原核表达
- 分子对接阐明草甘膦与水稻醛酮还原酶（OsALR2）的作用及QsALR2的表达纯化
；分子对接；原核表达；包涵体变复性；酶活测定草甘膦（glyphosate）是一种重要的除草剂，具有内吸传导性强，广谱，药效好，靶向性高，环境兼容性高等优点。草甘膦以植物叶绿体中5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶（5-enolpyruvate shikimate-3phosphate synthase，EPSPS）为靶标。EPSPS是莽草酸代谢途径的第6个酶，负责催化磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）和磷酸莽草酸（S3P）生成5一烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸（EP
植物保护 2023年6期2023-12-28
- 牙鲆细胞因子M17蛋白原核表达及其多克隆抗体制备
ET-32a原核表达载体，构建M17基因原核表达质粒pET-32a-M17。将构建的质粒pET-32a-M17转化感受态大肠杆菌BL21（DE3）细胞，通过IPTG诱导M17蛋白表达，利用Ni-NTA亲和层析柱纯化M17重组蛋白。利用纯化的重组M17蛋白免疫小鼠获得M17多克隆抗体（抗血清）。结果显示，IPTG诱导后M17蛋白分子质量大小约为50.0 ku，M17重组蛋白主要以包涵体表达为主；Ni-NTA亲和层析柱纯化后透析复性后M17重组蛋白浓度为597
天津农业科学 2023年8期2023-08-16
- 鼠源Desmin基因克隆表达及其生物信息学分析
min真核/原核表达载体，明确鼠源Desmin蛋白生物学功能，为在体外及细胞内表达系统中鉴定Desmin互作蛋白及探索其作用网络提供理论依据。【方法】通过RT-PCR克隆Desmin基因，分别构建原核表达载体pGEX-4T-1-Desmin-Flag和真核表达载体pcDNA3.0-Desmin-Flag，以IPTG对原核表达载体进行诱导表达，并通过ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA和SWISS-M
南方农业学报 2023年2期2023-07-22
- 花生铝响应类受体蛋白激酶AhPRK4的原核表达分析
D），并通过原核表达和体外磷酸化体系分析了AhPRK4-CD的自磷酸化活性。结果表明：（1）不同铝处理时间及不同铝浓度处理后，AhPRK4的转录水平上调，显著响应铝处理，是铝诱导基因；（2）AhPRK4含有673个氨基酸，属于LRR-III蛋白激酶家族成员，具跨膜域和信号肽，且预测具有磷酸化活性位点；（3）体外诱导表达出约71 kD的可溶性蛋白（GST-AhPRK4-CD），经凝胶亲和层析纯化，得到基于蛋白印迹实验（Western Blot）验证正确的重组
广西植物 2023年6期2023-07-17
- 草地贪夜蛾β-Actin基因的原核表达及多克隆抗体制备
bp。利用原核表达系统诱导获得了约37 kD的β-Actin重组蛋白，将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备得到β-Actin多克隆抗体血清。经ELISA检测，获得的抗血清效价达1∶ 256000。利用制备的β-Actin抗血清进行Western blot试验，结果显示在42 kD处出现强且单一的蛋白条带， 说明制备的β-Actin抗血清能有效识别草地贪夜蛾β-Actin蛋白。综上，本研究制备的β-Actin多克隆抗体效价高、特异性较强，能为草地贪夜蛾后
山地农业生物学报 2023年2期2023-06-14
- 灰飞虱脂肪酶LsLPS的原核表达及Ni-NTA纯化
列，并进行了原核表达和His标签融合蛋白的纯化。结果显示，灰飞虱 LsLPS 开放阅读框长1 293 bp，可翻译成430个氨基酸，含有信号肽序列和PF00151结构域。 LsLPS 连接到原核表达载体pET28a（+）-SUMO、pCold I后在表达菌株BL21（DE3）中主要以包涵体形式表达，连接到pET43.1a（+）后可在表达菌株BL21（DE3）中可溶性表达。采用pH 8.0、含20 mmol/L 咪唑的磷酸缓冲液作为平衡液，Ni-NTA纯化
江苏农业学报 2022年3期2022-07-16
