核酸酶
- 粘质沙雷氏菌全能核酸酶的研究进展
6000）全能核酸酶又称非特异性核酸酶 （Nonspecific nuclease，NU），可降解几乎所有形式的DNA 和RNA （包括单链、双链、线状、环状、天然以及变性的核酸），生成3～5 个碱基长度的5’-单磷酸寡核苷酸。全能核酸酶来源广泛，在动物、植物、细菌、真菌和病毒均有发现，到目前为止，已鉴定出30 多种不同来源的全能核酸酶，其中来源于粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）的全能核酸酶活力最强（下文无特殊说明，全能核酸酶均指来源
北方牧业 2023年13期2023-07-28
- 易错PCR定向进化技术提高蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10核酸酶活性的研究
10类蛋白具有核酸酶活性[1]，被认为与降解RNA类病毒有关[2]。蒙古黄芪病程相关蛋白-10(Astragalusmembranaceuspathogenesis-related protein-10，AmPR-10)由158个氨基酸残基组成，分子大小约为16.8 kDa。目前已有研究证明天然提取的和重组的AmPR-10都具有核酸酶活性，但是活力均偏低[3-4]，不利于更深入的研究及大范围的应用。酶分子的定向进化是由美国科学家Arnold F H于199
化学与生物工程 2022年2期2022-02-28
- 重组Pol D DNA聚合酶的纯化及其功能初步研究*
3′→5′外切核酸酶活性；同时发现，相比于双链DNA，DP1更容易降解单链DNA。研究发现大部分古菌中存在B家族(Pol B)与Pol D两种DNA聚合酶，若将细胞内的Pol B DNA聚合酶基因敲除，古菌依旧可以存活；若将细胞内的Pol D DNA聚合酶基因敲除，则古菌无法存活[9]。由此可见Pol D DNA聚合酶在古菌DNA复制过程中的重要性。相比于Pol A、Pol B等家族的DNA聚合酶，国内外对Pol D DNA聚合酶的研究仍然较少，多种古菌中
广西科学 2022年6期2022-02-09
- 肠炎沙门菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性测定
明质酸酶和胞外核酸酶等，这些酶能使细菌逃避宿主的免疫系统[5]。这些酶类可以固定在细胞外膜上，也可以释放到细胞外空间[6]。其中，胞外核酸酶是一种由人类、动物、细菌、真菌、寄生虫等多种生物分泌的酶类，能够降解环境中DNA或RNA的酶类，对于细菌的毒力、生物被膜的形成、黏附、侵袭以及利用胞外DNA获取营养起着重要作用[7-9]。另外有研究发现，胞外核酸酶还能防御中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)，降解胞外诱捕网中的DNA[10]。虽然近年来在研究肠炎沙门菌致病
中国兽医杂志 2021年8期2022-01-17
- 一种快速灵敏非特异性核酸酶酶活测定方法
610052)核酸酶是以核酸为底物，催化磷酸二酯键水解的一类酶。核酸酶按作用底物的不同分为脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶和非特异性核酸酶；按作用的位点不同，又可将核酸酶分为核酸外切酶和核酸内切酶。其中非特异性核酸内切酶是一类高活性水解酶，其最大的特点是能非特异地降解几乎所有类型的核酸，包括单链、双链、线状及环状的 DNA 和 RNA，且对核酸的序列没有严格的要求[1]。目前关于非特异性核酸酶的报道已经很多，例如：海洋嗜热细菌噬菌体(GBSV1-NSN)非特异性
生物学杂志 2021年6期2021-12-20
- 同源蛋白序列比对探讨AmPR-10核酸酶活性机理
PR-10具有核酸酶活性[1]，且该活性很大程度是与植物防御病原体感染降解RNA类病毒有关[2]。而无论是天然黄芪中提取的AmPR-10还是研究中得到的外源重组蛋白，核酸酶活性都比较低[3]。因此进一步提高AmPR-10核酸酶活性，探究相关机理，对深入了解黄芪生长发育抗病机制具有重要意义。目前，已知PR-10类蛋白的核酸酶活性可能与一段保守的P-loop环(GxGGxGxxK)相关[4]，然而也有很多具有该结构的PR-10类蛋白被证明并没有核酸酶活性，这一
生物学杂志 2021年5期2021-10-25
- 无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒纯化工艺的初步建立
DNA通常选择核酸酶消化、离子交换层析等方法来进行有效去除［8］。新型复合填料Capto Core700具有未官能化的惰性外壳和位于核心的辛胺配基，使其具有分子排阻和离子吸附的双重功能［9］，非常适合宿主细胞蛋白与核酸酶的去除［10］。本研究通过优化核酸酶处理条件、复合介质Capto Core700与强阴离子介质Capto Q的纯化条件，建立适于无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺，为后续MDCK细胞流感疫苗的生产奠定基础。1 材料与方法1.1
