原生质
- 杏鲍菇原生质体制备、再生及其遗传转化体系的建立
菌中已成功利用原生质体遗传转化体系选育出优良品种。原生质体遗传转化是以原生质体为基础[7]，以优质高产原生质体的制备与再生为前提，以稳定有效的遗传转化方法为关键步骤。目前食用菌原生质体多集中于其制备与再生条件[8]，但刘莉等[9]发现将制备体系优化后所得的原生质体用于遗传转化，却得到较低转化效率。因此，用于遗传转化的原生质体不仅要有高的产量和再生率，也要具备高转化效率。本研究以杏鲍菇菌株GIM5.344 为材料，通过对裂解酶、酶解温度、酶解时间、再生培养基
食品研究与开发 2023年21期2023-11-10
- 紫薇叶片原生质体的分离及瞬时转化
受到很大影响。原生质体是去除细胞壁后由质膜包围的具有生活力的植物细胞，其制备相对容易，具有活细胞的一切特征。由于没有细胞壁，原生质体可以摄入细胞核、细胞器基因组或外源 DNA 片段等遗传物质，是非常好的基因转化系统，已在蛋白质互作[10]、基因亚细胞定位[11]、细胞融合[12-13]、基因功能分析[14]、基因组编辑[15]等方面进行了应用。目前已成功分离出原生质体的植物有近400种，分布于40余科160余属，主要为茄科、豆科、禾本科、菊科和蔷薇科植物[
西北农林科技大学学报（自然科学版） 2023年1期2023-02-20
- 烟草根细胞原生质体的制备
50001植物原生质体是去除细胞壁后被质膜包被的活性细胞，广泛应用于细胞工程和分子生物学研究，如作物改良［1］、突变体创制［2］、基因亚细胞定位［3］和基因沉默与基因编辑［4-5］等。近年来，随着植物单细胞组学的快速发展，植物原生质体尤其是拟南芥根原生质体作为组织特异的材料［6-7］被广泛应用于植物单细胞基因组、转录组、蛋白质组以及代谢组学的研究中［8-9］，为植物生长发育和抗胁迫研究提供了新思路。高活性的原生质体是细胞水平组学分析的基础，因此植物原生质体
烟草科技 2022年10期2022-11-21
- 萱草原生质体制备体系的优化
等植物的花期。原生质体融合技术是传统育种的辅助手段，不仅能够克服有性生殖障碍，而且可以促进优良性状的种内、种间、属间整合，从而获得有性杂交无法得到的优良种质资源[10-11]。狼尾草与天竺草[12]、羊草与小麦[13]、多花黑麦草与小麦[14]采用PEG法进行原生质体融合得到了杂种植株，为野生资源的利用提供了新途径。原生质体的制备与培养是进行细胞融合的前提，在植物育种、性状改良和遗传转化等领域具有重要意义[15-16]。植物原生质体是没有细胞壁的裸露细胞，
湖南生态科学学报 2022年4期2022-11-11
- 细基江蓠繁枝变种原生质体制备条件优化
改良势在必行。原生质体作为受体材料，已被广泛应用于植物基因功能研究和杂交育种等[6-7]。目前研究发现红藻的原生质体能够分化再生成新的藻体。Lafontaine N等[8]从带形蜈蚣藻(Grateloupiaturuturu)分离获得了原生质体，并通过培养获得了再生藻体；Yeong H Y等[9]从张氏江蓠(Gracilariachangii)中分离获得了原生质体并通过培养也获得了再生江蓠。原生质体作为转基因受体材料，其转化率与原生质体制备的成功率和质量的
渔业研究 2022年3期2022-07-04
- 舞春花原生质体分离条件的优化研究
研究表明，植物原生质体融合是克服远缘杂交亲和性差的一种有效的育种手段[4]，故建立舞春花原生质体分离体系，既能为进一步原生质体培养与融合奠定基础，又能为培育亮黄色矮牵牛及舞春花新品种提供一种新途径[5]。植物原生质体是指植物细胞壁以内的植物原生质部分。自1960 年首次利用纤维素酶从番茄根尖分离出原生质体以来，目前前人已在水稻、小麦和马铃薯等植物中开展了原生质体融合的相关研究，并实现了种质资源的创新[6-8]。而原生质体融合技术必须建立在高效高产的原生质体
上海农业科技 2022年2期2022-05-13
- 甜菜原生质体制备研究进展
授粉胚株培养、原生质体培养与融合、离体筛选和诱变育种。其中原生质体培养和细胞融合是细胞工程的重要内容。原生质体是除去细胞壁的植物细胞和细菌细胞，仍有正常细胞的全部功能。原生质体可以用来研究无性杂交、亚细胞定位、目的基因的瞬时表达、遗传转化和突变体的选择。植物的原生质体可以为植物遗传改良、研究生理过程现象提供理想材料。由于原生质体没有细胞壁的阻隔，可以通过原生质体的融合进行的体细胞杂交，可以克服杂交不亲和的问题，为杂交育种提供了新的手段。原生质体的首次提取是
中国甜菜糖业 2022年3期2022-04-16
- 番茄匍柄霉原生质体的制备与再生体系构建