- 非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的优化表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
-1-p54原核表达质粒，在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中进行复制，经IPTG诱导表达，对重组蛋白利用SDS-PAGE分析和免疫印迹鉴定正确后，进行表达条件优化，并纯化重组蛋白。随后用ASFV-p54重组蛋白为包被抗原，通过条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验，建立一种稳定的血清ASFV抗体检测方法。结果显示，ASFV p54基因成功克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中，得到pGEX-6P-1-p54原核表达质粒;转化E. coli菌株BL21
国外畜牧学·猪与禽 2022年2期2022-06-10
- 番鸭细小病毒YL08株VP2和VP3蛋白的原核表达及免疫反应性
2;VP3;原核表达;免疫反应性中图分类号： S852.65+7 文献标志码： A文章编号：1002-1302（2022）09-0169-04番鸭细小病毒（Muscovy duck parvovirus，MDPV）主要侵害3周龄以内的雏番鸭，引起番鸭细小病毒病，国内亦称番鸭“三周病”[1-2]。我国动物医学专家林世棠于1991年最先发现并报道了该病发生[3]。番鸭细小病毒病发病率为40%～50%，死亡率在50%～80%之间，对番鸭饲养业的危害极大[4]。
江苏农业科学 2022年9期2022-06-09
- 鳗鲡疱疹病毒ORF87基因克隆及其多克隆抗体的制备
F87基因经原核表达载体诱导表达获得的融合蛋白ORF87具有Serine/threonine蛋白激酶活性，以其免疫新西兰大白兔制备获得的ORF87多克隆抗体具有高效价，能特异性识别AngHV感染，可作為亚细胞定位及表达时相分析等蛋白特性研究的工具，用于解析ORF87基因在AngHV侵染过程中的作用。关键词： 鳗鲡疱疹病毒（AngHV）;ORF87基因;原核表达;多克隆抗体;免疫原性中图分类号： S941.41
南方农业学报 2022年2期2022-05-26
- 斑翅果蝇YolkProtein1基因原核表达及抗体制备
1）基因进行原核表达，并对Ds-YP1蛋白的功能结构域和信号肽进行预测，克隆多肽并构建pET-32a-c（+）-Ds-YP1原核表达载体，IPTG诱导表达并免疫小鼠制备抗体;用成功制备的抗体进行斑翅果蝇蛋白WesternBlot验证。结果表明构建的pET-32a-c（+）-Ds-YP1表达载体在大肠杆菌中表达了His-Ds-YP1融合蛋白，通过免疫小鼠成功制备并纯化了Ds-YP1多克隆抗体。制备的Ds-YP1多克隆抗体不但能识别His-Ds-YP1融合蛋白
山东农业科学 2022年3期2022-04-27
- 斑马鱼g型溶菌酶基因序列分析及其原核表达
-g2可通过原核表达获得高纯度、高溶菌活性的融合蛋白，为探究斑马鱼溶菌酶的抗菌机制提供了技术支持。关键词： 斑马鱼;g型溶菌酶;序列特征;原核表达;溶菌活性中图分类号： S965.819 文献标志码： A 文章编号：2095-1191（2022）01-0229-09Sequence analysis and prokaryotic expression of zebrafishg-type lysozyme
南方农业学报 2022年1期2022-04-21
- 甘蔗线条花叶病毒P1蛋白基因原核表达及抗血清制备
将目的基因与原核表达载体pET28a连接，获得pET28a-P1SCSMV。将连接正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta菌株，经IPTG诱导后，SDS-PAGE电泳检测显示在分子量约为42 kDa处有目的蛋白带，与预期的SCSMV P1大小一致。融合蛋白主要是以可溶性蛋白的形式存在。利用镍柱亲和纯化重组的SCSMV P1蛋白，并免疫健康新西兰大白兔，制备兔抗血清。Western blot分析显示，在对多个样品进行检测时制备的抗血清能特异性地识别SCSMV
植物保护 2022年2期2022-04-04
- 菠萝AcPLD2基因多克隆抗体制备及其在果实黑心病发生中的表达分析
