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引物

  • 聚焦关键能力,优化高考复习 ——以高中生物学“PCR引物”试题归类分析为例
    了大量以“PCR引物”为背景的试题,不仅考查PCR 实验本身,还深入到通过PCR 技术解决基因工程操作中遇到的实际问题,如给目的基因加上限制酶识别序列或制备融合基因等。但高中生物学教材对引物的概念、利用引物的必要性、如何设计或选择引物、如何利用引物初步判断扩增的DNA 是目的片段、引物与退火温度的关系等问题描述较少。下面通过对历年高考试题、模拟试题进行归类与分析,巩固基础知识,培养学生关键能力,为教师教学提供参考。1 引物的设计【例1】(2017·江苏)设

    中学生物学 2023年8期2024-01-02

  • 核桃过敏原成分PCR 方法的建立
    码序列上设计新型引物，利用荧光定量PCR 方法检测食品中的核桃过敏原，检测限为2.5 pg 核桃DNA，与ELISA 分析比较，该方法在核桃的痕量检测中显示出更高的灵敏度和可靠性。PCR 法在复杂食品中过敏原的定量分析及物种鉴定方面，具有其他方法无法比拟的优点，这使PCR 方法在动植物源性食物过敏原检测方面，存在极大的优势，适合国际法规所要求的食品中痕量过敏原的检测原则[14]。在所有核桃过敏原中研究最多的是英国核桃中的Juglans Jug r 1，一种

    农产品加工 2023年10期2023-06-21

  • 例谈基于PCR的基因定点突变技术
    叠延伸PCR、大引物PCR等新型PCR技术，但不少一线教师对其理解不够透彻。除此之外，重组PCR、环状质粒PCR等也能对基因进行定点诱变，其原理不完全相同，使用情境也各有侧重。本文以基因定点突变技术为线索，将相关的几种PCR技术串联在一起，帮助一線教师拓展视野，并提供教学素材。1 基因定点突变技术的研究意义人类很早就意识到基因突变、基因重组等可遗传变异对进化的重要作用，但是传统的基因突变和基因重组具有不定向性，极大地延长了基因向人类需求进化的时间。转基因技

    中学生物学 2023年2期2023-05-30

  • 基于等位基因特异性PCR 技术检测Sw-5b 基因
    b-f1/r1 引物扩增抗病基因型材料和感病基因型材料。Sw-5b-f1:5'-AACCACTAG GGGCAGTCCTT-3'，Sw-5b-r1:5'-CTCACTATGTGGC TGCTCCA-3'。将获得的片段进行克隆和测序。PCR反应总体积为25 μL，模板DNA 40 ng，Taq DNA 聚合酶0.5 U，dNTPs（10 mmol·L-1）0.5 μL，10×PCR 缓冲液2.5 μL，5'端引物（10 μmol·L-1）2.5 μL，3'端

    天津农业科学 2023年4期2023-05-06

  • 乌苏里拟鲿SCoT多态性引物筛选
    鲿80条SCoT引物进行多态性及其最佳退火温度筛选，从中得出26条具有多态性且条带清晰的引物，共扩增出135条条带，其中多态性条带86条，占总条带数的63.70%，多态百分率为25%～100%，最佳退火温度为47℃～63℃。该研究结果为SCoT分子标记技术在乌苏里拟鲿相关研究中的应用提供了参考。乌苏里拟鲿（Pseudobagrus ussuriensis）俗称牛尾巴、招财鱼等，属鲇形目（Siluriformes）、鲿科（Bagridae）、拟鲿属（Pseu

    中国水产 2023年1期2023-02-22

  • DNA引物合成起始的分子基础
    始期间，寡核苷酸引物由引物酶从头合成，随后由复制聚合酶延伸以完成基因组复制。引物酶-聚合酶（Prim-Pol）超家族是一组多样性的引物酶，包括复制型引物酶和参与适应性免疫的与CRISPR相关的引物酶-聚合酶（CAPPs）。尽管对这些酶的活性了解很多，但引物酶用于启动引物合成的精确机制尚未阐明。在此，研究人员确定了通过CAPP启动引物合成的分子基础，并表明这一机制在复制型引物酶中也是保守的。引物起始复合物的晶体结构揭示了在合成第1个磷酸二酯键之前，进入的核苷

    广东药科大学学报 2022年3期2023-01-04

  • 高中生物学PCR技术中“引物”相关问题归类分析
    题中出现了大量与引物有关的试题，而现有高中生物学教材只提及PCR 技术需要引物。为什么需要引物？引物是什么？引物的作用是什么？引物的碱基序列如何设计？PCR 循环时需要多少引物？如何选择引物和判断引物的互补链？引物与PCR 反应时复性温度的高低和时间长短有什么关系？这些相关问题在教材中并未提及，需要教师对上述相关问题进行归类分析。笔者在基因工程专题的复习过程中构建了以引物为核心的知识网络图（图1），培养学生学科内知识的综合能力，拓展学生视野，提高学生的科学