。PEG介导的原生质体遗传转化是最常用的转化方法，其前提是制备大量可再生的原生质体。目前很多病原真菌均已建立了成熟的PEG介导的原生质体遗传转化体系，包括稻瘟病菌、枯萎病菌、纹枯病菌、黑粉病菌、苹果腐烂病菌等，但有关番茄匍柄霉的遗传转化体系仍未见报道。原生质体是通过酶裂解细胞壁获得的裸露细胞，仅含一层质膜为隔绝外界的唯一屏障，对外界环境的变化极为敏感。原生质体制备与转化体系现已被广泛用于生理、生化、遗传、分子生物学、基因组学、蛋白质组学、代谢组学研究。由于
浙江农业学报 2022年2期2022-03-03
- 茶树原生质体制备体系的研究进展
便的替代方法。原生质体可广泛应用于植物瞬时表达分析。基于原生质体的表达系统不仅可用于酶活性测定，也可用于亚细胞定位分析，还可以用来研究蛋白质-蛋白质相互作用和转录激活，而且原生质体是克服远缘杂交障碍、创新品种的重要载体[2]。原生质体早在1892年就由Klercker[3]通过机械法从水剑叶叶片中获得，但一直到1960年，Cocking[4]利用酶解法从番茄根尖获得产量大活力高的原生质体，原生质体制备研究才真正开始。目前，许多模式植物和粮食作物例如烟草[5
茶叶 2021年2期2021-12-05
- 棉花真叶原生质体分离及瞬时表达体系的优化
阎媛媛棉花真叶原生质体分离及瞬时表达体系的优化李青，鱼海鹏，张子豪，孙正文，张艳，张冬梅，王省芬，马峙英，阎媛媛河北农业大学农学院/华北作物改良与调控国家重点实验室/河北省作物种质资源重点实验室，河北保定 071001【】真叶细胞能模拟植物内源条件，建立基于棉花真叶原生质体的高效瞬时表达体系，为快速有效研究棉花基因功能提供方法。以陆地棉TM-1真叶为材料，采用常用的纤维素酶和离析酶组合分离原生质体，探究影响原生质体分离的叶龄、渗透压、酶解液成分和酶解时间，
中国农业科学 2021年21期2021-11-19
- 匍匐翦股颖叶肉细胞原生质体瞬时表达体系的建立
1000)植物原生质体是指细胞壁以内的原生质部分，即细胞通过质壁分离后，去除细胞壁的由质膜包被的裸露细胞，具有细胞全能性，其广泛应用于植株再生[1]、体细胞杂交[2]、基因功能研究[3]、植物生化过程研究[4]等。自1960年Cocking等[5]首次利用纤维粗制酶，从番茄(Solanumlycopersicum)根尖分离出原生质体以来，现已在拟南芥(Arabidopsisthaliana)[6]和烟草(NicotianatabacumL.)[7]中建立了
草地学报 2021年9期2021-10-19
- 甜瓜蔓枯病菌原生质体制备及再生体系研究
能基因需要利用原生质体细胞壁再生进行鉴定[4]，因此研究甜瓜蔓枯病菌原生质体的制备及再生体系对上述工作具有重要意义。【前人研究进展】原生质体是一种有组织且具有细胞全能性的生活物质，它可以在人工操作下进行各种分子生物学操作，如细胞融合、细胞壁及完整的植株再生、高分子和病毒的提取等。CaC12/聚乙二醇（PEG）介导的原生质体转化技术是一种常用的基因功能研究方法，该方法是通过细胞壁降解酶的消化作用去除细胞壁获得原生质体，并通过聚乙二醇（PEG）的作用将外源DN
福建农业学报 2021年2期2021-05-31
- 外部环境条件对香菇原生质体产量与再生率的影响
用的育种手段是原生质体技术，这一技术能够在一定程度上有效缩短食用菌的育种周期，但是，此项技术还未在全国范围内进行推广实施，目前由原生质体技术所派生出的育种技术主要有以下4类，原生质体诱变、原生质体转化、原生质体融合、原生质体单核化。相对于其他育种方式而言，原生质体育种具有育种周期短、效率高的特点，同时对于食用菌的品质、产量以及抗性都有显著的提升效果，进而提高香菇的育种水平。这个过程里面原生质体育种的基础是原生质体的制备和再生。所以，本文重点研究外部环境条件
新农业 2020年21期2020-11-19
- 茉莉花原生质体瞬时表达体系的建立及应用
草、番茄、玉米原生质体细胞，烟草叶肉细胞，烟草BY-2细胞以及洋葱表皮细胞等介导的基因瞬时表达体系已被广泛应用于目标蛋白表达、亚细胞定位、启动子及蛋白活性检测、蛋白互作等基因功能研究分析[6-9].现阶段植物细胞的瞬时转化研究主要集中在模式植物，在花卉植物上的研究相对较少.然而，异源受体细胞对同一蛋白的表达效果可能存在差异[10]，为了使目标基因的表达产物正确折叠，修饰并精准定位于相应的亚细胞结构，选择同源植物细胞瞬时表达分析可增加研究的准确性.前人在茉莉
福建农林大学学报（自然科学版） 2019年6期2019-12-04
- 裂壳菌L-14原生质体制备与再生体系构建
对L-14菌株原生质体制备与再生进行研究，对进一步揭示其在植株中的定殖分布规律、阐明其促生和生防作用机理具有重要意义。【前人研究进展】不同真菌的由于生物学特性差异，原生质体的制备与再生条件也有所不同，常用的细胞壁降解酶有崩溃酶、裂解酶、纤维素酶、蜗牛酶和葡聚糖酶等，酶解温度多数为26～30 ℃，酶解时间根据菌株特点差异较大[12-13]，另外稳渗剂的选择也影响原生质体是否易于呈现分散状态[14]的关键因素，一般都需要探索及优化。【本研究切入点】合适的制备条