列片段插入到原核表达载体pET-30a（+）多克隆位点HⅠ和RⅠ之间，构建了原核表达载体pET-AcPLD2，并转化到大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达菌体蛋白。经SDS-PAGE电泳检测，结果表明重组蛋白成功获得了高效表达，分子量约为57 kDa。重组蛋白经纯化后免疫新西兰兔，获得了多克隆抗血清，采用Protein A/G纯化法对抗血清进行了纯化。将纯化后的抗血清通过间接酶联免疫分析，测定其效价比可达1∶1 600 000，表明所制备的抗体具有很好的灵
热带作物学报 2022年2期2022-03-07
- 玉木耳漆酶基因Aclac的克隆及原核表达
c进行克隆及原核表达分析，为深入研究漆酶基因在玉木耳子实体发育中的生物学功能提供理论依据。【方法】克隆Aclac基因的cDNA和DNA全长序列，对其进行生物信息学分析，并将目的基因连接至pET-28a质粒上以构建原核表达载体pET28a-Aclac，将其转化大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。【结果】克隆获得的Aclac基因cDNA序列长度为1734 bp，编码577个氨基酸残基;Aclac基因DNA序列长度为2521 bp，含14个内含子。AcLAC蛋
南方农业学报 2021年8期2021-12-15
- 香蕉果实MaNPC1基因原核表达及多克隆抗体制备
ORF）进行原核表达，并制备其多克隆抗体，为深入探究MaNPC1在香蕉果实抵御炭疽病中的作用机制提供理论依据。【方法】克隆MaNPC1基因ORF序列，对其进行生物信息学分析及抗原性预测，并通过双酶切法构建其原核表达载体，利用热激法转入大肠杆菌Rosetta 2（DE3）感受态细胞中进行诱导表达，重组蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后免疫新西兰兔，以制备多克隆抗体。同时，运用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测香蕉果实贮藏过程中在炭疽
南方农业学报 2021年7期2021-11-03
- 马蓝IGPS基因的克隆、表达分析及原核表达
BcIGPS原核表达载体，并优化诱导表达条件。结果表明：BcIGPS（GenBank登录号：MT210517）全长为1176 bp，包含1个开放阅读框（ORF），编码392个氨基酸，具丝氨酸（Ser）、苏氨酸（Thr）、酪氨酸（Tyr）磷酸化位点31个，无跨膜结构，无信号肽，亚细胞定位于叶绿体中。BcIGPS含有product（indole）活性结构域和IGPS、TrpC特异性位点。qPCR分析结果显示，BcIGPS基因在不同器官的相对表达丰度依次为：叶>
热带作物学报 2021年8期2021-09-14
- 小麦TaARF20基因克隆及表达分析
肠杆菌中进行原核表达。采用实时荧光定量PCR检测TaARF20基因在普通小麦不同组织及普通小麦和多子房小麦不同发育时期幼穗中的表达模式。【结果】TaARF20基因包含1个内含子和2个外显子，编码区（CDS）长度为1116 bp，编码371个氨基酸残基，蛋白分子量约40.38 kD，理论等电点（pI）为4.96，脂溶性系数为19.80，疏水性系数为0.985，不稳定系数为50.51，属于不稳定蛋白，定位在细胞核中，含有ARF家族蛋白的保守结构域和B3 DNA
南方农业学报 2021年9期2021-09-13
- 红螯螯虾卵黄蛋白原VWD结构域的原核表达及纯化
全基因合成;原核表达;包涵体中图分类号： S966.12 文献标志码： A 文章编号：2095-1191（2021）05-1378-09Abstract：【Objective】Prokaryotic expression of the vitellogenin（Vg） VWD domain of red claw crayfish（Cherax quadricarinatus） not only p
南方农业学报 2021年5期2021-09-08
- 三七PnAAE41基因的克隆、表达分析及原核表达
;时空表达;原核表达中图分类号：S567.23+6 文献标识码：AClone and Prokaryotic Expression Analysis of Acyl-activating Enzyme Gene from Panax notoginsengYAN Jing1，2，3， XIANG Guisheng1，2， FENG Lei1，2，3， YANG Mei3， GUO Min3， ZHANG Guanghui1，2*1. Nation