    生物学通报 2022年1期2022-11-22

  • 利用荧光SSR标记构建欧李种质分子身份证1)
    因组DNA提取与引物筛选叶片基因组DNA的提取采用CTAB法[23]，加入30～50 μL TE-buffer，紫外分光光度计和0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，稀释至30 mg·L-1保存备用。试验所用的SSR引物参考欧李近缘种属李属的樱桃、桃及杏上发表的引物[24-29]，分别进行琼脂糖凝胶电泳检测，从21对引物中筛选出条带清晰、多态性高的13对SSR引物(表2)，由北京鼎国昌盛生物技术有限公司合成，用FAM(蓝色)荧光修饰上游引物5’端，对19份

    东北林业大学学报 2022年10期2022-11-07

  • 20个玉米自交系SSR指纹图谱的构建
    R扩增所需SSR引物由上海生工合成，溶解后置于-80℃贮存备用。反应体系：每20μL体积中含1×EasyTaq Buffer，0.4 mmol/L dNTP Mix，SSR引 物(正 向 引 物 和 反 向 引 物)各0.25μmnol/L，1U EasyTaq DNA聚合酶，20 ng DNA模板，反应液上加盖一滴矿物油，于ABI 9700型PCR扩增仪上进行扩增。反应程序：94℃预变性5 min，1个循环；94℃变性40 s，58℃退火40 s，72℃

    农业技术与装备 2022年9期2022-10-21

  • 基于跨反向剪接位点引物特异性检测circRNA的PCR方法
    接位点两侧的背向引物进行qRT-PCR已被广泛用于检测circRNA的表达水平，但使用常规背向引物无法特异地扩增发生可变剪接环化时被包含的circRNA，所以开发一种适用于发生可变剪接环化的circRNA的定量分析方法至关重要。逆转录PCR（RT-PCR）、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）是验证circRNA并分析其表达量简便、快速的方法，其关键在于引物设计的位置。由于circRNA和线性RNA序列相同，为避免扩增出线性序列，circRNA验证时需要跨

    生物技术通报 2022年5期2022-06-10

  • 甜菜全基因组SSR引物的筛选与评价
    技术，寻找合适的引物，这对甜菜遗传图谱和指纹图谱的构建、遗传多样性的鉴定等分子标记辅助育种具有重要意义[2]。缺乏理想的分子标记工具和基因组资源是阻碍甜菜遗传研究和分子育种发展的重要因素。近年来，基因组学不断发展，利用分子标记分析种质资源遗传多样性和亲缘关系已经在多种重要作物上广泛开展[3]。另外也有多种分子标记，如AFLP[4]、SRAP[5]、RAPD[6]、SSR[7]、ISSR[8]、SNP[9]以及 SCoT[10]等应用于遗传多样性分析，在众多

    中国农学通报 2022年12期2022-06-01

  • 玉米品种德美亚多重SSR-PCR系统的建立及应用
    系中加入多对反应引物，扩增出多个目的条带的技术。由于该技术具有快速高效、低成本等优点，目前在生物学的各个领域已得到广泛的应用[9-12]。因此本研究的主要目的在于利用SSR标记，针对本公司主推不同系列的‘德美亚’品种，筛选具有多态性的SSR 引物，并组建多重引物组合，将多重PCR技术应用到玉米种子纯度鉴定中，制定出一套玉米品种纯度鉴定方案，指导大田生产。1 材料与方法1.1 材料选用本公司提供的‘德美亚’杂交种及其亲本为试验材料，‘德美亚’品种主要分为3

    中国糖料 2022年2期2022-04-06

  • 花菜类杂交种纯度鉴定SSR 核心引物筛选
    往需要进行大量的引物筛选工作，才能找到适合的鉴定引物[3]。确定一套适于纯度鉴定的核心引物，并构建品种纯度鉴定体系，对花菜类种子的纯度鉴定至关重要。有了核心引物就不再需要进行繁琐的引物筛选，即使对未知品种，也只需进行少量的筛选，就能迅速找到合适的鉴定引物[4]。本研究通过对70 个花椰菜和青花菜材料的DNA 指纹分析，确定适于花菜类杂交种纯度鉴定的核心引物，构建了花菜类杂交种纯度鉴定 体系。1 材料与方法1.1 试验材料试验材料选取F1材料70 份，其中青

    中国种业 2021年11期2021-11-25

  • 非洲猪瘟病毒LNA引物PCR检测方法的建立及优化
    FV检测中常用的引物设计靶标[7]。PCR方法是目前ASFV快速诊断中广泛推荐使用的核酸检测技术[8]，贾云飞等[9]针对非洲猪瘟病毒p72基因建立了非洲猪瘟病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法，崔贝贝等[10]基于E184L基因建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法。荧光定量PCR方法检测灵敏度高、特异性强，但所用仪器和试剂价格昂贵，成本高，且对操作人员要求严格，不利于其在条件一般的实验室或基层兽医临床检测中大规模推广应用；常规P