西南农业学报 2019年6期2019-07-18
- 柄蓝状菌原生质体的制备与再生条件优化
G/CaCl2原生质体转化［4-5］，电击转化［6-7］，农杆菌介导转化［8-9］，基因枪转化［10］，限制性内切酶介导转化［11］，其中PEG/CaCl2原生质体转化法和农杆菌介导转化法是现在丝状真菌使用最多的转化方法［12］。农杆菌介导法虽然受体形式多样，转化效率高，但其在转化过程中会在转化体系中引入外源片段［13］，并且操作复杂，周期长，转过过程容易受影响［14］。PEG/CaCl2原生质体方法操作简单，转化效率高，整合度高，并且容易得到多拷贝而成为
武汉工程大学学报 2018年6期2019-01-02
- 不同酶液组合对椪柑原生质体分离的影响
225009)原生质体指采用酶解法或机械法去掉细胞壁的裸露活细胞，在一定条件下可以发育成完整的植株，同时，原生质体也是一种理想的单细胞系统[1]。因此，原生质体可以为现代生物技术研究的诸多方面提供有利的试验材料，已被广泛地应用于植物基础理论研究和遗传改良中[2-3]。然而，原生质体技术应用的首要前提是分离出高质量的原生质体。由目前的研究现状可知，影响原生质体分离的因素主要有分离起始材料、预处理、酶液组合和浓度、酶解时间、渗透压等。其中，酶液组合是影响原生质
江苏农业科学 2018年21期2018-12-05
- 花椒原生质体分离与培养研究
为融合异源植物原生质体，培养杂种植株，获得理想的优良新种质。因此，花椒体细胞杂交技术体系，是实现花椒种质创新及性状改良的一个有效途径。而体细胞杂交的前提是原生质体的有效分离与培养，但目前尚未见花椒原生质体分离与培养方面的报道。采用酶解法，以韩城大红袍试管苗花椒叶片和凤县大红袍花椒愈伤组织及悬浮细胞为试验材料，对花椒原生质体分离条件及影响因素进行研究，并从花椒试管苗叶片剥离的原生质体为试验材料，对影响花椒原生质体培养的因素进行了探究，建立了稳定高效的花椒原生
西北林学院学报 2018年6期2018-12-01
- 秦艽的原生质体培养
品的关键手段。原生质体培养导致基因水平的变异是普遍的现象[8]，这种变异为植物育种提供了新的途径[9]。制备原生质体常用的植物材料一般有叶片、子叶、下胚轴及愈伤组织等[10-12]。本研究对秦艽愈伤组织诱导和原生质体培养及再生进行了试验，以期获得性状优良的愈伤组织，同时研究原生质体分离和再生的条件，为进一步开展秦艽大规模细胞培养及秦艽的品质改良工作奠定基础。1 材料与方法1.1 试验材料秦艽种子，采集于陕西省陇县的秦艽种植基地。1.2 试验方法1.2.1
江苏农业科学 2018年17期2018-10-11
- 玉米叶片原生质体的制备及瞬时转化体系的建立
）1 引言植物原生质体是指植物细胞用一些手段如酶解法、机械法等除去细胞壁，形成由单层细胞膜包裹的细胞质[1]。原生质体由于没有细胞壁，相对容易摄取外源遗传物质，使外源DNA在原生质体中快速表达并可按既定方向进行培养，是植物作为遗传转化的理想材料[2]，同时原生质体也是获得细胞无性系和选育突变的优良起始材料[3]，因此，原生质体是开展基础研究的理想材料。玉米原生质体由于制备方法相对简单，转化效率较高，常用于植物瞬时表达系统。植物瞬时表达检测是一种快速的、高通
长治学院学报 2018年2期2018-08-28
- 大丽轮枝菌原生质体的制备及再生
鉴定，则需要以原生质体作为研究材料，通过再生细胞壁的过程进行鉴定［11］，但是目前可供参考的有关大丽轮枝菌原生质体制备及再生体系的研究报道还很缺乏。原生质体是去掉细胞壁的活体细胞，它既可以作为一个单细胞系统来研究细胞分裂与分化、细胞器涉入、细胞壁再生、信号转导机制、病毒侵染机理、离子转运等基础理论，又能通过破碎细胞膜分离出大量完整的细胞器如线粒体、核糖体等，为细胞器的功能、结构、生理生化研究奠定基础［12-13］。原生质体作为重要的遗传转化材料通过PEG-
生物技术通报 2018年7期2018-08-18
- 秀珍菇单孢子菌株原生质体制备条件的优化
常规育种相比，原生质体技术可以实现远缘杂交、扩大遗传物质的重组范围以及基因转化和定向诱变，获得有突出优良性状的新型菌株，产生更丰富的遗传变异［2］。原生质体因去掉了细胞壁的障碍而对外界刺激的敏感度显著提高，是诱变的良好材料［3］。原生质体制备［4］是原生质体技术育种的基础和重要前提，如何提高原生质体产量及同时保证其较高再生率是此项技术的关键研究点。秀珍菇中含有的秀珍菇多糖具有抗氧化［5］、防衰老［6］、抗肿瘤等功效，目前国内研究多集中于秀珍菇多糖提取［7］
生物技术通报 2018年4期2018-05-07
- 马铃薯晚疫病菌原生质体制备及再生体系的研究