热带作物学报 2021年7期2021-08-26
- 暴马桑黄倍半萜合酶基因SbTps1的克隆及表达分析
与序列分析;原核表达;荧光定量中图分类号：S567.3 文献标识码：A 文章编号：1006-8023（2021）04-0033-07Cloning and Function Identification of the Sesquiterpenes Synthase GeneSbTps1 in Sanghuangporus baumiiWUMUTI Bahetibieke， TANG Yuqian， WANG Shuting， LI Yawei，
森林工程 2021年4期2021-08-23
- 斑马鱼血管新生相关因子PTPRB的原核表达及其多克隆抗体制备
要：【目的】原核表达斑马鱼（Danio rerio）蛋白酪氨酸磷酸酶受体B（PTPRB）并制备多克隆抗体，为研究斑马鱼PTPRB基因功能及血管发育相关信号传导通路打下基础。【方法】采用无缝克隆技术将斑马鱼PTPRB基因插入原核表达载体pET-B2m构建重组表达质粒，转化大肠杆菌B21感受态细胞后采用IPTG进行诱导表达，然后以诱导表达的融合蛋白免疫大耳兔制备多克隆抗体，并采用Western blotting和ELISA检测多克隆抗体的特异性及免疫效价。【结
南方农业学报 2021年4期2021-08-03
- 花生类受体蛋白激酶基因AhBAK1的克隆及原核表达
基因克隆， 原核表达， 蛋白纯化中图分类号： Q943文獻标识码： A文章编号： 1000-3142（2021）04-0573-11Abstract： BAK1， an LRR receptor-like protein kinase， interacts with other receptor-like protein kinase and mediates the programmed cell death in plant innate immune
广西植物 2021年4期2021-06-29
- 卵形鲳鲹RelB蛋白原核表达及其多克隆抗体制备
elB蛋白;原核表达;重组蛋白;多克隆抗体中图分类号： S965.331 文献标志码： A 文章编号：2095-1191（2021）01-0238-07Abstract：【Objective】The polyclonal antibody against Trachinotus ovatus RelB protein（TroRelB） was prepared tolay the foundation for
南方农业学报 2021年1期2021-04-19
- 白背飞虱VAMP7和Vti1a蛋白的原核表达、抗体制备及应用
i1a基因的原核表达载体，并将载体分别转入大肠杆菌中进行诱导表达，得到了相应的原核表达蛋白。在蛋白纯化后，将纯化蛋白注射于新西兰大白兔体内进行免疫，分别制备得到VAMP7和Vti1a的抗体。两种抗体经Western blot检测发现，均可分别与白背飞虱体内的VAMP7和Vti1a特异性结合。利用制备的抗体对白背飞虱的肠道进行免疫标记，激光共聚焦显微镜观察发现所制备抗体能够在白背飞虱中肠上皮细胞的胞质中特异性标记到VAMP7和Vti1a，表明制备的抗体能够成
植物保护 2021年1期2021-03-12
- 红笛鲷SR-BI基因的原核表达及条件优化
列定向克隆到原核表达载体pET-28a（+）中，将重组质粒转入大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达，并对重组表达菌株的表达条件进行优化。结果显示，成功构建了原核表达载体pET28a-SR-BI，并能在大肠杆菌BL21中表达，表达的融合蛋白分子量为50.0ku。融合蛋白的最佳诱导表达温度、IPTG浓度和时间分别为16℃、0.05mmol/L和8h。研究结果为进一步研究SR-BI的功能奠定了基础。关键词：红笛鲷;SR-BI基因;原核表达;条件优化中图分类号 S
安徽农学通报 2021年3期2021-03-03
- 番木瓜干旱胁迫相关CpDHN1基因的克隆与分析