    中国农学通报 2021年29期2021-11-13

  • 非洲猪瘟病毒LNA引物PCR检测方法的建立及优化
    FV检测中常用的引物设计靶标[7]。PCR方法是目前ASFV快速诊断中广泛推荐使用的核酸检测技术[8]，贾云飞等[9]针对非洲猪瘟病毒p72基因建立了非洲猪瘟病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法，崔贝贝等[10]基于E184L基因建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法。荧光定量PCR方法检测灵敏度高、特异性强，但所用仪器和试剂价格昂贵，成本高，且对操作人员要求严格，不利于其在条件一般的实验室或基层兽医临床检测中大规模推广应用；常规P

    中国农学通报 2021年29期2021-11-13

  • SSR-based hybrid identification, genetic analyses and fingerprint development of hybridization progenies from sympodial bamboo (Bambusoideae, Poaceae)
    取的30对SSR引物及其序列等信息Thirty SSR primer pairs were used for the PCR amplification of the genomic DNA of nine clones (A1-A9) ofD.latiflorusand 10 clones (E1-E10) ofB.chungii. PCR products were detected using gel electrophoresis. Primer

    南京林业大学学报（自然科学版） 2021年5期2021-10-13

  • 鄱阳湖流域蚌类环境DNA宏条形码引物的筛选验证*
    A识别片段来设计引物.环境DNA宏条形码引物在监测、定量过程中存在较大偏好性，选择适合的引物可识别生态群落中不同的物种.但环境中细胞外源的DNA会不断降解，在保证物种分辨率的前提下，选择的分子标记越短越好.所以使用宏条形码技术分析环境DNA的研究中，为了避免在不同分类种群中放大偏差，选择设计较短的、高度保守序列片段的引物是极其重要的.如果实验设计的引物保守度低和特异性不足的话，容易引起碱基错配甚至引起假阳性和假阴性的实验结果.蚌的分布呈明显的地域性特征，北

    湖泊科学 2021年4期2021-07-07

  • 科学思维视角下PCR 的深度学习
    括：缓冲液、一对引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA、4 种dNTP。反应过程包括：高温变性、低温复性、中温延伸。反应结果：在短时间内，以指数形式扩增DNA 片段。2.以题说题，提升分析与综合能力【例1】（2017 年，江苏卷，第33 题节选）（题干略）（2）设计一对与MT 基因两端序列互补配对的引物（引物1 和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的__________位点。设计引物时需要避免引物之间形成__________，而造成引物自连

    教学考试(高考生物) 2021年2期2021-05-31

  • 柑橘黄龙病早期诊断的PCR检测技术优化
    靠性较低[9]，引物与DNA模板浓度的不同也会对检测结果产生较大的影响[10]。本实验在前人研究基础上选用使用率较高的几对引物进行比较，通过对PCR体系中的各物质浓度进行优化改进，提升引物的特异性与灵敏度[11]，筛选用于黄龙病菌检测的引物，优化检测反应体系，提高检测的准确度，为大规模均一化鉴定柑橘黄龙病提供一种快速低成本的方法。1 材料与方法1.1 材料黄龙病阳性样品：采自江西赣州某黄龙病重症果园的具有典型黄龙病斑驳症状的脐橙叶片。黄龙病阴性样品：为本实

    浙江农业科学 2021年4期2021-04-02

  • 基于简化基因组数据开发岭南青冈微卫星引物
    对某一物种设计的引物通常只适用于这一物种及其近源种。随着近几年新一代测序技术的快速发展，基于高通量测序技术可在短时期内以较低成本获得大量SNP(Single nucleotide polymorphism)[4]。例如，近几年出现的简化基因组测序技术(restriction-site associated DNA sequence,RAD-seq)现已在群体遗传学、保护生物学及谱系地理学中开始广泛使用[5]。目前微卫星在保护生物学及群体遗传学中还具有一定的

    植物研究 2020年4期2020-07-13

  • 甜菜分子标记InDel-PCR引物的筛选
    失位点的PCR-引物，其本质仍属于长度多态性遗传标记[7-8]。InDel作为一种高通量遗传标记，具有基因组内分布广泛、带型简单、重复性好、准确性高、变异稳定、密度高、数目众多等特点，与其他分子标记相比，在基因组的同一位置出现相同大小的InDel标记的概率非常低，避免了由于特异性和复杂性导致的后续分析模糊；在作物种质资源遗传多样性分析中，可显著提高其重现性、准确性和分辨率，因此能解决引种材料中名称混乱不清、种质资源整理困难、亲本材料间遗传重复度高等问题[7

    中国糖料 2020年2期2020-04-09

  • 基于SSR荧光标记进行酒花品种鉴定
    利用30对SSR引物对11个酒花品种进行鉴定；HORREO等[21]利用毛细管电泳对生长在西班牙西北部(加利西亚)的野生啤酒花进行遗传多样性分析。目前SSR分子标记主要使用聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳2种检测平台，由于毛细管电泳具有高效、快速、微量、自动化等优点，已成为SSR分子标记的主流检测平台。然而毛细管电泳检测时要求扩增片段标记荧光染料，尤其在引物筛选阶段，如果对上百对引物进行荧光标记则引物成本较高，影响实际应用。TP-M13-SSR(simple