中国生物制品学杂志 2021年9期2021-09-18
- 医疗器械清洗中的新酶应用
加以介绍。1 核酸酶核酸酶是一种旨在提升内窥镜清洁效能的新型酶，它赋予内窥镜清洗剂高度实用化和差异化的清洁力。使用过的内窥镜会沾染生物残渣，其中藏纳的污垢物质包含蛋白质、脂肪、碳水化合物和DNA。核酸酶属于磷酸二酯酶，它直接作用于游离的黏性DNA并可使其降解，而此前还从未有过专门针对这一污物的酶。这是一种开创性的生物酶解决方案，它可直接针对含DNA分子的黏性污物进行有效去除。比起市面上现有的清洗剂，含有核酸酶的清洗剂配方可以更快和更有效地清洁被污染的内窥镜
中国洗涤用品工业 2021年7期2021-08-07
- 桔青霉产核酸酶P1酶分离纯化及其酶学性质
443003）核酸酶P1，又名5’-磷酸二酯酶，它是一种含锌金属酶。桔青霉（Penicillium citrinum）来源的核酸酶P1，分子量约为44 kDa，由331个氨基酸多肽单链构成，含有2个二硫键，其活性中心存在一个三锌结构。核酸酶P1的作用为水解RNA和催化水解热变性DNA中的磷酸二酯键得到5’-核苷酸。5’-核苷酸具有很好的营养保健作用，其中5’-GMP和5’-AMP是天然的风味增强剂，能够显著提高产品的风味特征，还可以作营养补充剂、药物前体物
食品工业科技 2021年7期2021-06-17
- 貂源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及胞外分泌蛋白的核酸酶活性分析
种酶类物质，如核酸酶、胶原酶、蛋白酶、几丁质酶和透明质酸酶等[7]。微生物胞外蛋白核酸酶在细菌和宿主之间的相互作用过程中发挥重要作用[8-9]。病原体感染宿主细胞的过程中，DNA和RNA可被核酸酶水解消化成寡核苷酸，以此作为微生物生存的营养物质。同时，胞外核酸酶可降解宿主细胞表面的黏性分泌物，使得细菌更容易黏附到细胞表面，有助于细菌感染宿主[10]。因此，致病性病原体的胞外核酸酶是一种重要的毒力因子[11-12]。探究细菌胞外核酸酶有助于揭示微生物病原体的
河南农业科学 2021年3期2021-04-08
- 猪霍乱沙门菌胞外产物的核酸酶活性及其对巨噬细胞胞外诱捕网形成的影响
等症状[6]。核酸酶广泛存在于各种微生物胞外产物中，在微生物感染和宿主免疫中发挥着重要作用[7]。胞外核酸酶可以分解外源DNA作为微生物生存的营养物质并且保护自身结构不被破坏[8]。胞外核酸酶可以作为毒力因子在细菌侵入宿主机体时发挥作用[9]。大量的外源DNA能使宿主细胞表面的黏性分泌物增多，而胞外核酸酶可局部降解这些分泌物，从而导致细菌更容易附着在隐藏的细胞表面，有助于细菌成功感染宿主[10]。探究细菌胞外产物有助于揭示病原体的致病机制，但目前未见关于猪
畜牧兽医学报 2021年3期2021-03-30
- 采用核酸酶酶解联合离子交换树脂吸附开发低嘌呤腐竹
文将树脂吸附和核酸酶酶解核酸2种方法相结合，通过正交实验确定去除嘌呤类物质的最佳技术条件，开发出适宜高尿酸血症等特殊人群的低嘌呤腐竹产品，扩大腐竹消费人群，同时可为其他豆制品的嘌呤去除提供理论参考。1 材料与方法1.1 材料与仪器材料：大豆，北京二商(江西大观楼)食品有限公司提供；离子交换树脂NUF01、NUF110、NUF10和NUF20，为向树脂生产企业订制实验室改良产品；腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤，色谱纯，美国Sigma公司；四丁基氢氧化铵(含
食品与发酵工业 2021年1期2021-01-20
- 欧洲食品安全局对基因组编辑植物给出安全结论
上，分别是定点核酸酶-1（SDN-1），定点核酸酶-2（SDN-2）和寡核苷酸定向诱变（ODM）。这三项技术不同于EFSA在2012年评估的定点核酸酶3（SDN-3）技术，因为它们修饰基因組的特定区域而不引入新的DNA。专家们得出的结论是：现有的《转基因植物风险评估准则》适用于对这三种新技术的安全评估。此外，EFSA的评估意见还将为正在进行的关于新基因组技术的研究提供辅助信息。来源：欧洲食品安全局
国际种业前沿动态 2020年18期2020-12-23
- 含季铵盐的芳酰腙配体的铜 (Ⅱ)配合物的合成和表征：体外DNA键合和核酸酶活性
Eda Şengül Elif Cansu Gökçe Topkaya Tolga Göktürk Ramazan Gup(Department of Chemistry,Faculty of Science,Mugla Sıtkı Koçman University,48000,Kotekli-Mugla,Turkey)0 IntroductionDNA is the storage and transport of genetic informatio