表达特性以及原核表达分析。结果显示，CpDHN1编码211个氨基酸，其理论分子量为24.09 kDa，等电点为5.05，总平均疏水指数为–1.584，不稳定系数为66.51，属于不稳定、高度亲水的细胞核定位蛋白。CpDHN1蛋白富含谷氨酸、赖氨酸和丝氨酸，含有3个保守区域，即2个K片段和1个S片段，符合脱水素蛋白的基本结构特征，属于SKn型脱水素。生物信息学分析表明CpDHN1无跨膜螺旋，其二级结构中以α-螺旋结构占主导。表达分析显示，该基因在根、叶片和韧
热带作物学报 2021年12期2021-01-13
- 溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统C-环组分VscQ的原核表达及免疫原性
基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中，构建重组表达质粒pGEX-vscQ。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后，能在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中表达分子质量约为61.6kDa的VscQ融合蛋白。VscQ蛋白表达的最优条件为：0.4mmol/L IPTG，15℃条件下诱导12h。用纯化后的VscQ融合蛋白免疫白兔，获得高效多克隆抗体，抗体效价为1∶121500。兔抗VscQ血清能与重组VscQ蛋白发生特
安徽农学通报 2020年18期2020-10-26
- 尼罗罗非鱼Galectin-related protein B基因的原核表达与条件优化
点引物，构建原核表达载体pET-28a-GRPB，将重组质粒导入大肠杆菌，诱导重组质粒的蛋白表达，并对蛋白表达条件进行优化。结果表明：在28℃条件下，IPTG浓度为0.20mmol/L，诱导6h时，诱导重组蛋白的效果最佳;经Western-blot免疫印迹显示，纯化后的重组蛋白能与带HIS标签的单抗特异结合，条带单一，进一步证明该重组蛋白为Galectin-related protein B蛋白。关键词：尼罗罗非鱼;凝集素相关蛋白B;原核表达;条件优化中图
安徽农学通报 2020年18期2020-10-26
- 长春花茉莉酸-异亮氨酸合成酶CrJAR1生物信息学分析与原核表达
序列，并进行原核表达。结果表明：CrJAR1基因编码了585个氨基酸，该蛋白不存在跨膜区域，定位于细胞质中，且该蛋白不含有信号肽;进一步系统进化树分析表明， 长春花CrJAR1与笋瓜和番木瓜的JAR1同源性最高;对二级、三级结构进行预测，发现CrJAR1蛋白主要由α-螺旋构成;同时，成功构建了pET-30b-CrJAR1重组表达质粒，并经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中异源表达，经16、37 ℃分别诱导至16 h后，均显示出最高的表达量。综上结果，对长春
广西植物 2020年8期2020-10-20
- 血管内皮生长因子原核表达载体的构建及表达
（VEGF）原核表达载体并诱导其表达蛋白，为后续进行VEGF相关研究奠定基础。 方法 通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增得到目的片段，将DNA片段克隆至带组氨酸标签的pET-30a（+）载体上;构建的重组质粒经过菌液聚合酶链式反应（PCR）及测序方法鉴定;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组质粒表达，通过蛋白质印迹法（Western blot）进行鉴定。 结果 以HepG2细胞为模板扩增出大小正确的片段;构建的pET-30a-VE
中国医药导报 2020年23期2020-10-09
- 蜂毒前溶血肽原基因的改造及其原核表达
原;蜂毒肽;原核表达;融合蛋白中图分类号：Q789文献标志码：A文章编号：1002-1302（2020）16-0087-04蜂毒肽（melittin）又称蜂毒溶血肽，是蜂毒（bee venom）的主要活性成分之一[1]，在抗菌[2-3]、消炎[4]、抗肿瘤[5-6]乃至肌肉再生[7]等方面具有一定应用价值。目前基因工程技术为蜂毒肽生产提供了新的途径[8-9]，但从研究到生产仍有一定距离。蜂毒前溶血肽原（melittin precursor/Preprome
江苏农业科学 2020年16期2020-09-24
- 大豆GmGolS基因的原核表达及抗旱性分析