    食品与发酵工业 2019年20期2019-11-14

  • 桑树ISSR引物最适退火温度的探究*
    CR的退火温度与引物长度、碱基组成和引物浓度有关，ISSR引物的退火温度差异很大是ISSR-PCR反应的突出特点。对于长度低于20bp的引物，Tm值可以按Tm=4(G+C)+2(A+T)计算，ISSR引物一般少于20bp，适用于该公式[1]。但是在实验过程中，往往根据Tm值得不到清晰稳定的扩增条带，因此在正式实验之前，有必要确定每个ISSR引物的最适退火温度。本试验在已筛选出桑树ISSR-PCR最佳反应体系的基础上，对适合桑树体系的5条ISSR引物的最佳退

    蚕学通讯 2019年3期2019-11-12

  • 有关PCR扩增过程中的疑虑与剖析
    大几百万倍。3 引物的概念及PCR过程使用引物的原因在PCR技术中，扩增目的基因的方法其实就是必修2中的DNA复制。那么，复制为什么要引物？这引物的化学本质是什么？复制完成后引物到哪里去了？……学生会产生出一串关于引物的疑问。在PCR过程中之所以需要引物是因为在DNA复制中DNA聚合酶仅仅可以把新的脱氧核苷酸加到已有的DNA链上，据此可知：引物其实就是引子，是一小段单链DNA（体内DNA复制所用的引物是RNA，RNA引物形成后，由DNA聚合酶Ⅲ催化将第一个

    中学生物学 2019年7期2019-10-17

  • 麦芽品种多重荧光SSR标记指纹数据库的构建
    ]利用5对SSR引物对国内外8个麦芽品种进行了区分，但文中并未给出具体的引物序列信息，品种数量较少，且使用的聚丙烯酰胺凝胶电泳存在分辨率低、无法准确读取扩增片段大小等缺点[14]，因此无法进行应用。本实验室前期基于TP-M13荧光标记结合单重荧光PCR技术可对23个麦芽品种进行区分[15]，但由于毛细管电泳的试剂及引物成本较高，该法在大批量、多批次样品检测时存在检测周期长、成本高等缺点。随着电泳技术的发展，多重荧光PCR与毛细管电泳多重荧光检测技术的结合刚

    食品与发酵工业 2019年18期2019-10-09

  • 用于海洋沉积物中厌氧氨氧化细菌分子生态学研究的引物比较❋
    基因的两对特异性引物(Amx368F/Amx820R和Brod541F/Amx820R)在研究海洋、河口等生态环境中厌氧氨氧化细菌的丰度分布以及群落结构时应用较为广泛[23-26]。据报道，Amx368F是定向扩增厌氧氨氧化细菌所有属的前引物，之前的研究发现，Amx368F可以十分高效地覆盖厌氧氨氧化细菌[22, 27]，而Brod541F更专注于Ca. Scalindua属，同时，后引物Amx820R侧重于Ca. Scalindua属、Ca. Broca

    中国海洋大学学报（自然科学版） 2019年9期2019-07-16

  • 新疆主栽骨干棉花品种指纹图谱构建及纯度鉴定
    12]采用SSR引物对51个常规棉品种进行了基因纯度鉴定、遗传聚类分析和品种特异性鉴定。聂新辉等[13,14]构建了新疆2013年前审定的51个新陆早常规棉品种和23个彩色棉品种的DNA指纹图谱，并进行了遗传多样性分析。近年来，利用SSR标记也构建了小麦[15]、水稻[16]、大豆[17]、玉米[18]、烟草[19]等农作物的DNA指纹图谱数据库。【本研究切入点】当前棉花品种纯度和真实度多是通过田间小区种植的方法鉴定的，此法费时费力，操作复杂，且受环境影响

    新疆农业科学 2019年2期2019-05-30

  • 明悉引物设计 参透PCR技术
    关键字 PCR 引物设计 题型解析PCR(Polymerase Chain Reaction)是一种人工合成DNA的聚合酶链式反应，PCR技术是高中生物学选修3《现代生物科技专题》模块的重点和难点之一，其基本原理和过程如图1所示。图1 PCR原理反应示意图[1]在教学实践中，教师一般采用动画演示或者绘图的方式阐释PCR的原理和过程。但是，学生在解决PCR实际问题时仍然会有很多困惑，其中最为突出的问题是PCR的引物设计。引物设计是PCR的核心，学生既可以通过

    生物学教学 2019年3期2019-03-22

  • 红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)Vtg基因实时荧光定量PCR分析的引物设计与评估
    R表达分析的相关引物，为今后分析红鳍东方鲀的 Vtg基因的表达谱、深入探讨河豚毒素在肝脏和卵巢中富集与分布奠定基础。1 材料与方法1.1 材料实验用18月龄的红鳍东方鲀50尾，采自大连天正实业有限公司。麻醉后，采集新鲜的红鳍东方鲀肝脏和尾鳍组织，立即储存在液氮中，然后在-80 ℃的超低温冰箱中储存备用。1.2 实验方法1.2.1 性别鉴定 将上述50尾红鳍东方鲀解剖，根据性腺发育的程度、形状和颜色进行性别鉴定，具体鉴别方法按照参考文献20、21的方法进行。