Cl2）介导的原生质体转化技术，目前PEG介导的原生质体转化体系在其他卵菌中也获得成功，其中包括大豆疫霉［4］（Phytophthora sojae）、同丝水霉［5］（Saprolegnia monoica）、棕榈疫霉［6］（Phytophthora palmivora）、烟草疫 霉［7］（Phytophthora nicotianae）、葱 疫 霉［8］（Phytophthora porri） 以 及 橡 树 疫 霉［9］（Phytophthora ra
生物技术通报 2018年4期2018-05-07
- 香菇YJ-01原生质体制备与再生条件的优化
睫[1-3]。原生质体育种可有效缩短育种周期，目前由原生质体育种得到并推广示范栽培的新品种还未见报道，外加香菇菌丝在原生质体制备过程中会出现原生质体单核化现象[4-5]，结合诱变育种、原生质体融合育种可针对性的改良种质[6-7]，显著提高香菇的产量、品质与抗病性[8-17]。原生质体的制备与再生是原生质体育种的基础，研究采用通用旋转设计对香菇原生质体制备的工艺及再生条件进行优化，期望为香菇原生质体育种工作提供参考。1 材料与方法1.1 供试材料①香菇菌株：
食用菌 2017年5期2017-10-19
- 狭叶柴胡愈伤组织原生质体的制备及纯化
叶柴胡愈伤组织原生质体的制备及纯化程玉鹏1,2, 李天聪1,林进华1,李玥玥1，宁愿1,马爱萍1,李弘琨1,王洪月1(1.黑龙江中医药大学 药学院，黑龙江 哈尔滨 150040； 2.哈尔滨师范大学 生命科学与技术学院，黑龙江 哈尔滨 150024)[目的]以狭叶柴胡愈伤组织为材料，旨在筛选出适合愈伤组织原生质体制备及纯化的最优条件。[方法]研究了酶的种类及浓度、稳渗剂种类、酶解时间及蔗糖分离液浓度等因素对狭叶柴胡愈伤组织原生质体制备和纯化的影响。[结果]
山西农业大学学报（自然科学版） 2017年4期2017-05-16
- 冰糖橙叶肉和愈伤组织原生质体分离期间氧化胁迫的比较分析
叶肉和愈伤组织原生质体分离期间氧化胁迫的比较分析蔡小东，曹文娟（长江大学园艺园林学院，湖北 荆州 434025）通过测定原生质体分离过程中超氧阴离子自由基（）产生速率、丙二醛含量、超氧物歧化酶活性、过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性、还原型谷胱甘肽含量以及抗坏血酸含量的变化，以探讨柑橘不同来源原生质体再生能力差异的机制。结果表明，在原生质体分离过程中，不能再生的冰糖橙叶片原生质体产生速率和MDA积累量在同一酶解时间均较愈伤组织高；愈伤组织原生质体酶解过程中SO
广东农业科学 2017年2期2017-04-27
- 甘蓝型油菜异三聚体G蛋白原生质体瞬时表达体系的建立
异三聚体G蛋白原生质体瞬时表达体系的建立陈 云，于一帆，潘淑芬，周 研，葛会敏，刘立军(扬州大学 江苏省作物遗传生理重点实验室，江苏 扬州 225009)为建立甘蓝型油菜异三聚体G蛋白各组分原生质体瞬时表达体系，以油菜叶片为试材，从试材选取、平摇时间和聚乙二醇浓度方面优化了油菜原生质体制备条件和转化条件。结果表明，选取30 d苗龄叶片、平摇10 min时原生质体游离状态最佳，产量为10.73×106/mL，活力可达96.4%。采用30% PEG转化原生质体
华北农学报 2016年6期2017-01-17
- 截短侧耳素产生菌原生质体的制备条件优化及再生＊
短侧耳素产生菌原生质体的制备条件优化及再生＊都雯玥1,2，王鸣刚1，梁剑平2，陆锡宏2，李雪虎2（1兰州理工大学生命科学与工程学院，兰州730000；2中国科学院近代物理研究所，兰州 730000）以截短侧耳素产生菌Clitopilus pinsitus为材料，通过单因素和正交实验，研究菌龄、酶系、酶浓度、酶解时间、温度及稳渗剂对C.pinsitus原生质体制备和再生的影响。实验结果表明，制备原生质体的最佳条件为：5d菌龄，0.4mol/L甘露醇稳渗剂，2
甘肃科技 2016年9期2016-12-12
- 白及原生质体的分离与纯化
3000)白及原生质体的分离与纯化徐德林1张 林1储士润1韦 欣2钱 刚1郑明辉3*(1.遵义医学院细胞生物学教研室，遵义563000；2.遵义医学院医学与科技学院，遵义563000；3.遵义医学院寄生虫教研室，遵义563000)为建立起白及原生质体分离纯化的技术体系，以白及组培苗叶片为材料，经不同方式预处理后，用不同浓度的纤维素酶、果胶酶、离析酶和甘露醇组合进行酶解，将释放出来的原生质体用过滤和离心的方法进行纯化，最后用荧光素双醋酸酯(FDA)法对纯化的
植物研究 2016年5期2016-11-10
- 普通小麦幼苗叶肉细胞原生质体分离方法的优化