无机化学学报 2020年7期2020-07-20
- 金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性研究
酶、几丁质酶和核酸酶等多种酶类[5]。其中核酸酶在各种微生物中广泛存在，主要参与机体的营养代谢、遗传物质的复制、重组和修复机制以及微生物感染、免疫等相关过程[6]。在病原菌感染宿主细胞的过程中，病原菌通过分泌各种核酸酶水解磷酸二酯键将DNA和RNA 消化成寡核苷酸，扩大自身可用的核苷酸库来提供生长优势。已有研究表明致病性病原体可分泌核酸酶，是细菌的重要毒力因子[7]。探究细菌胞外分泌蛋白的特性有助于揭示病原体与宿主互作的分子机制，但目前关于金黄色葡萄球菌胞
中国预防兽医学报 2020年2期2020-06-01
- 多种Cas12a蛋白变体能识别不同的PAM序列（2020.4.27 Plant Biotechnology Journal）
同特性的Cas核酸酶的不断发现，具体体现在不同的靶向性（DNA或RNA）、不同的PAM识别谱、不同的最佳温度和能够降低脱靶倾向等特点的Cas核酸酶的发现。因此，大量的工作集中在扩大已知的CRISPR-Cas亚型的数量，以识别具有新特性的核酸酶。然而，新出现的证据表明，在每个亚型中，也存在着令人难以置信的多样性。我们却对它们知之甚少。Cas12a（也称为Cpf1）核酸酶是V-A亚型CRISPR/Cas系统的典型代表，与其他已知的Cas核酸酶相比，Cas12a
三农资讯半月报 2020年8期2020-05-13
- 拟南芥核酸酶基因AtCaN2克隆及功能分析
150040)核酸酶存在于大多数生命体内，是一种特异性作用于磷酸二酯键的酶，它能够水解核酸链，生成低聚核苷酸或者是单核苷酸[1]，它在遗传物质的重组、碱基错配识别和切割异源DNA等多个途径中起着重要的作用[2-6]，同时有的核酸酶活性还依赖于钙离子、镁离子、锰离子等各种各样的金属离子[7]。核酸酶在细菌和微生物里面研究的比较早，一些研究发现，核酸酶可以用于DNA探针进行简单快速的细菌检测，探针荧光信号与革兰氏阴性大肠杆菌和革兰氏阳性金黄色葡萄球菌的数量相关
华北农学报 2020年1期2020-04-16
- 基因组编辑技术及其在癌症相关基因的功能性筛选中的应用
大的限制。人工核酸酶的出现极大地提高了基因组编辑的效率，人工核酸酶经历了两代技术分别是锌指核酸酶和转录激活效应物样核酸酶，其靶向DNA的特异性是由蛋白质与DNA碱基的特异性结合实现的。但是在应用人工核酸酶时，需要根据DNA靶位点的序列构建可以编码产生能与靶位点特异性结合的锌指蛋白或者转录激活效应物的DNA结构，由于这两个蛋白氨基酸数量多且重复性高，给其编码序列的构建带来了很大的难度。CRISPR/Cas9技术的出现，彻底改变了研究者实现基因组编辑的方式，凭
科学咨询 2020年10期2020-01-07
- 新RNA编辑技术CRISPR-Cas13
指引下将Cas核酸酶与靶序列相结合并将其进行剪切。当病毒入侵时，细菌细胞能够将外来遗传物质的片段捕捉并整合到细胞自身基因组中的CRISPR序列中。当病毒再次入侵时，CRISPR序列转录生成的CRISPR RNA(crRNA)能够与Cas核酸酶相结合并将其引导到靶序列上发挥酶切活性，从而起到监控病毒入侵的作用。当这种外源核酸片段再度出现时，Cas核酸酶能够切断这些遗传片段，从而为细菌细胞提供免疫保护作用。CRISPR-Cas13系统是以Cas13酶作为Cas
生物技术进展 2019年6期2019-12-11
- 苦参双功能核酸酶1的体外表达及结构性质分析
230038)核酸酶分为核酸外切酶和核酸内切酶两大类，限制性核酸内切酶能特异性识别切割双链DNA上的特异核苷酸序列，又分为I、II和III 3种类型；I型和III型核酸内切酶不仅能特异性切割核酸，而且能对特殊碱基进行甲基化修饰，其中I型核酸内切酶切割位点距离识别位点可达数千个碱基之远；而III型核酸内切酶切割位点距离识别位点只有25个碱基对左右。II型核酸内切酶只具有识别切割的功能，不能对碱基进行修饰，所识别的多为短的回文序列，所切割的碱基序列即为所识别的
生物学杂志 2019年2期2019-04-17
- 基因编辑技术及其在基因治疗中的应用
。近年来，锌指核酸酶(zinc finger nuclease, ZFN)、类转录激活因子效应核酸酶(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)、规律成簇的间隔短回文重复(regular clustering of short palindrome repeats, CRISPR)和单碱基编辑(base editing, BE)技术的相继出现，不仅为基因功能研究提供了有力的工具，还为生命医学