    河北渔业 2019年3期2019-03-22

  • GATA1不同激酶活性突变体质粒的构建及蛋白表达和亚细胞定位
    01）目的采用大引物法构建GATA1不同激酶活性突变体GATA1 S161A S187A （死型） 和GATA1 S161D S187D （激活型） 真核表达载体，并证实其融合蛋白在细胞内的表达及定位，旨在进一步探讨其生物学功能和潜在肿瘤治疗靶点。方法以GFP-GATA1 WT为模板，采用大引物法扩增S161A S187A、S161D S187D突变体片段，双酶切克隆至pEGFP-C1表达载体中，将重组质粒转染至HEK293中，经免疫印迹鉴定融合蛋白的表达

    中国医科大学学报 2018年1期2018-12-27

  • PCR过程中生成引物二聚体回收再利用的研究
    PCR）过程中，引物的 3’端不依赖模版相互作用生成大量非特异性产物，尤其是引物二聚体[1]。有研究报道，在两引物的3’端只要有一个碱基互补配对，30个循环即可生成引物二聚体[2]。许多实验通过引物的优化设计、控制反应条件、热启动和酶的优化等方法来减少引物二聚体的生成[3，4]，但引物浓度较高时，这些方法不能减少引物二聚体的生成。因此，引物二聚体被认为是PCR反应过程中的必然产物，严重干扰实时荧光定量PCR、反转录酶-聚合酶链式反应 （reverse tr

    江西医药 2018年8期2018-10-24

  • 16S rDNA特异性引物设计优化及其在淞江鲈体表微生物鉴定中的应用
    1203)PCR引物设计中，引物与模板结合的特异性是首要考虑要素．特异性不足时，引物容易与近似序列发生非特异性结合，产生不纯的扩增产物，在qPCR的时候也会影响定量结果．引物的特异性是保证理想PCR产物的基本条件．一般而言，较高的引物特异性容易得到单一的PCR产物，但是这并不总是符合实验设计的需求．从属水平上来看，利用16S rDNA分析各种微生物的相对丰度时，设计的引物就需要满足以下两个主要条件： 一是在属内具有较好的覆盖度，能够与属内绝大多数物种的DN

    复旦学报（自然科学版） 2018年1期2018-05-15

  • ONECUT1重组质粒构建及其对细胞应激相关基因表达的影响
    CR扩增的上下游引物，即上游引物序列为AATGGAATTCATGAACGCGCAGCTGACCATGG (内切酶为EcoRⅠ)，下游序列为GGCGAAGCTTTCATGCTTTGGTACAAGTGCTTG(内切酶为HindⅢ)。提取U251细胞总RNA，取1 μg总RNA，加入All-in-one cDNA Synthesis SuperMix 10 μL，RT-PCR扩增获得cDNA样本，扩增条件：25 ℃ 10 min，42 ℃ 30 min，85 ℃

    山东医药 2018年5期2018-03-15

  • 基于介观量子理论的最佳PCR引物浓度计算
    理论的最佳PCR引物浓度计算周德良，刘明坤，叶锋（北京旌准医疗科技有限公司，北京 100176）对PCR反应体系而言，引物浓度过高或过低对反应体系都存在严重的影响，只有合理的浓度区间才能对整个反应高效有序地进行发挥重要的作用.降低PCR引物间的量子效应有利于提高引物间PCR反应的独立性和确定性，故粒子自由程至少是相位关联长度的10倍，并由此可以得到引物反应浓度的上限；粒子非弹性散射的最大自由程是粒子运动的极限自由程，依此可以得到引物反应浓度的下限，从而确定

    黑龙江八一农垦大学学报 2017年5期2017-10-31

  • 玉米InDel标记20重PCR检测体系的建立
    38对InDel引物进行单重PCR评估,共得到192对扩增效率高、稳定性好的引物。根据软件评估结果、扩增质量、产物范围、染色体均匀分布原则从192对引物中优选出30对综合表现较好的引物形成扩增产物范围在80~200 bp和200~400 bp的两组核心引物组合,每套组合中有10对引物分布在不同染色体上。在核心引物组合的基础上综合考虑染色体分布、碱基片段范围、引物荧光颜色,逐一添加引物,最终形成两组玉米20重PCR体系,一组40重荧光标记毛细管电泳。玉米;I

    作物学报 2017年8期2017-08-22

  • 不同引物对和退火温度对盐生植物盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响
    30046)不同引物对和退火温度对盐生植物盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响白雪芹，杨瑞瑞，曾幼玲(新疆大学生命科学与技术学院/新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐 830046)【目的】以盐生植物盐穗木为材料，研究不同引物对和不同退火温度对盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响。【方法】设计扩增β-actin基因的两对引物，标记为β-actin1和β-actin2，分别建立这两对引物扩增盐穗木β-actin基因和特异性引物扩增该物种的过氧

