,2,3，王志华1,2，吴西军2，何志旭1,2,3，舒莉萍1,2,4(1. 贵州医科大学免疫学教研室，贵阳，贵州550004；2. 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心，贵阳，贵州550004；3. 贵州医科大学附属医院儿科学教研室，贵阳，贵州550004；4. 贵州医科大学实验动物中心，贵阳，贵州550004)目的利用吗啉代寡核苷酸技术建立下调斑马鱼lmna基因的技术方法
中国比较医学杂志 2016年8期2016-09-13
- L-核糖的生物合成及其在药物中的应用
、糖缀合物、寡核苷酸中的应用进展。关键词：L-核糖；生物合成；L-核苷类药物；糖缀合物；寡核苷酸核糖是一种典型的五碳糖，是与生物遗传相关的重要稀少糖类，其在生理上具有十分特殊的作用，是各种核糖核酸、核苷酸辅酶、ATP及NADP的组成成分。L-核糖是D-核糖的手性对映异构体，在自然界中并不存在，一般只能通过合成的方法得到[1]，其分子结构见图1。图1 L-核糖的分子结构1 The molecular structure of L-ribose合成L-核糖属于
化学与生物工程 2016年7期2016-08-10
- 反相离子对色谱法对寡核苷酸药物分析的进展
子对色谱法对寡核苷酸药物分析的进展杨洪淼，范慧红Δ(中国食品药品检定研究院，北京 100050)寡核苷酸药物是近年来药物研发领域中的热点之一，相应分析方法的研究也被广泛开展，其中反相离子对色谱法以分离度高、易与MS对接等优势成为寡核苷酸分析中最常用的方法。本文综述了反相离子对色谱法在寡核苷酸分析方面的新进展，以下将从色谱柱、流动相，分离规律的探索，MS检测器方面进行系统介绍。离子对试剂；高效液相色谱；寡核苷酸药物；综述寡核苷酸药物是指含有10～30个碱基的
中国生化药物杂志 2015年7期2015-07-07
- 核因子-κB通路在溃疡性结肠炎治疗中的应用
3.1 反义寡核苷酸反义寡核苷酸（ASON）是一段人工合成的短链核酸（有15～25个核苷酸），其碱基顺序与特定靶mRNA或靶DNA互补，可特异性抑制或阻止该基因的转录及表达，故又被形象地称为“基因封条”。已有许多研究证实，UC患者肠黏膜组织中以NF-κB的亚单位p65为主，在调控靶基因转录方面发挥关键作用［11］。因此，采用 NF-κB p65 ASON抑制或封闭NF-κB p65 mRNA的表达，使p65蛋白合成减少，NF-κB的活性下降，从而使细胞因子
国际消化病杂志 2015年4期2015-03-20
- 应用通用寡核苷酸芯片技术检测病原菌的研究
待检细菌制备寡核苷酸芯片，根据杂交条件进行摸索，然后重新确立寡核苷酸芯片，通过结果的相似性来判断样本的种类。检测中利用通用引物SUA和GO7B对涉及40多个进行扩增和标记后，针对不同的种、属的混合模式，增加它们相互之间的分辨能力，同样样品中存在多个菌种时也可检测出来，并为临床诊断提供依据。综合比较，该项检测技术具有良好的使用价值。【文献标识码】B【文章编号】1674-9308（2015）06-0170-02doi：10.3969/j.issn.1674-9
中国继续医学教育 2015年6期2015-01-31
- 人慢性粒细胞白血病bcr-abl基因反义寡核苷酸对K562细胞株的凋亡诱导作用研究
bl基因反义寡核苷酸对K562细胞株的凋亡诱导作用研究平娟1，赵娜2，王保全1，申智慧2，阴明星2，庞晓斌3，陈传波11.河南大学淮河临床学院，河南 开封475001；2.郑州大学附属肿瘤医院血液科，河南 郑州 450009；3.河南大学药学院化学生物学实验室，河南 开封 475004背景与目的：随着人类基因组计划的完成，人们的研究重点已转向基因功能的研究，反义核酸技术无疑为这项宏伟工程提供了一个新的发展方向。目前，国内关于反义寡核苷酸诱导K562细胞凋亡
中国癌症杂志 2015年3期2015-01-04
- 通过CRISPR/Cas9系统敲除人源PDE10A基因
成sgRNA寡核苷酸序列，并克隆进PX330质粒中。将克隆正确的质粒PX330-sgRNA转染至HEK293T细胞中，提取基因组DNA并对敲除位点附近的DNA片段进行PCR扩增，再通过SURVEYOR分析和一代测序对敲除效率进行检测。最后采用有限稀释法挑选稳定敲除PDE10A的HEK 293T细胞株。结果目的sgRNA 寡核苷酸双链成功插入PX330质粒中且序列正确；靶向Exon 7的sgRNA可成功敲除PDE10A，且敲除效率高达31.4%；稳定敲除PD