遗传 2019年1期2019-01-30
- S1核酸酶介导的功能核酸生物传感器研究进展
，如双链特异性核酸酶（Duplex-specific nuclease，DSN酶），根据其对单双链核酸不同的切割特点，搭载不同的信号输出及扩增方式，已经介导了一系列核酸传感器包括光学传感器、电化学传感器和光磁传感器等，实现了microRNA、mRNA、重金属离子等一系列生物标志物及食品安全风险因子的检测。脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1（Apurinic/apyrimidinic endonuclease 1，APE1），具有能够在碱基缺失位点（AP site）
生物技术通报 2019年1期2019-01-23
- 基因编辑技术在水产生物中的研究进展
[24]和人工核酸酶技术（锌指核酸复合酶（ZFNs）、转录激活子样效应因子核酸酶（TALEN）、成簇规律性间隔的短回文序列重复 (CRISPR)技术）。基因编辑技术的出现为快速、高效验证基因功能提供的最有效的技术手段。基因编辑是一种对基因组及其转录产物进行定点修饰、定向敲除或敲入外源的DNA序列，使之产生可遗传的改变的技术。与射线诱导和化学诱变相比，具有高效、可控和定向操作的特点。基因编辑技术被麻省理工科技评论评为2014年十大突破性科学技术,其中CRIS
兴义民族师范学院学报 2018年3期2018-07-19
- 绿豆核酸酶的提取及活力测定
目的]优化绿豆核酸酶的提取条件并测定其活力。[方法]利用单因素和正交试验，考察提取时间、料液比、pH、芽长几个因素对从绿豆芽中提取核酸酶的影响，优选出各影响因素的最佳水平，并进行活力测定。[结果]提取时间20 h，料液比1∶12（g∶mL），pH 3.0，芽长是绿豆长的4倍时，绿豆核酸酶酶活最高为478.86 U/ mL 。影响绿豆核酸酶提取的因素主次顺序依次为提取时间、pH、料液比、芽长。采用饱和度为80%的硫酸铵盐析沉淀后，酶活达 1 569.6 U/
安徽农业科学 2018年2期2018-05-14
- 金黄色葡萄球菌核酸酶A在温控双表达载体中的表达及其活性分析
金黄色葡萄球菌核酸酶A被引入菌蜕的制备之中[6]。SNA为金黄色葡萄球菌核酸酶的结构基因，其产物具有核酸酶活性，可在钙、镁离子存在时降解单链或双链DNA或RNA[7-8]。在实际应用中，出于经济性和操作便利性考虑，多将裂解基因E和SNA克隆至同一温控表达载体，各自置于一个pR启动子或分别置于pR和pL启动子控制之下，通过升温诱导两者的联合表达[9-11]。两者的联合表达可使残存活菌数在单纯基因E介导灭活的基础上进一步下降2个数量级，而值得注意的是，在单表达
生物学杂志 2018年2期2018-04-17
- 人、猪和鸡源SAMHD1蛋白的酶活性研究
P水解酶活性或核酸酶活性抑制病毒的复制，具有广谱抗病毒功能．利用生物信息学分析该蛋白家族序列保守性，并借助HPLC层析色谱分析与酶活性测定和酶标仪方法，对人源、猪源和鸡源三物种SAMHD1蛋白的酶活性进行了比较．比对发现SAMHD1蛋白在活性空腔、变构位点及磷酸化位点等处序列上具有高度的保守性；而且发现猪源和鸡源SAMHD1蛋白同样具有dNTP水解酶和核酸酶活性；3种蛋白中，人源SAMHD1蛋白dNTP水解酶活性最高，猪源蛋白核酸酶活性最低．这一结果为研究
天津大学学报(自然科学与工程技术版) 2018年1期2018-01-20
- 重组旋毛虫plancitoxin-1-like活性位点突变体蛋白的核酸酶活性
点突变体蛋白的核酸酶活性廖成水1，王晓利2，田文静1，张梦珂1，张春杰1，李银聚1，吴庭才1，程相朝1,31 河南科技大学 动物科技学院 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，河南 洛阳 471023 2 河南科技大学 医学院，河南 洛阳 471023 3 洛阳职业技术学院，河南 洛阳 471099廖成水, 王晓利, 田文静, 等. 重组旋毛虫plancitoxin-1-like活性位点突变体蛋白的核酸酶活性. 生物工程学报, 2017, 33(8
生物工程学报 2017年8期2017-09-03
- 新型基因编辑技术在生物制药领域的应用与发展
现，其中，锌指核酸酶、转录激活子样效应因子核酸酶以及CRISPR/Cas RNA引导核酸酶等基因组编辑技术在生物制药领域得到广泛应用。此类技术编辑效率高，在建立细胞模型新药开发，新型动物模型开发建立，细胞工程改造以及蛋白产物糖基化水平优化等方面应用广泛。本文主要介绍了三种新的基因编辑技术以及其在生物制药方面的应用发展。基因编辑；生物制药；锌指核酸酶；转录激活子样效应因子核酸酶；CRISPR/Cas RNA引导核酸酶随着科学技术的不断发展进步，新型的基因编辑
生物化工 2017年5期2017-04-09
- 基因编辑技术简介