S基因构建到原核表达载体pET28上，然后将载体导入大肠杆菌Rosetta（DE3）中，对其进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalacto pyranoside，简称IPTG）诱导。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，简称SDS-PAGE）结果表明，在诱导时间为3 h、IPTG浓度为0.1 mmol/L的
江苏农业科学 2020年14期2020-08-28
- 沙糖橘S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因克隆及表达分析
，且通过构建原核表达载体能成功诱导表达获得CrSAMDC融合蛋白。【结论】CrSAMDC基因在沙糖橘中的表达具有组织特异性，且以单拷贝存在，在干旱胁迫下呈上调表达趋势，即参与干旱胁迫响应的多胺代谢调控。关键词： 沙糖橘;CrSAMDC基因;多胺;干旱胁迫;原核表达;Southern杂交Abstract：【Objective】The S-adenosylmethionine decarboxylase gene（CrSAMDC） was cloned fro
南方农业学报 2020年6期2020-08-11
- 小鼠CD40胞外片段的原核表达及多克隆抗体的制备
达载体，进行原核表达及多克隆抗体制备。结果表明，成功扩增了522 bp的目的基因，表达并纯化获得了45 ku的CD40重组蛋白，多克隆抗体抗体不但可与重组蛋白结合，与小鼠脾脏天然CD40蛋白也可以特异性结合。说明CD40重组蛋白表达成功，且制备的抗体有望模拟CD40L为B细胞活化提供第二信号。关键词：CD40;原核表达;多克隆抗体;半抗原;免疫增强中图分类号：Q786 文献标识码：A文章编号：0439-8114（2020）06-0130-0
湖北农业科学 2020年6期2020-07-09
- 林麝源肺炎克雷伯氏菌新LysR家族转录因子的原核表达
372基因;原核表达林麝（Moschus berezoviskii）为《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录Ⅱ和国家一级保护动物，其雄性分泌的麝香为名贵的中药材和高级动物香料，具有重要的社会价值和经济价值。人工养殖是林麝资源保护的主要对策之一，我国从1958年开始人工养殖林麝，历经半个多世纪，发展仍较缓慢。影响林麝人工养殖的一个重要原因是林麝化脓性肺炎疾病的发病率和死亡率高[1]。林麝患化脓性肺炎后前期一般不易发现，发现时已经处于较严重阶段，基本上无救治希望
江苏农业科学 2020年9期2020-06-21
- 水稻未知功能结构域基因OsDUF6的抗体制备
sDUF6的原核表达载体检测多克隆抗体的特异性，最后利用转基因植株进一步检测抗体。[结果]利用高效液相色谱法（HPLC）检測3条合成的短肽（蛋白纯度>85%）用于免疫新西兰雄性大白兔，得到效价为1：512000的3种多克隆抗体。构建原核表达载体pGEX6p-1-DUF6，在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白GST-OsDUF6，并用GST单克隆抗体成功检测到重组蛋白。在此基础上，对制备的抗体进行特异性檢测，结果发现Anti-DUF6-1多克隆抗体结合重组蛋白GST
福建农业学报 2020年2期2020-06-19
- 基于密码子优化策略的牛妊娠相关糖蛋白9（bPAG9）的原核表达及纯化
态细胞中进行原核表达，经过超声波裂解和亲和层析方法获得重组蛋白bPAG9。用SDS-PAGE 和 Western Blot方法检测重组蛋白bPAG9的表达效果。结果显示，PCR扩增得到1 128 bp的优化bPAG9基因片段，构建的重组质粒pET30a-bPAG9经双酶切获得约5 244 bp和1 125 bp的2条片段，与预期值相符;对重组载体测序，测序结果与优化后的基因碱基序列完全一致，编码的氨基酸序列未发生突变;SDS-PAGE 和 Western
江苏农业学报 2020年1期2020-03-27
- 猪源IKKγ在原核和真核表达系统中的表达及其多克隆抗体制备