    新疆农业科学 2017年2期2017-04-13

  • 呼吸道感染样本中IFITMs引物优化
    本中IFITMs引物优化1.济南大学-山东省医学科学院医学与生命科学学院（山东 济南 250200）2.山东省罕少见病重点实验室,山东省医药生物技术研究中心,山东省医学科学院(山东 济南 250062)左清利1,2鲁艳芹1,2韩金祥1,2目的优化干扰素诱导的跨膜蛋白（Interferon induced transmenmbrane proteins,IFITMs）的五个亚型基因，即IFITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5和IFITM10。方

    罕少疾病杂志 2017年2期2017-02-23

  • 兼并PCR技术反应条件的探索
    210095兼并引物是根据蛋白质的氨基酸序列与其对应基因的碱基序列之间的共线性关系设计出的引物[1]。克隆新蛋白基因时，可通过蛋白质序列的测定获取末端氨基酸序列信息，并依据其氨基酸序列，设计兼并引物进行PCR扩增。使用兼并引物进行PCR扩增是获得新基因和基因家族新成员的常见方法[2]，广泛应用于病毒检测、医学诊断等研究领域[3]。在基因家族的研究中，也可根据保守序列设计兼并引物进行PCR扩增，寻找基因家族的新成员[4]。由于遗传密码子的兼并性，特定氨基酸对

    河南大学学报（医学版） 2017年4期2017-02-07

  • 植物位点特异性甲基化研究的引物设计及PCR体系优化
    异性甲基化研究的引物设计及PCR体系优化王鹤潼1，2，宋婕3，崔伟娜4，曹霞5，6，何蕾3，贾春云1，惠秀娟1，台培东1，成智博1，刘宛1*（1.中国科学院沈阳应用生态研究所污染生态与环境工程重点实验室，沈阳 110016；2.辽宁何氏医学院，沈阳110163；3.辽宁大学，沈阳 110036；4.上海应用技术学院，上海 201418；5.沈阳农业大学，沈阳 110866；6.通辽市农业科学研究院蔬菜所，内蒙古通辽 028000）通过设计大量引物，探索在植

    农业环境科学学报 2016年9期2016-10-20

  • miRNA qPCR检测方法研究进展及其应用
    定量检测流程包括引物设计、反应体系设置、内参基因筛选等方面进行了深入探讨，并对miRNA定量检测研究方法的发展趋势进行了展望，以期为研究者进行miRNA qPCR定量检测提供参考。miRNA；stem-loop RT-PCR；poly（A）加尾法RT-PCR；延伸法RT-PCR；数字PCRmiRNA是真核生物体内普遍存在的一类非编码序列长度约22个碱基的单链小RNA分子，由特定发卡结构（Stem-loop）的前体剪切加工而成。成熟的miRNA与相关蛋白组成

    生物技术通报 2016年2期2016-10-13

  • 应用通用荧光引物筛选裸鼹鼠微卫星位点方法的建立
    3）应用通用荧光引物筛选裸鼹鼠微卫星位点方法的建立林丽芳1， 李 莉2， 肖 邦1， 程继帅1， 杨文静1， 丛 薇1， 赵善民1， 汤 球1， 崔淑芳1 （1. 第二军医大学实验动物中心， 上海 200433； 2. 第二军医大学教学保障处， 上海 200433）目的 建立使用通用荧光引物分步PCR法筛选裸鼹鼠微卫星位点的方法。方法 在特异性引物F链的5’端连接通用引物，先以特异引物R链和加长引物F链进行PCR，再加入通用荧光引物进行第二步PCR，最后使

    实验动物与比较医学 2016年1期2016-10-09

  • 哪些物质合成需要引物
    DNA合成需要引物原核和真核生物的DNA聚合酶都具有校正功能，必须核实前一个脱氧核苷酸正确后才会催化下一个脱氧核苷酸的加入。DNA聚合酶不能从无到有催化合成DNA。必须要有引物提供3′-OH[1]。1.1 线性DNA的合成 以真核生物染色体DNA为代表，复制时需要RNA引物。引物从几个到十几个核糖核苷酸不等，由引物合成酶催化合成。复制的特点是半保留复制，多起点双向复制，在复制起点处解旋，边解旋边复制。由于DNA聚合酶只能催化从5′→3′合成，提供3′端的

    生物学教学 2016年4期2016-08-15

  • TP-M13自动荧光法的改进及在美国山核桃品种鉴定上的应用
    现原有直接使用三引物方法扩增的有效性和可靠性较低，而经过改进的间接三引物法则有较大的实用价值，在此基础上进一步研究后认为混合三引物法在适当控制混合引物的对数和提高特异性后，在提高间接三引物法的扩增效率方面是可行的。自动荧光检测；TP-M13；美国山核桃；SSR简单序列重复（Simple sequence repeat，缩写为SSR），又称微卫星（microsatellite），是以1 ~ 6个碱基为基本单元的串联重复核酸序列，普遍存在和随机分布于所有已知真

    浙江林业科技 2015年5期2015-12-30

  • 苹果牛眼果腐病菌3个致病种LAMP检测方法的建立
    病种LAMP通用引物设计LAMP 引物设计主要针对靶基因的6 个不同区域，即基于靶基因3'端的F3c、F2c 和Flc 区及5'端的Bl、B2和B3区等6个不同位点设计4种引物。本研究根据明孢盘菌属特异性β-tublin基因和真菌通用引物ITS序列作为靶序列进行引物设计。1.3 最佳引物筛选1.3.1 LAMP 反应体系的配制 1 次反应量反应体系包括：2×反应缓冲液12.5 μL，引物FIP 1.0 μL（40 pmol）、BIP 1.0 μL（40 p