目前主要有锌指核酸酶、转录激活因子样效应物核酸酶和RNA引导的CRISPR/Cas核酸酶技术三种新型的基因编辑技术。综述了三种技术的结构原理和作用机理，并对基因编辑技术进行了展望。关键词 基因编辑 锌指核酸酶 转录激活因子样效应物核酸酶 CRISPR/Cas9核酸酶中图分类号 Q-49 文献标志码 E基因编辑是指对基因组进行定点修饰的一项新技术。利用该技术，可以精确地定位到基因组的某一位点上，在这位点上剪断靶标DNA片段并插入新的基因片段。此过程既模拟了基
中学生物学 2017年2期2017-03-20
- 用megaTAL 核酸酶对原代人T 细胞CCR5 基因座进行有效修饰可建立HIV-1 抵抗力
egaTAL 核酸酶对原代人T 细胞CCR5 基因座进行有效修饰可建立HIV-1 抵抗力已有研究表明，HIV-1 协同受体( co-receptor) CCR5 基因中自然发生的32 个碱基对缺失( 32-base pair deletion)可保护人CD4+T细胞，对抗HIV感染。最近，用工程化核酸酶干扰该基因和模拟此突变的基因工程方法展示了HIV 治疗获得成功的迹象。Romano Ibarra 等研制了一个靶向CCR5 基因第3 细胞外茎环( extr
中国病理生理杂志 2017年2期2017-01-17
- 金黄色葡萄球菌核酸酶A与不同外源DNA片段融合表达的作用比较
金黄色葡萄球菌核酸酶A与不同外源DNA片段融合表达的作用比较付立霞1，冀德君1，卢徐斌1，韩先干2，魏文志11 扬州大学动物科学与技术学院 江苏省人畜共患病学重点实验室，江苏 扬州 2250092 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241付立霞, 冀德君, 卢徐斌, 等. 金黄色葡萄球菌核酸酶A与不同外源DNA片段融合表达的作用比较. 生物工程学报, 2016, 32(12): 1654-1663.Fu LX, Ji DJ, Lu XB, et a
生物工程学报 2016年12期2016-12-28
- 氨基噻唑酮Cu(II)核酸酶的合成、结构及活性研究
酮Cu(II)核酸酶的合成、结构及活性研究邵佳1，徐靖源2（1.天津市第一中心医院药学部，天津300192；2.天津医科大学药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津300070）目的：探究氨基噻唑酮Cu（II）核酸酶的合成、晶体结构及其活性，预期得到一种高效的体外化学核酸酶试剂。方法：利用单晶衍射、琼脂糖凝胶电泳分别确定氨基噻唑酮Cu(II)核酸酶试剂的空间结构及其活性。结果：氨基噻唑酮Cu(II)核酸酶试剂为单斜晶系，空间群为P2(1)/n，由单个
天津医科大学学报 2016年6期2016-12-15
- 发芽及提取条件对大麦麦芽根中核酸酶活性的影响
对大麦麦芽根中核酸酶活性的影响刘馨予，杨洋，朱思齐，秦阳，李新，张洪微，高玉荣，崔素萍（黑龙江八一农垦大学食品学院，大庆163319）为了从大麦芽根中制备高活性的核酸酶，以麦芽根及成品麦芽根中核酸酶活性为指标，确定了内蒙垦大麦和澳洲大麦的最佳发芽条件。在此基础上，研究了麦芽根中核酸酶的提取条件对核酸酶活性的影响。结果表明：最佳发芽条件是25℃，发芽64 h时，内蒙垦和澳洲麦芽根中核酸梅的活性最高分别为316.7 U·mL-1，364.5 U·mL-1。麦芽
黑龙江八一农垦大学学报 2016年2期2016-11-12
- 2，6-二甲基-3，5-吡啶二甲酰腙衍生物的合成及与DNA的作用
啶;酰腙;人工核酸酶;DNA近十几年来，人工核酸酶的研究取得了很大进展，这些成果将有助于细胞学、分子生物学的发展，并有可能应用于基因治疗中。因为天然核酸酶的活性中心有一个或多个金属离子参与反应，所以以金属配合物作为人工核酸酶的研究受到了广泛的关注，其中就包括许多酰腙金属配合物[1-2]。但是金属及金属配合物类核酸酶涉及到的多数为有氧化或还原活性的金属离子，很可能发生一些比较复杂的化学反应，比如金属离子从配合物中解离出来，或发生一些难以控制的氧化还原反应，这
山西大同大学学报(自然科学版) 2016年1期2016-11-02
- 三种检测内源性基因修饰方法比较
确定了3种人工核酸酶生物学活性检测方法。利用Surveyor nuclease、T7E1（T7 Endonuclease 1）和HRM（High resolution melt），均以变性退火突变型和野生型DNA序列形成扭曲的双螺旋DNA（distorted duplex DNA）为基础的3种人工核酸酶生物学活性检测方法，确定目标位点是否发生突变。实验成功检测出作用于绵羊MNST基因第一外显子的CRISPR/Cas9和第三外显子的TALEN目标位点发生突变
生物技术通报 2016年2期2016-10-13
- 作物改良领域人工核酸酶技术全球专利布局分析