麦幼苗叶肉细胞原生质体分离方法的优化席海秀 艾可筠 佟少明（辽宁师范大学生命科学学院 辽宁省植物生物工程重点实验室，大连 116081）以7日龄小麦幼苗的叶肉细胞为材料，采用正交试验分析了纤维素酶浓度、离析酶浓度、酶解时间、甘露醇浓度对原生质体分离时的产量和活力的影响；采用瞬时表达技术通过PEG-Ca2+介导法转化小麦的原生质体，分析了PEG浓度对转化效率的影响。结果表明，小麦叶片原生质体分离的最佳条件为纤维素酶1.5%，离析酶 0.75%，甘露醇0.4
生物技术通报 2016年4期2016-06-13
- 小花棘豆Embellisia内生真菌原生质体的制备与再生研究
sia内生真菌原生质体的制备与再生研究呼吉雅 卢萍 牛艳芳（内蒙古师范大学生命科学与技术学院，呼和浩特010022）旨在获得数目多且活力高的小花棘豆Embellisia内生真菌的原生质体，分析和探讨该内生真菌原生质体制备与再生的最佳条件，为后续外源基因转化奠定基础。利用酶解法对制备小花棘豆Embellisia内生真菌菌丝的原生质体，研究酶解液成分、pH、温度、渗透压稳定剂、酶解时间及菌龄对原生质体制备和再生的影响；原生质体在TB3培养基上再生后，研究酶解时
生物技术通报 2015年5期2015-10-24
- 三倍体‘银中杨’叶肉原生质体制备的优化
0083）植物原生质体是获得细胞无性系和选育突变体的优良起始材料，在植物快速繁殖、远缘遗传重组、转基因以及品种改良和创造新类型等方面具有广阔的应用前景［1－2］。利用原生质体可以进行细胞融合和体细胞杂交，能有效克服植物有性杂交不亲和现象，扩大种、属间的基因交流，丰富种质遗传资源，是一种创造远缘杂种，获得同源或异源三倍体、四倍体以及双二倍体的新途径［3－4］；同时，原生质体又是植物基因工程的理想受体，可为外源基因、DNA 片段、细胞器、染色体捕获创造一种新方
西北植物学报 2015年9期2015-07-04
- 葡萄原生质体分离及瞬时转化体系的建立
0193）葡萄原生质体分离及瞬时转化体系的建立舒小娟，温腾建，邢佳毅，卢 龙，胡建芳＊（中国农业大学农学与生物技术学院，北京100193）为了建立葡萄原生质体进行遗传转化的技术，该研究以葡萄品种‘黑香蕉’的叶片和愈伤组织为材料，分析纤维素酶和离析酶的浓度与配比、渗透压和酶解时间等主要因素对葡萄原生质体分离的影响，探讨建立稳定、高效的葡萄原生质体分离与瞬时转化体系，为鉴定目标基因的功能奠定基础。结果表明：（1）葡萄叶片原生质体的分离以3.0%纤维素酶和0.7
西北植物学报 2015年6期2015-06-28
- 甘肃野生草地早熟禾原生质体分离与培养研究
野生草地早熟禾原生质体分离与培养研究牛奎举，俞 玲，李玉珠，马晖玲(甘肃农业大学草业学院 草业生态系统教育部重点实验室 中-美草地畜牧业可持续发展研究中心，甘肃兰州 730070)建立高效的原生质体再生体系是通过原生质体融合技术培育草地早熟禾(Poapratensis)新品种的重要前提。以甘肃陇西野生草地早熟禾(LX)和定西野生草地早熟禾(DX)胚性愈伤组织为材料，探索其原生质体游离和培养条件。结果表明，LX和DX原生质体分离的最佳酶液组合为1.5%纤维素
草业科学 2015年6期2015-06-24
- 大型真菌原生质体的制备与再生研究
40)大型真菌原生质体的制备与再生研究李晶莹，孙婷婷，张国权，邹莉*(东北林业大学，哈尔滨150040)综述了多种大型真菌原生质体分离和再生技术，并分析了各因素对原生质体分离和再生的影响，为今后大型真菌的菌种选育和转基因研究提供理论基础。大型真菌；原生质体；分离；再生大型真菌营养丰富，药用价值突出，自古以来深受人们喜爱，其主要包括食用菌和药用菌两部分。食用菌含有丰富的糖类、多种蛋白质、维生素和不饱和脂肪酸，味道鲜美，保健功能强。如木耳清爽可口，是“素中之荤
中国林副特产 2015年4期2015-01-26
- 秦巴蛹虫草原生质体的制备及再生条件研究
0)秦巴蛹虫草原生质体的制备及再生条件研究马跃腾，杜双田，丁 建，纪晓朋，鲍 蕊，李 珍(西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌 712100)【目的】 研究秦巴蛹虫草原生质体制备及再生的最适条件，建立高效制备和再生原生质体的方法。【方法】 以秦巴蛹虫草无性型菌株CM-16为材料，研究细胞壁裂解酶种类、酶解时间、酶解温度、菌丝体菌龄及稳渗剂种类对原生质体制备及再生效果的影响，并在单因素试验结果基础上进行正交优化试验。【结果】 (1)以0.6 mol/L
西北农林科技大学学报（自然科学版） 2015年9期2015-01-09
- 丹参悬浮培养细胞原生质体的制备和活力检测
12100植物原生质体是被脱掉了细胞壁、仅有质膜包围、裸露而生活的植物细胞。质膜在生命活动中的作用极为重要，例如信息传递、能量转换、物质运输等生命现象都与质膜有密切的关系[1]。原生质体裸露而具生活力的特性为与植物质膜功能有关的研究提供了有利的条件，已在细胞水平上揭示了一系列生命过程的本质[2]。植物对诱导子的抵抗反应是在细胞水平上进行的，在整体水平上进行研究受到了各种干扰，而用原生质体作为材料则可排除干扰，对于阐明植物抗逆性的生化过程及在细胞水平上所发生