基础医学与临床 2014年4期2014-11-27
- 用于寡核苷酸二级结构预测的热力学数据库研究进展
可靠性依赖于寡核苷酸分子与其靶点结合的高稳定性与特异性，而分析这种结合特性的关键在于寡核苷酸与靶分子结合的二级结构的精确预测，否则会导致假阴性或假阳性的检测结果［1－4］。已有研究显示最近邻模型(Nearest-Neighbor Model，简称NN model)是预测寡核苷酸二级结构最可靠的热力学计算方法［5］，该模型指出一个给定碱基对的稳定性依赖于其临近碱基对的稳定性。其基本思想是将核酸分子结合过程中的标准焓变和熵变计算转化为由A、T、G、C所形成的1
生物信息学 2014年3期2014-11-14
- VEGF-C在宫颈癌细胞的表达及其与细胞黏附和侵袭的关系
VEGF-C寡核苷酸链：5’-CCCAGCCTTCCAGCTCCTTG-3’，两端各3个碱基进行硫代修饰，目标核苷酸232～251，在5’端标记FITC，随机链序列为：5’-CAGCTCCTGTCCAGCCTCTC-3’，两端各3个碱基进行硫代修饰；阳离子脂质体LipofectamineTM2000(Invitrogen公司，系尹如铁副教授惠赠)；Transwell小室(3428型，孔径8um，Corning-Costar公司),VEGF-C及内参照GAP
延安大学学报(医学科学版) 2014年2期2014-09-12
- 小分子干扰RNA和反义寡核苷酸技术的比较及其应用意义
RNA和反义寡核苷酸技术在不同方面的比较和实际应用意义,找到两者的优势点。1 RNA干扰与反义寡核苷酸技术概念分析RNA干扰是指因为目标mRNA降解,以及抑制所导致的转录后基因沉默。其具有21-23个碱基的单链,也就是所谓的小分子干扰RNA,可以利用RNA干扰,有效,特异地间隔体内同源基因表达,促进同源mRNA降解,使细胞体现出独特的基因匮乏的类型。随着社会的发展,人们逐渐在秀丽隐杆线虫,以及哺乳动物细胞等等中表明这种RNAi现象。一些专家在秀丽隐杆线虫基
生物技术世界 2014年7期2014-08-15
- 硫代磷酸化修饰的反义TGF-β1寡核苷酸抑制血管损伤后内膜增殖*
法1 反义寡核苷酸的设计及合成应用Wilbar-Lipman方法，寻找出大鼠TGF-β1的cDNA序列[4]，在跨过cDNA序列的起始密码区ATG范围内，设计包含有15个碱基、无修饰或硫代磷酸化修饰的反义TGF-β1寡核苷酸，同时设计与此反义寡核苷酸相对应的、作为对照的正义寡核苷酸(与反义寡核苷酸互补)，无修饰的寡核苷酸应用于离体的细胞培养实验，而硫代磷酸化修饰的寡核苷酸则用于在体治疗实验。具体如下：反义 TGF-β1(AS TGF-β1): 5’-CG
中国病理生理杂志 2014年8期2014-08-09
- miR-155种子序列的反义寡核苷酸对抗多发性骨髓瘤的作用*
法1 反义寡核苷酸的设计与合成从microRNA Families数据库中获取人miR-155的种子序列，根据序列互补原理设计针对种子序列的反义寡核苷酸序列(t-antimiR-155)，并采用BLAST软件分析确定其反义寡核苷酸序列及随机对照序列，见图1。Figure 1. The sequences of miR-155 and t-antimiR-155.2 主要试剂MTT和DMSO购自Sigma；胎牛血清及RPMI-1640培养基购自Gibco；
中国病理生理杂志 2014年8期2014-08-09
- AP-1 和Smad3 双功能诱骗寡核苷酸对L929 成纤维细胞增殖及纤维化介质表达的影响
的双功能诱骗寡核苷酸转染L929 成纤维细胞，竞争抑制活化AP-1 和Smad3 与启动子区域的结合位点结合，进而抑制了L929 成纤维细胞的生长、增殖，旨在为进一步研发并制备治疗病理性瘢痕和组织纤维化疾病的药物奠定基础。材料与方法1.材料:L929 成纤维细胞购自ATCC。脂质体转染试剂LipofectamineTM2000(美国Invirtogen 公司)，96 孔酶联板(美国Active Motif 公司的TransAMTMTranscription