物改良领域人工核酸酶技术全球专利布局分析何湘琼1，赵永江1，谭永华2，田 野1，田文文1，朱 宁1，潘卫东2*(1.国家知识产权局专利局专利审查协作湖北中心，湖北武汉 430070；2.贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州贵阳 550002)利用德温特世界专利索引数据库(DWPI)，分析作物改良领域人工核酸酶技术专利布局，揭示关键技术发展方向和趋势、技术分布区域、专利申请人情况、竞争对手情况以及各技术方向对应的技术功效分布，以期为我国研究者的技术研
安徽农业科学 2016年23期2016-10-10
- 氨基树脂表面活化提高固定化核酸酶P1连续催化性能
活化提高固定化核酸酶P1连续催化性能何林姣1,2，刘晓静1,2，黄金莎1,2，庄伟1,2,3，应汉杰1,2,3（1南京工业大学材料化学工程国家重点实验室，江苏 南京 210009；2南京工业大学制药与生物工程学院国家生化工程技术研究中心，江苏 南京 211816；3南京工业大学江苏先进生物与化学制造协同创新中心，江苏 南京 211816）考察了固定化酶常用载体-氨基树脂几何结构及表面活化过程对固定化核酸酶P1性能的影响，并进行了动力学和连续催化稳定性研究。
化工学报 2016年9期2016-09-26
- 热敏型核酸酶在毕赤酵母中的分泌表达及催化特性
，陈鹏热敏型核酸酶在毕赤酵母中的分泌表达及催化特性陈芳霞，陈鹏西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌 712100核酸酶在生物工程领域有着重要的应用价值。本研究在优化北极虾核酸酶 (Shrimp nuclease，SNU) 基因序列的基础上，构建SNU的毕赤酵母分泌表达载体SNU-pPICZα A并转化酵母，以高拷贝整合转化子为基础，优化酶表达的条件，并对该酶的催化特性进行分析，结果显示SNU可在毕赤酵母SMD1168H中高效分泌表达，最佳诱导表达条
生物工程学报 2016年7期2016-09-19
- Serratiamarcescens非特异性核酸酶研究进展
ens非特异性核酸酶研究进展张瑜，郑伟，顾剑飞，石陆娥(杭州师范大学生命与环境科学学院，浙江杭州310016)Serratiamarcescens核酸酶是一种非特异性核酸内切酶，可降解不同形式的DNA和RNA。本文综合国内外的研究概况,主要介绍了Serratiamarcescens非特异性核酸酶的水解位点、催化机制及其降解底物的特点，另外也阐述了Serratiamarcescens非特异性核酸酶的原核表达的研究以及其应用现状，为Serratiamarces
广州化工 2016年5期2016-09-01
- 新医学时代：治疗性基因组编辑
键的原则。基于核酸酶的基因组编辑基本过程是在基因组内构建一个位点特异性DSB，然后催动细胞自己的内源性修复机制来修复折断（图1）。细胞可以使用两种基本机理来修复折断：非同源性末端连接（NHEJ）或同源重组（HR）。当单个折断的编辑因NHEJ而发生，就可以在折断位点上构建出插入/缺失之类的突变（图1a）。缺失的尺寸趋向于大于插入的尺寸，当染色体外DNA在折断位点处被捕捉时例外（其发生率罕见但是可测量），这种时候可以发生数百碱基对的插入。当使用捐赠者的供体序列
世界科学 2016年8期2016-08-27
- 探索基因组编辑的新工具
列，它能与多种核酸酶（其中之一为Cas9）协同，起到识别并摧毁入侵病毒DNA的作用。已有研究发现，CRISPR-Cas9系统可转用于基因组编辑，成功实现生物医学上的基因靶向修饰，效率大大超过以往的基因组编辑工具。2015年9月，又有研究发现了核酸酶Cpf1与CRISPR组成的CRISPR-Cpf1系统，它比起CRISPR-Cas9有诸多特点和优势，可望发展成更加高效的基因组编辑工具。黄志伟课题组首先解析了结合CRISPR RNA（crRNA）的Cpfl复合
科学 2016年3期2016-05-30
- 动物转基因研究中锌指核酸酶的应用及进展
基因研究中锌指核酸酶的应用及进展王嘉彬华中农业大学作为一种比较先进的基因修饰技术，锌指核酸酶技术已经在多种生物转基因研究领域得到了应用，包括植物、昆虫、各类动物乃至人类细胞中，强化了人们对于动物复杂生理系统的理解和认知，不仅使得锌指核酸酶技术成为构造转基因生物的强力工具，更使得其在许多疾病的治疗中发挥出了重要作用。本文主要对锌指核酸酶在动物转基因研究中的应用及进展进行了讨论。动物转基因；锌指核酸酶；应用；进展前言转基因在当前的科学研究领域虽然并非新的课题，
科学中国人 2016年26期2016-03-15
- 氨基树脂表面活化提高固定化核酸酶P1连续催化性能