生物工程学报 2014年10期2014-10-31
- 篮子鱼内脏粗提液制备长心卡帕藻和细齿麒麟菜原生质体的初步研究
宽新的途径。而原生质体的获得是进行细胞工程繁育,细胞融合等的重要前提,也为定向改良提供技术支撑。20世纪80年代,有关海藻原生质体研究有很多报道[17-22],但因诸多条件的限制,所制备原生质体效率都不高,大多未能用于海藻繁育的实际应用。近年来,Reedy[23]和 Yeong[24]分别制备出紫菜和江蓠的原生质体。Cheney[25]利用孢子制得原生质体,并通过细胞融合的方法获得了麒麟菜细胞融合体,获得了生长速率高的融合体植株。这为通过麒麟菜原生质体,进
海洋科学 2014年5期2014-06-26
- 棘孢小单孢菌原生质体制备条件的优化
棘孢小单孢菌原生质体制备条件的优化邱小明1，刘志琼2(1.漳州职业技术学院 食品与生物工程系，福建 漳州 363000；2.上海皑博生物科技有限公司，上海 201620)对棘孢小单孢菌() 原生质体制备条件进行了研究，研究表明：将棘孢小单孢菌的孢子接种到种子培养基培养36～48h（种液变为微红色），转接于含有0.3%Gly的抑制细胞壁合成培养基中继续培养48h，加入终浓度为15mg/ml的溶菌酶，37℃，酶解90min得到优化的原生质体制备条件，此时原生
漳州职业技术学院学报 2014年2期2014-03-26
- 原生质体紫外诱变选育达托霉素高产菌株
的最佳替代品。原生质体由于去除了外壁障碍，因而对各种诱变剂敏感性较强，往往正突变率高［5］，近年来原生质体诱变育种技术被广泛应用。王晓蕾等［6］通过紫外诱变筑波链霉菌原生质体，筛选得到1株高产菌株，与出发菌株相比，该菌株的他克莫司平均发酵单位提高51.4%。朱林东等［7］通过紫外诱变始旋链霉菌11－2原生质体，获得高产突变株ZP－07，普那霉素产量比出发菌株提高101.3%。而目前原生质体诱变选育达托霉素高产菌株尚未见报道。作者研究了达托霉素产生菌玫瑰孢链
化学与生物工程 2014年5期2014-03-21
- 葡萄愈伤组织制备原生质体的影响因素研究
俊 吴月燕植物原生质体是一种独特无壁的单细胞体系，在农业应用尤其在作物品种改良方面，原生质体再生体系的建立是育种目的得以实现的关键因素。原生质体再生培养在许多有经济价值的物种中已获成功，而仍有许多重要农业品种并未研究清楚，包括木本类、谷类、豆类及葡萄。葡萄生长周期长、遗传背景复杂、基因数量多且多为杂合状态，以致常规育种工作进展缓慢，品种改良在一定程度上受到制约，而原生质体杂交技术则为克服这一障碍开辟了一条可能的新途径。以葡萄原生质体为材料获得再生植株从19
果树学报 2013年3期2013-11-18
- 皮壳青霉原生质体制备及其形成方式研究
展，丝状真菌的原生质体技术已广泛应用于生物化学和遗传育种等诸多领域，尤其应用于原生质体制备、诱变技术进行菌种改良，为进一步研究微生物生理活性提供了有利条件。在生物催化技术日新月异的今天，丝状真菌以其在抗生素、酶制剂等多方面所具有的广泛应用价值和市场前景，正不断成为微生物催化技术所研究的新焦点，并可能成为具有产生巨大潜在食品医药价值的新颖化合物能力的微生物类群［1］。作为1株具有潜在生物催化能力的疑似菌株，研究表明皮壳青霉(Penicillium crust
微生物学杂志 2013年1期2013-07-23
- 玉米、小麦、水稻原生质体制备条件优化
草叶片[7]及原生质体[8-10]等。原生质体具有一致性，是比较均一的去除细胞壁的单细胞群体。原生质体处于相同的分离周期，导入的外源基因表达具有较好的同步性；同时不需进行长时间的组织培养，制备检测过程仅需2 d 时间。原生质体瞬时表达体系为研究基因亚细胞定位和基因表达的调控提供了一种方便而有效的实验系统。因此，原生质体瞬间表达系统至今已广泛应用于各种研究，包括生产有用的代谢产物[11]、多倍体的产生[12]及植物信号机制研究等[13-16]。1960年，C
生物工程学报 2013年2期2013-06-30
- 狗头枣叶片原生质体分离研究
。但有关狗头枣原生质体分离至今未见报道。本文研究的目的是通过正交设计探索狗头枣叶片原生质体分离的最佳酶液浓度和甘露醇浓度，为狗头枣叶片原生质分离提供实验依据。1 实验材料与方法1.1 材料实验用材料为按陈宗礼［3］等方法培养25 d 狗头枣组培苗。1.2 方法实验设计:按三因素四水平设计实验，分别设计纤维素酶(sigma)0.1 g/L、0.25 g/L、0.5 g/L、1.0 g/L 四个浓度水平;果胶酶(sigma)0.2 g/L、0.3 g/L、0.