医学研究杂志 2014年3期2014-01-16
- 基因合成技术研究进展
方法是以短链寡核苷酸作为原料，经拼接组装得到长链DNA[2-6]。柱式合成是寡核苷酸的常规来源，以多孔玻璃(Controlled pore glass，CPG)或聚苯乙烯(Polystyrene，PS)作为固相载体，微升级体积的化学试剂和溶剂通过抽压流穿合成柱，经脱保护、偶联、封闭和氧化四步反应循环，使核苷酸单体不断加成到增长的寡核苷酸链上[7-8]。近几十年来，商品化的DNA合成仪普遍采用这种固相亚磷酰胺三酯法 (Phosphoramidite chem
生物工程学报 2013年8期2013-09-04
- MicroRNA-29 a对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响
29 a反义寡核苷酸(上海生工);兔抗鼠PCNA抗体、兔抗鼠 MMP-9、MMP-2抗体、小鼠抗β-actin单克隆抗体、PCR试剂盒、HRP标记山羊抗小鼠二抗(北京中杉金桥公司)。1.2 细胞培养及转染 选取100～180 g雄性 SD大鼠，取胸腹主动脉血管中膜，用贴块法分离、培养 VSMC。细胞在含10%FBS的DMEM中生长至汇合后，0.25%胰蛋白酶消化传代，取3～6代细胞进行实验。MicroRNA-29 a反义寡核苷酸转染按照lipofectam
中国老年学杂志 2013年5期2013-08-22
- 端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对子宫内膜癌细胞株的影响
析显示，反义寡核苷酸在细胞进入DNA合成期前引起DNA损伤，使细胞停滞在G0～G1期，并诱导细胞凋亡。结论端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性，诱导子宫内膜癌细胞凋亡，从而抑制子宫内膜癌的增殖。端粒酶;子宫内膜癌细胞;反义寡聚脱氧核苷酸;凋亡近年来子宫内膜癌发病率占全世界常见恶性肿瘤的第七位，为女性生殖道恶性肿瘤之一。随着生活方式的改变，发病率在世界范围内呈上升趋势，有研究表明，95%的子宫内膜癌组织的端粒酶阳性［1］，端粒酶子宫内膜癌中高表达，而在大
河北医药 2012年17期2012-12-28
- 反义寡核苷酸对血管瘤内皮细胞VEGF表达的影响＊
－2］。反义寡核苷酸（AS－ODN）药物是一类作为肿瘤基因治疗的较有前途的新型药物［3－4］。笔者前期研究发现，应用VEGF AS－ODN能显著抑制皮肤血管瘤内皮细胞的增殖［5］。为了进一步研究其作用机制，本研究将采用RT－PCR 法和ELISA 法检测血管内皮生长因子反义寡核苷酸（VEGF AS－ODN）作用后皮肤血管瘤内皮细胞VEGF mRNA 的表达及培养上清液中VEGF 蛋白分泌的改变，以期为皮肤血管瘤的发病机制和临床治疗提供新的思路。1 材料与方
华中科技大学学报（医学版） 2012年3期2012-12-23
- miR-125b在儿童AML中的表达及其反义寡核苷酸对白血病细胞的作用*
表达及其反义寡核苷酸对白血病细胞的作用*刘晓丹1， 徐 令2△， 檀卫平3， 颜慕霞2(中山大学孙逸仙纪念医院1医学研究中心，3儿科, 广东 广州 510120；2广州市妇女儿童医疗中心血液科，广东 广州 510623)目的研究儿童急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓细胞中miR-125b的表达及miR-125b为靶标的反义寡核苷酸对人白血病细胞的作用。方法采用基因芯片和实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测儿童AML治疗前后骨髓细胞中miR-125b
中国病理生理杂志 2012年4期2012-11-06
- p73基因表达模式对于HeLa细胞萘醌类化疗药物敏感性的影响
)特异性反义寡核苷酸干预HeLa细胞内p73基因表达模式，以RT-PCR法验证干预效果，同时观察细胞对于DDN药物敏感性的变化；运用MTT和TUNEL法分别检测在DDN药物作用下细胞活力以及凋亡指数(apoptosis index，AI)的变化情况。结果：TAp73特异性反义寡核苷酸特异性阻遏细胞TAp73的表达、下调TAp73/DNp73(dominant negative p73)表达比，从而明显降低HeLa细胞对于DDN的敏感性，导致该药物抑制细胞增