活化提高固定化核酸酶P1连续催化性能何林姣1,2，刘晓静1,2，黄金莎1,2，庄伟1,2,3，应汉杰1,2,3（1南京工业大学材料化学工程国家重点实验室，江苏 南京 210009；2南京工业大学制药与生物工程学院国家生化工程技术研究中心，江苏 南京 211816；3南京工业大学江苏先进生物与化学制造协同创新中心，江苏 南京 211816）考察了固定化酶常用载体-氨基树脂几何结构及表面活化过程对固定化核酸酶P1性能的影响，并进行了动力学和连续催化稳定性研究。
化工学报 2016年9期2016-03-13
- 基因组编辑技术及其在昆虫遗传转化中的应用
93摘要:锌指核酸酶、类转录激活因子式核酸酶和CRISPR/Cas技术是近几年发展起来的3种主要基因组编辑技术，其原理都是通过在生物基因组特定位点制造DNA双链断裂损伤，从而激活机体自身的DNA 损伤修复机制，在此过程中引发各种变异。基因组编辑技术已在研究基因功能和基因修复中成功应用，基于基因组编辑技术的诸多优点，如CRISPR/Cas技术能对基因组中多个特定位点进行编辑，其有望成为昆虫遗传转化的主要策略。本文就锌指核酸酶、类转录激活因子式核酸酶和CRIS
生物安全学报 2015年2期2015-12-17
- 后基因组时代的基因编辑技术
相比，基于人工核酸酶的基因组编辑技术，凭借其效率高、特异性强等特点，迅速成为生物医学研究的新热点。人工核酸酶介导的基因组编辑核酸酶可以水解DNA的特异碱基序列，通过人为改造，可实现对基因的修饰。目前主要的人工核酸酶有三种：锌指核酸酶（zinc finger nucleases，ZFN）、类转录激活因子核酸酶（transcription activator-like effectornucleases。TALEN）和规律成簇的间隔短回文重复序列系统（clus
科学 2015年6期2015-05-30
- 利用常压室温等离子体(ARTP)诱变选育高产核酸酶P1菌株
)诱变选育高产核酸酶P1菌株梁剑光1,2,顾秋忆1,秦修东1,陈中兵2,余华顺3,姚 娟3(1.常熟理工学院 生物与食品工程学院，江苏常熟 215500；2.浙江升华拜克生物股份有限公司，浙江湖州 223232；3.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌 215500)为提高核酸酶P1的发酵酶活,以桔青霉菌株CK-3为出发菌株,利用常压室温等离子体(ARTP)诱变方法,获得了3株(CK-3-1,CK-3-7,CK-3-9)高产核酸酶P1菌株,其中CK-3-9突变株
食品工业科技 2015年21期2015-05-05
- 基于SSA修复机制和特异性核酸酶活性检测的双荧光报告载体系统的开发及应用
复机制和特异性核酸酶活性检测的双荧光报告载体系统的开发及应用韩芙蓉1，王令1,2，徐坤1，张智英1，王昕1 1. 西北农林科技大学动物科技学院，杨凌 712100；2. 陕西理工学院生物科学与工程学院，汉中 723000报告载体系统因构建快捷、改造简单、操作容易、经济有效，并且能通过介导筛选核酸酶阳性细胞富集基因组修饰的阳性细胞克隆，而成为特异性核酸酶活性检测的重要手段。基于非同源末端连接(Non-homologous end joining，NHEJ)修
遗传 2015年10期2015-01-03
- CRISPR/Cas9系统的分子机制及其在人类疾病基因治疗中的应用
相继开发出锌指核酸酶(Zinc finger nuclease, ZFN)技术[3,4]和转录激活因子样效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases, TALEN)技术[5～7]，基因组编辑技术得到迅速发展。细胞内有两种DNA损伤修复途径：一种是同源介导修复(Homology directed repair, HDR)，可实现准确的DNA修复，不会产生基因突变；另一种是非同源末端连接(Non-
遗传 2015年10期2015-01-03
- 美国：基因剪辑“删除”艾滋病毒
后，一种被称为核酸酶的DNA剪切酶与一种被称为向导核糖核酸（gRNA）的RNA结合在一起瞄准病毒的基因组，并将HIV-1病毒的DNA切除。哈利利的实验室研制了含有20个核苷酸链的gRNA来瞄准HIV-1病毒的DNA，并将其与Cas9基因剪辑技术配对。随后，细胞的基因修复机制开始发挥作用，将基因组的松散末梢重新整合在一起——这样细胞中就不再带有病毒。这些分子工具还有望成为一种治疗性疫苗；携带核酸酶与RNA组合的细胞不会受到HIV病毒的感染。endprint
东西南北 2014年21期2014-11-25
- 氧化石墨烯保护的核酸分子探针及其在生物分析中的应用
核酸、蛋白质、核酸酶、小分子及金属离子的检测[8-10]．除此之外,核酸与GO相互作用带来的新的效应,如吸附于GO表面的核酸能够抵抗核酸酶的降解,也被证明并得到了新的应用[11]．在本文里,我们综述了科学家们对GO保护核酸抵抗核酸酶降解的研究及在此研究基础上展开的一系列应用[12]．1 GO对核酸的吸附、保护性能及机理探讨图1 荧光标记的ssDNA用于核酸(A)[7]、蛋白质(B)[13]及小分子(C)[14]的检测原理Fig.1 Fluorophore-