    生物技术通讯 2015年6期2015-11-29

  • 甲型H1N1流感病毒FAST-LAMP检测方法的建立
    HA基因设计一组引物，包括外引物、内引物、环引物及套内引物，套内引物的加入增加了引物与模板的接触位点，提高扩增效率，缩短检测时间。结果显示，FAST-LAMP检测法比普通LAMP检测法时间缩短45 min左右，比加入环引物的LAMP检测方法缩短20 min，大大缩短了反应的检测时间。检测灵敏度可达到1×102拷贝。FAST-LAMP是一种高效、更快的检测方法。FAST-LAMP；甲型H1N1流感病毒；检测环介导等温扩增技术（Loop-mediated is

    生物技术通报 2015年5期2015-10-24

  • 应用微卫星PCR技术鉴别中国林蛙
    多态信息容量高、引物通用性好、突变率高、共显性等特点[3-4]。本文采用微卫星鉴别技术，对长白山、黑龙江伊春、辽宁抚顺、吉林四海林场4个地区的林蛙开展了鉴别研究。1 材料1.1 仪器 1110型PCR仪(美国Bio-Rad公司);TGL型台式高速离心机(湖南星科科学仪器有限公司)；Dolphin-Doc凝胶成像分析仪(美国wealtec公司);JY-SP10水平电泳槽(杭州汇尔仪器公司)；电泳仪(美国Bio-Rad公司)；微型离心机(北京六一仪器有限公司)

    吉林中医药 2014年10期2014-08-09

  • 对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒检测及各基因型分析
    831R/F两对引物，前者只与感染型IHHNV毒株（Ⅰ型和Ⅱ型）结合，后者与非感染型IHHNV病毒株结合。为了更好地了解目前IHHNV的各种基因型，本研究根据IHHNV不同基因型的特异性引物，对一例进境南美白对虾亲虾进行IHHNV病毒分型检测，并对IHHNV各基因型序列进行同源性比对，为IHHNV各基因型序列分析提供更多的数据。2 材料与方法2.1 材料2.1.1 试验材料湛江地区某对虾养殖场随机采取进境南美白对虾亲虾3尾。2.1.2 试剂rTaq 反应酶

    质量安全与检验检测 2014年3期2014-05-28

  • 一种新的引物二聚体形成机制＊
    NA小沟上，导致引物二聚体和非目的DNA的扩增使结果的判断更加困难，尤其是对低浓度的样本进行精确定量时，很难分辨是否为非特异性扩增引起的假阳性结果，因此限制了该技术的应用［5］。本研究通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR对无模板引物对测试结果分析，阐明一种新的引物二聚体形成的机制，探讨SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的优化方案并测试定量检测乙肝病毒的效果。1 材料与方法1．1 试剂和仪器6mmol／L dNTPs（U 替换 T），5U／μL

    华中科技大学学报（医学版） 2014年1期2014-01-01

  • 适用于野生软枣猕猴桃遗传多样性分析的SSR引物筛选
    开发了大量SSR引物，但适用于野生软枣猕猴桃居群遗传多样性评价的SSR引物还较缺乏，在我们前期筛选的软枣猕猴桃引物基础上[7]，本研究进一步优化扩增条件，筛选出了多态性较好适合软枣野生居群分析的SSR引物，为该物种大格局遗传多样性研究提供了有效的分子工具.1 材料与方法1.1 材料和仪器从来自陕西眉县、户县、吉林露水河、天全县二郎山、陕西安康等5个软枣猕猴桃(Actinidiaarguta)野生居群中随机选择8份样本作为扩增筛选的样品.引物筛选完成后，从天

    中南民族大学学报（自然科学版） 2013年4期2013-12-22

  • 基于松属不同树种EST序列的马尾松SSR引物开发
    列的马尾松SSR引物开发王晓锋1,2， 季孔庶1， 何卫龙1(1.南京林业大学， 江苏 南京 210037； 2.湖南省林业科学院， 湖南 长沙 410004)利用松属5个树种的EST序列，分别树种查找SSR位点，采用Primer3.0软件进行引物设计。设计的5个树种的EST-SSR引物中：所占比例最高的均为三核苷酸重复，其次是六核苷酸重复，两者之和都达到了64%以上；四核苷酸重复所占比例均为最低。从设计的引物中分别不同树种各选取20对进行引物合成和通用性

    湖南林业科技 2013年1期2013-11-18

  • 不同溶解液对CYP1B1432密码子PCR引物稳定性的影响
    斯154003)引物是所有聚合酶链式反应(Polymerase chain reaetion，PCR)中必须使用的主要材料之一，引物的稳定性对PCR的结果有着重要影响，可以说是决定PCR成败的关键因素，而不同的引物溶解溶液对引物的稳定性有着重要影响，我们在进行CYP1B1432密码子(rs1056836)的PCR中就遇到了该问题。对于引物的稳定性，多数文献[1，2]从引物长度，解链温度(Tm)引物序列，引物二聚体及引物自由能等方面考虑，而没有见到关于引物溶