中国癌症杂志 2012年2期2012-05-28
- hTERT反义寡核苷酸对子宫内膜癌细胞增殖的影响
TERT反义寡核苷酸对子宫内膜癌细胞增殖的影响杨蓉娟，许艳蕾，刘雪芹，魏丽莉（河北省石家庄市第四医院妇产科，河北石家庄 050011）目的探讨人端粒酶催化亚基（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）反义寡核苷酸对子宫内膜癌细胞增殖的影响。方法反义寡核苷酸转染ishikawa细胞系，采用TRAP-ELISA法检测转染后细胞端粒酶的活性，观察其前后的变化。MTT法检测细胞活性，流式细胞仪观察细胞周期及细胞凋亡
河北医科大学学报 2012年7期2012-05-09
- HIV－P24核酸适配体的筛选
X技术从随机寡核苷酸库中筛选与HIV-P24结合的寡核苷酸，利用凝胶阻滞实验鉴定第12轮筛选到的寡核苷酸与HIV-P24的结合，再用Dot-blot法筛选出与HIV-P24结合的核酸适配体，并检测核酸适配体识别HIV-P24的特异性。结果 Dot-blot筛选到5条与HIV-P24有较强结合能力的核酸适配体，且均为不同的序列。特异性检测显示，18和26号配体只与HIV-P24特异性结合，而与人血清白蛋白、牛血清白蛋白和脱脂奶粉均无明显结合。结论 成功筛选到
基础医学与临床 2012年9期2012-01-11
- ANGPTL3反义寡核苷酸对EC9706细胞侵袭黏附能力的影响*
键一步。反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide，ASODN)技术能够干预肿瘤的生物学行为，逐渐成为肿瘤基础和临床研究的热点。该实验通过应用ASODN技术，研究血管生成素样蛋白3(angiopoietin-like protein 3，ANGPTL3)对食管癌细胞EC9706侵袭黏附能力的影响，探讨ANGPTL3 ASODN对食管癌浸润转移生物学行为的影响。1 材料与方法1.1 实验材料与仪器 EC9706细胞购自中国科学
郑州大学学报（医学版） 2011年5期2011-09-18
- 端粒酶抑制剂在恶性肿瘤治疗中的作用
质包括：反义寡核苷酸，逆转录抑制剂，G-四连体稳定剂，蛋白激酶C抑制剂，化疗药物。1 反义寡核苷酸(antisense oligodexoynuclectide，ASODN)反义寡核苷酸能够与靶RNA或DNA特异性互补，能够使得恶性肿瘤细胞端粒酶活性降低，进而其增殖能力下降，甚至调亡。应用这一原理，人工的合成针对模板序列的反义核苷酸抑制剂在研究中已取得很大突破。例如 Mete等［2］使用硫代反义核苷酸(PAS-ODN)对Burkitt's瘤中淋巴瘤细胞系O
中国实用医药 2011年28期2011-08-15
- 小窝蛋白-1反义寡核苷酸在AVP诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖erk1/2信号转导中的作用及辛伐他汀的干预效应
cav1反义寡核苷酸设计及处理 根据大鼠cav1的脚手架域cDNA序列设计反义、正义及错配寡核苷酸，序列运用Blast程序在GenBank数据库进行同源性检索，无同源序列。由上海生工有限公司合成，聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化，寡核苷酸分子两端碱基均行硫代修饰，反义寡核苷酸序列如下〔6〕:5'-AAA CTG TGT GTC CCT TCT GG-3'，所有碱基均以硫代磷酸基修饰，并以该序列的错义寡核苷酸为对照(错义序列5'-AAA CAG TCT GAC CGT
中国老年学杂志 2011年15期2011-08-02
- 核酸治疗的靶向性传递
30062)寡核苷酸包括反义核酸和干扰RNA等，它们能够为多种疾病提供快速、特异性的治疗，具有很高的应用潜力。然而这些分子能否有效地传递到特定的细胞和组织对于最终的临床应用非常关键。靶向性的传递能够提高寡核苷酸药物的特异性和使用效率，使药物分子能有效到达作用位点，进而发挥它们的治疗效果。一些基于不同平台的靶向性配体传递策略已经形成，并能够很好的发挥其生物学活性。本文针对当前该研究领域的进展提供一个概述。AS-ODNs;siRNA;靶向性传递寡核苷酸(Oli