中国野生植物资源 2013年3期2013-04-20
- 适合膜片钳电流测定的金铁锁原生质体制备技术
5］制备金铁锁原生质体，并利用全细胞电流记录手段比较了两种方法获得的原生质体的质量，为后续探讨药用植物与其他植物在细胞膜离子通道上是否存在差异提供合适的研究材料。1 材料与方法1.1 材料与试剂金铁锁愈伤组织继代周期和培养条件按照参考文献［1］进行，培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+2，4-D 0.5mg/L。纤维素酶（Cellulase）R-10，购于上海三杰生物技术有限公司；纤维素酶RS，购于Yakult Honsha（Japan）；果胶酶（Pe
大连工业大学学报 2012年1期2012-09-18
- 阿维链霉菌原生质体制备方法的研究
年代以来，各种原生质体操作技术己成为工业微生物育种的重要手段，并取得了较大的成就。以微生物原生质体为材料的常见育种方法有原生质体再生育种、原生质体诱变育种、原生质体融合育种及基因组重排育种等。笔者围绕原生质体制备的方法，以工业阿维链霉菌为研究对象，进行了原生质体制备的研究，旨在为阿维菌素菌种选育提供理论支持和技术帮助。1 材料与方法1.1 材 料1.1.1 供试菌株 阿维链霉菌工业生产菌株Z1，由武汉天惠生物研究所提供。1.1.2 培养基 链霉菌孢子培养基
湖南农业科学 2012年7期2012-07-10
- Annexin V法检测盐胁迫下烟草原生质体的早期凋亡1)
样复杂，尤其在原生质体程序化死亡检测中受到限制，所以一般常用的方法包括DNA梯状条带法、末端脱氧核苷酸转移酶生物素dUTP缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase－mediated dUTP nick end labeling reaction，TUNNEL)、膜联蛋白 V(Annexin V)法等。并且需要2种以上的方法结合使用。Annexin V由于能够与程序化死亡早期细胞的细胞膜结合，被广泛应用于动物
东北林业大学学报 2012年9期2012-07-02
- 毛木耳原生质体制备与再生条件的研究*
130118）原生质体技术是为食用菌细胞生物工程育种提供了新技术，在食用菌育种中具有明显的开拓性[1、2]。在木耳属中大量栽培的有木耳和毛木耳2个种，但是有关原生质体的研究却多集中于栽培量最大的木耳上，而对产量仅次于木耳的毛木耳的研究却较少[3－6]。本试验对影响毛木耳原生质体制备与再生的若干条件进行研究，旨在建立起最佳的毛木耳原生质体制备、再生体系，为进一步开展毛木耳等木耳属食用菌的遗传育种研究提供技术支持。1 供试菌株供试菌株由吉林农业大学园艺学院提供
中国食用菌 2012年3期2012-05-30
- 不同培养方式和pH对草地早熟禾原生质体分裂和生长的影响
种优势品种。以原生质体培养为基础和前提条件的体细胞杂交技术不失为选育草地早熟禾杂种细胞可行而有效的育种途径之一。Vander等［7］开创了草地早熟禾原生质体培养的先河，Kisten等［8］的研究进一步奠定草地早熟禾原生质体培养的基础，但目前来看，早熟禾体细胞杂交技术还不成熟，研究相对不够深入，仅获得一些阶段性成果［9，10］。实验以草地早熟禾午夜2号（MidnightⅡ）、新格莱德（Nuglade）和橄榄球2号（RugbyⅡ）3个品种的优质愈伤组织为材料，
草原与草坪 2012年1期2012-05-13
- 微拟球藻原生质体制备与再生
起步,其中微藻原生质体的制备是基础。本文旨在寻求一种高效简便的海洋微藻原生质体制备和观察方法,从而为在微藻中进行基因工程操作奠定基础。微拟球藻(Nannochloropsis oculata)是单细胞真胞藻,属真眼点藻纲,长2～5 µm[1-3],广泛分布于海水、淡水中。它不仅被广泛用于水产动物的饵料[4],还是许多高附加值产品的重要来源,如蛋白、色素、多不饱和脂肪酸等[5],是一个具有较高经济价值的海洋藻种,也是进行遗传育种改造的良好材料。本研究在 Ch
海洋科学 2012年2期2012-03-14
- 人参皂苷F1转化菌株的原生质体诱变育种
化能力不稳定。原生质体诱变技术是一种行之有效的菌种选育技术，由于微生物原生质体去除了细胞壁，外界的物质很容易穿透细胞膜进入细胞内，造成原生质体对外界各种诱变因子的敏感性大大增强，应用诱变剂对原生质体进行处理，有可能在短期内获得产量高、生产性能好的菌株。本实验通过对菌株2246原生质体制备和再生过程中的几个重要影响因素进行研究，确定了原生质体制备和再生的最佳条件，并对原生质体进行了亚硝基胍(NTG)复合紫外诱变，以期提高菌株2246将GRg1转化为GF1的能