    黑龙江医药科学 2013年6期2013-10-09

  • ScYLV和SrMV的PCR引物优化设计
    行均离不开PCR引物的合理设计。可以说，PCR引物的合理设计是任何PCR反应能否进行及其产物的特异性、产率高低的关键。目前许多计算机软件如Primer Premier 3.0，Primer Premier 5.0，Oligo 6.0等均可用于引物的设计。但由于软件自身存在的局限性，其设计的引物并无法满足实验者不同需要。目前最常用的是计算机辅助设计，即实验者根据PCR引物设计的原则并结合自己的经验人工设计引物，然后选择合适的软件分析引物的合理性。1 材料和方

    中国糖料 2012年1期2012-09-10

  • 玉米SSR引物和甘蔗EST－SSR引物在芒属中的通用性研究
    筛选来开发SSR引物的成本高昂，并且因为通过公共数据库搜索来获得适用序列来开发芒属SSR引物的机会也小，因此根据SSR侧翼区序列保守性的特点，从现有近缘种的SSR引物中筛选获取可用于芒属植物扩增的SSR引物是一个现实选择［10］。Hernández等［10］考察了76对玉米（Zea mays）SSR引物在2份芒属杂交种中的扩增情况，并接着使用了11份材料开展多样性研究，结果表明玉米的微卫星引物在芒属中的通用性很高。钟智林等［13］比较了30对玉米SSR引物

    草业学报 2012年5期2012-08-20

  • 金黄色葡萄球菌rep-PCR指纹图谱分型技术反应条件的优化
    PCR即重复序列引物聚合酶链反应技术是根据基因组中的重复序列设计引物，扩增重复序列间的片段，通过电泳产生的特异性指纹图谱鉴别细菌基因组间的差异[2]。主要的重复片段主要分为基因外回文序列(rep)和肠杆菌科基因间重复序列(ERIC)两种。这种新方法相对于“金标准”的脉冲场电泳，操作简单易行，在实验室可广泛应用。但其结果的重复性和指纹图谱的清晰程度与实验条件密切相关。本研究针对两种不同的实验引物，以及引物浓度和退火温度进行优化，以期得到最佳的指纹图谱。1 材

    大连医科大学学报 2012年3期2012-01-17

  • 流动引物PCR高效筛选阳性XRCC1基因敲除小鼠细胞的方法
    行快速筛选，一个引物位于筛选标记中，一个引物位于同源臂外面，根据有无PCR产物鉴定阳性基因敲除细胞，这种筛选方法的缺点是没有阳性对照，从而导致筛选效率低下。本研究将野生型基因敲除位点内的20 bp DNA序列人工合成，加到基因敲除质粒嘌呤霉素抗性基因5’端，并设计与之配对的流动引物。流动引物为PCR下游引物，利用来自同源臂外DNA序列设计PCR上游引物，使用这对引物PCR扩增，野生型和基因敲除阳性细胞克隆都能够得到PCR产物。正常双倍体细胞只有一个PCR产

    大连医科大学学报 2012年2期2012-01-17

  • 通用引物多重PCR技术检测3种病原微生物
    00083)通用引物多重PCR技术检测3种病原微生物商 颖1，许文涛1,2，元延芳2，梁志宏2，石 慧1，翟志芳1，张雅楠2，罗云波1,2，黄昆仑1,2,*(1.中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083；2.农业部转基因生物食用安全监督检验测试中心(北京)，北京 100083)为寻找快速且准确的病原微生物检测方法，在普通多重PCR(polymerase chain reaction)技术的基础上研究一种新的通用引物多重PCR(universa

    食品科学 2011年10期2011-03-31

  • 优化多重PCR扩增效果的实验研究
    应体系中使用多对引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域进行扩增的过程，满足同时分析不同DNA序列的需要，尤其是在临床检测和科学研究时，在一个反应体系中能够同时检测多种目的DNA，这不仅能节省珍贵的实验样品，而且能使以往繁琐的操作变得省时省力，具有高效快捷、高度特异敏感、实验成本低等优点，具有普通PCR方法不可比拟的优越性。本研究采用Y染色体10对引物探讨了基因组DNA的多重PCR反应体系中各种因素对扩增结果的影响，优化了反应体系和反应条件，以期为应用

    河北医药 2011年11期2011-03-06

  • 应用随机PCR技术检测未知病毒基因序列的研究进展
    66000)随机引物PCR技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD;arbitrarily primed PCR,APPCR)是由Welsh、Williams于1990年几乎同时建立起来的一项DNA多态检测技术 。该技术以PCR为基础,利用一系列单一的人工合成的随机寡核苷酸链为引物,对所研究的基因组 DNA进行PCR扩增。在该技术问世的短短几年内,因其独特的检测DNA多态性的方式以及简便快速等特点而迅速渗透到分子生物

    中国兽医杂志 2010年5期2010-02-13

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