中国比较医学杂志 2011年3期2011-02-11
- LC/MS技术在寡核苷酸类药物生物样品定量分析和代谢物鉴定中的应用
/MS技术在寡核苷酸类药物生物样品定量分析和代谢物鉴定中的应用邓 泮,钟大放,陈笑艳(中国科学院上海药物研究所,上海 201203)寡核苷酸是药物发展的新领域,这类药物是人工合成的DNA或RNA片段,一般由15～50个核苷酸组成,其药动学研究的经典方法是酶联免疫法,但由于该方法的建立耗时、耗资,因此成为新药研发的瓶颈。液相色谱-质谱(LC/MS)联用技术在寡核苷酸类药物生物分析中面临的主要问题有:待测物离子化效率低、基质效应严重、色谱分离条件与质谱不易兼容
质谱学报 2011年1期2011-02-02
- 结核分支杆菌链霉素耐药基因的杂交检测
用 PCR-寡核苷酸探针反相斑点杂交技术检测了 55株肺结核患者痰标本临床分离株,并对 25例结核患者痰标本直接进行 rpsL基因、rrs基因突变检测,现将结果报告如下。1 材料与方法1.1 材料 23例敏感株和32例耐 SM或含耐SM的临床分离株来自本所。25例耐 SM或含耐SM的肺结核患者痰标本来自本院住院结核患者。按结核病诊断细菌学规程进行菌种鉴定及药敏实验证实为结核分支杆菌并对链霉素耐药。1.2 方法1.2.1 细菌 DNA的制备[3]临床分离株
中国实用医药 2010年10期2010-09-17
- 核仁素对LPS诱导的白细胞介素1β释放的影响*
因转染、反义寡核苷酸技术从正反两方面深入探讨核仁素对LPS所致细胞炎症因子分泌的影响，从而为进一步探讨核仁素在炎症反应中的作用奠定基础。材料和方法1 材料BALB/c小鼠由本校实验动物中心提供。正常RAW264.7细胞 (小鼠巨噬细胞)，贴壁生长，由本校细胞中心提供。pcDNA3.1－C23真核表达载体由本科室王海云硕士构建。鼠抗核仁素单克隆抗体购于Santa Cruz;GAPDH小鼠单克隆抗体购于中国康成公司;鼠IL－1β ELISA试剂盒购于Boste
中国病理生理杂志 2010年9期2010-08-02
- 脂质体介导的 VEGF-C反义寡核苷酸对肺癌微淋巴管生成的影响
GF-C反义寡核苷酸对肺癌细胞VEGF-C表达水平和种植瘤内微淋巴管生成的影响,来寻找肺癌基因治疗新方法。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 细胞及动物 肺癌 A549细胞株由山东大学齐鲁医院胸外科胡国强教授惠赠,生长特性为贴壁生长,传代培养。4～6周龄雌性 BALB/C系裸鼠 30只,购自上海斯莱克实验动物有限公司。1.1.2 主要试剂 RPMI1640培养基购自 GIBCO公司,胎牛血清系杭州四季青产品。全硫代磷酸化修饰的寡核苷酸均由上海生工公司合成
中国老年学杂志 2010年12期2010-05-31
- 靶向TLR9含非甲基化CpG寡核苷酸片段的合成及筛选
酰(CpG)寡核苷酸片段,用于阻断SLE患者外周血单一核细胞上的TLR9,观察该片段能否使SLE患者机体减少甚至不产生致病性抗dsDNA抗体。1 材料与方法1.1 主要试剂 RPMI 1640、胎牛血清,小牛胸腺DNA(nCTDNA)、Protein Detector TMELISA试剂盒。1.2 含非甲基化CpG寡核苷酸片段的设计及合成设计含非甲基化CpG的寡核苷酸片段(拟合成的寡核苷酸序列为Cp GODN(5′-TCCATCACGTTCCTGATGCT
山东医药 2010年46期2010-04-13
- CTGF反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞转分化的影响
CTGF反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞转分化的影响庄 华 徐国兴 白 月 谢茂松 郭 健 王婷婷 胡建章福建医科大学附属第一医院,福建省眼科研究所目的：研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells, HLECs)合成CTGF与а-SMA表达的影响。方法：测算CTGF反义寡核苷酸对体外培养HLECs的转染
海峡科学 2010年5期2010-01-07