微生物学杂志 2012年1期2012-01-12
- 里氏木霉40359原生质体制备条件研究
酸二乙酯处理和原生质体融合等方法，使酶的活力得到很大的提高[2]。原生质体没有细胞壁，对诱变剂反应灵敏，容易得到正突变株，是得到优良菌种的有效方法。所以原生质体的制备研究是有必要且有应用价值的研究。本文对影响里氏木霉（Trichoderma reesei）40359原生质体制备和再生的条件：包括菌龄、水解酶液的种类及浓度、酶解温度、酶解时间、再生培养基的稳渗剂进行了研究。得到了较好的里氏木霉原生质体制备的条件，为进一步的育种工作奠定基础。1 材料与方法1.
东北农业大学学报 2011年8期2011-07-09
- 黑木耳菌丝原生质体的制备﹑再生及单核鉴定研究
酶分离了褶皱菌原生质体。原生质体技术开始应用于食用菌研究领域[2]。近年来，原生质体技术取得了较大进展，而原生质体的制备与再生是研究原生质体融合及单核杂交技术的前提条件。本文研究了黑木耳菌丝分离原生质体的主要酶解条件，再生条件及单核化，为以后培育新品种及基因工程研究等奠定基础。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 供试菌株黑木耳菌株黑29由黑龙江省微生物所提供。1.1.2 培养基PDA液体培养基：马铃薯200 g（煮汁），葡萄糖 20 g，蛋白胨 3 g，
东北农业大学学报 2011年8期2011-02-20
- 链霉菌11371原生质体的制备与再生
的产量，需进行原生质体和分子生物学等技术研究，原生质体的制备与再生是研究的前提和基础。但是不同微生物的细胞壁组成各不相同，所以制备其原生质体的最佳条件也存在着很大差异。本实验通过研究摸索制备原生质体的菌丝菌龄、酶浓度、酶解温度等条件，获得制备原生质体的最佳条件，初步确定了链霉菌11371制备与再生的最佳条件，为链霉菌11371以原生质体为材料的各种研究提供操作平台。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试验菌株不吸水链霉菌梧州新亚种(Streptomyce
微生物学杂志 2011年5期2011-01-12
- 红麻原生质体分离条件的优化
要意义[2]。原生质体融合是转移基因组、获得遗传重组的一种新方法，也是实现胞质基因重组的途径，可以克服传统育种技术的周期长、远缘不亲和等缺点[3]。分离高质量原生质体是进行原生质体融合的前提，而原生质体产量和活力在很大程度上取决于材料来源、水解酶组合、酶解时间等因素[4-5]。目前，国内外对植物红麻原生质体的制备、纯化及融合的研究很少。本文对影响红麻原生质体产量、活力的因素进行了初步探讨，旨在确定红麻原生质体分离的适宜条件，为进一步利用细胞融合技术改良红麻
大连工业大学学报 2010年4期2010-09-26
- 米曲霉F16原生质体的制备和再生研究
芬米曲霉F16原生质体的制备和再生研究刘源慧 郑 毅 王 娅 邓琳芬福建师范大学生命科学学院目的：研究菌龄、酶液组成、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂、培养基成分等因素对米曲霉F16原生质体制备和再生的影响。结果表明，米曲霉原生质体制备和再生的最佳条件是：菌龄15h，酶液为0.75%纤维素酶、0.75%蜗牛酶、0.5%溶菌酶的混合酶液，酶解时间2.5h，温度为28℃，最适原生质体再生培养基为含有0.6mol/L NaCl的PDA培养基。米曲霉 原生质体 制
海峡科学 2010年10期2010-01-08
- 草地早熟禾新格莱德胚性愈伤组织原生质体培养及植株再生的研究
本材料,通过以原生质体培养为基础的细胞融合技术来改良草地早熟禾其他常见栽培品种的性状特性,获得杂种优势后代,达到草地早熟禾优良品种选育的目的。迄今为止,细胞融合技术已成为改良植物性状的重要手段,而从原生质体获得再生植株是进行细胞融合的先决条件[1]。Vander等[1]建立了草地早熟禾的原生质体悬浮培养体系,获得了白化苗;随后Kirsten等[2]也建立了草地早熟禾品种“Geronimo”的悬浮培养体系,并以此悬浮细胞体系为材料获得原生质体和再生植株。本研
草业学报 2010年2期2010-01-02