厦门大学学报（自然科学版） 2014年5期2014-08-07
- 科学家成功打造植物基因组“剪刀”
s系统是继锌指核酸酶（ZFNs）和TALEN核酸酶之后另一个可精确定点编辑基因组DNA的新技术。该系统利用短RNA序列引导Cas核酸酶在基因组上特定的位置进行切割形成双链断裂，随后利用植物自身的修复机制，引入随机突变或导入特定的DNA序列，从而对基因组进行突变、置换、插入等精确编辑，具有设计简单、快速等优点。该系统首先被科学家在细菌抵抗噬菌体侵染的过程中被发现，随后被科学家改造成基因组修饰工具，并在动物细胞中成功实施，但由于植物的复杂性和遗传转化的高难度，
种业导刊 2014年2期2014-01-22
- 与人遗传病相关的DNA重复序列的体外核小体定位特性
质及摸索微球菌核酸酶酶切条件。然后用本实验室构建的含有上述人遗传病相关重复序列的质粒体外组装染色质与微球菌核酸酶酶切分析方法，在质粒层次初步研究了重复序列核小体定位的特性，为该类疾病机理的理解奠定了一定的基础。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试验菌株:大肠杆菌DH5α、质粒pUC19、pBS-601 由本实验室保存。重组质粒pUC(GAA)42、pUC(ATTCT)43和pUC(GCCT)18由本实验室构建，在质粒的多克隆位点分别含有重复序列(GAA
基础医学与临床 2013年3期2013-03-15
- 人工核酸酶用于基因组定点编辑的研究进展
发展起来的人工核酸酶(engineered nucleases，EN)技术为此带来了新的曙光，使研究者能够对不同物种和细胞中的几乎所有基因进行编辑［4］。本文对EN 的类型、原理、应用及存在的问题等进行综述。1 利用EN 进行基因组定点修饰的一般原理EN 进行基因组定点修饰主要包括2 个步骤［5］:首先，设计并构建EN，进而在靶位切断基因组DNA，形成双链断裂(double-strand break，DSB);其次，DNA 损伤激活DNA 修复通路，启动自
基础医学与临床 2013年12期2013-02-19
- 灵杆菌非特异性核酸酶的原核表达、纯化及活性分析
，已有通过加入核酸酶去除蛋白样品中核酸的研究实例。如商业化产品 Benzonase endonuclease、DNase和RNase A等，其中Benzonase endonuclease来源于灵杆菌。灵杆菌核酸酶 (Serratia marcescens nuclease，smNU) 是一种分泌至胞外的非特异性磷酸二酯酶，其在金属阳离子存在下可以高效切割任意形式的核酸 (DNA和RNA，双链和单链)[1-5]，其催化效率是葡萄球菌核酸酶的4倍，牛胰DNa
生物工程学报 2011年8期2011-02-09
- DNA聚合酶Ⅰ的功能与结构的发现
3′→5′外切核酸酶活性和5′→3′外切核酸酶活性。1969年，科恩伯格研究了各种各样的DNA结构与聚合酶的结合，提出了DNA聚合酶的活性中心模型，显示了在这个活性中心内的几种活性位点，表示了错配碱基被外切核酸酶切除和DNA聚合酶的修复过程。同年，科恩伯格和他在斯坦福大学医学院生物化学系的同事还用沉降平衡法确定了DNA聚合酶的相对分子量，并通过蛋白水解作用把DNA聚合酶剪切成两个片段，较大的片段保持了聚合酶活性和3′→5′外切核酸酶活性，小片段包含了5′→
自然杂志 2011年6期2011-01-24
- 桔青霉发酵制备核酸酶P1研究进展
桔青霉发酵制备核酸酶P1研究进展喻 晨1，赵 劼2，张亚雄1，朱昌雄2，姚 鹃2，李知洪2（1.三峡大学生物工程重点实验室，湖北宜昌443002；2.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌443003）核酸酶P1是一种重要的工业酶制剂，可用于水解核酸生产5’-核苷酸。本文综述了利用桔青霉发酵得到核酸酶P1的菌种选育、培养基优化、发酵工艺控制、浓缩、相关应用和国内外市场状况。核酸酶P1，桔青霉，发酵法核酸酶P1（Nuclease P1），又名5′-磷酸二酯酶，其作用
食品工业科技 2010年11期2010-11-14
- 基于分子信标和S1核酸酶检测锌离子的研究
利于普及。S1核酸酶是能够特异性切割核酸单链的核酸酶，对锌离子有很强的依赖性，基于此特性发展了一种基于分子信标和S1核酸酶的锌离子检测新方法。该方法操作简便，不需要昂贵仪器，不涉及复杂的离子载体合成，对锌离子的检测下限为120 μmol/L。1 实验部分1.1 仪器和试剂F-4500荧光分光光度计(Hitachi，日本)；恒温循环水浴(Amersham Biosciences公司，美国)；超纯水装置（Elix3，Millipore，U.S.A）。分子信标序
化学传感器 2010年4期2010-03-23