15）中克隆原核表达的IKKγ基因功能片段（561 bp），与原核表达载体pET-32a（+）构建原核重组质粒pET-IKKγ，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后进行IPTG诱导表达，表达的融合蛋白经纯化和浓缩后，免疫小鼠制备猪源IKKγ多克隆抗体。同时克隆IKKγ基因全长序列（1356 bp），与真核表达载体pCMV-HA构建真核重组质粒pCMV-HA-IKKγ，分别转染293T细胞和PK-15細胞，检测融合蛋白表达情况。【结果】以原核重组质粒p
南方农业学报 2020年12期2020-03-24
- 松材线虫效应蛋白Bx-FAR-1的原核表达与活性测定
的片段连接至原核表达载体pET-32a（+）。通过原核表达系统诱导并纯化获得大量效应蛋白Bx-FAR-1，利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western blotting对纯化获得的蛋白进行鉴定，同时通过本氏烟瞬时表达系统验证蛋白活性。【结果】从松材线虫cDNA中成功扩增出Bx-FAR-1基因（BXY_1685000.1）;通过同源重组成功获得重组表达载体pET32a-BxFAR，并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞。当诱导条件为15 ℃
南方农业学报 2020年11期2020-02-22
- 番木瓜干旱胁迫相关CpDHN基因的克隆与原核表达
CpDHN的原核表达载体，SDS-PAGE分析显示，该蛋白在大肠杆菌中可高效表达。这些结果为下一步的功能鉴定奠定了坚实的基础。关键词：番木瓜;脱水素;基因克隆;表达分析;原核表达中图分类号：S59;S813.3 文献标识码：AAbstract： Based on de novo assembled transcript sequences， a 425-bp cDNA of CpDHN， which includes the complete c
热带作物学报 2020年12期2020-02-22
- 鸽avUCP基因克隆、原核表达与多抗制备
守序列，基于原核表达系统，构建了pET32a-avUCP原核表达载体，成功表达了鸽avUCP重组融合蛋白，经Ni2+亲和层析法纯化重组蛋白，SDS-PAGE结果显示，所得到的目标蛋白分子量与预测值一致，表明纯化得到了高纯度目标蛋白。以目标蛋白为抗原免疫新西兰大白兔，5免后制备抗血清，ELISA检测结果显示效价为1∶51200。Western blot检测结果表明，该抗体不仅可以免疫结合重组avUCP蛋白，而且与鸽（Columba）、画眉（Garrulax
安徽农学通报 2020年23期2020-01-03
- 辣椒疫霉菌葡聚糖酶抑制蛋白的原核表达、纯化及结晶
（GIP）;原核表达;纯化;结晶中图分类号：S432.4+4：Q78 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2019）10-0111-06Prokaryotic Expression， Purification and Crystallization of GlucanaseInhibitor Protein （GIP） from Phytophthora capsicaWang Huizheng， Lan Yubin（College of Agr
山东农业科学 2019年10期2019-12-09
- 单核细胞增生李斯特菌新型内化素lmo0549的分子特征及其表达
;分子特征;原核表达中图分类号：S852.61 文献标志码： A文章编号：1002-1302（2019）18-0199-05收稿日期：2018-05-21基金项目：国家自然科学基金（编号：31360596、30960274）;国家重点研发计划（编号：2016YFD0500900）;乌鲁木齐市科技局渝乌科技合作项目（编号：Y161220001）;新疆生产建设兵团中青年科技创新领军人才计划（编号：2016BC001）。作者简介：王立霞（1992—），女，甘肃陇
江苏农业科学 2019年18期2019-11-28
- 牛传染性鼻气管炎病毒部分gB蛋白的原核表达及抗原性分析
gB基因进行原核表达，并对表达产物进行抗原性分析，利用笔者所在实验室已构建好的gB-BL21重组阳性菌落，进行异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，并对培养及诱导表达条件（IPTG最佳浓度、作用时间）等影响表达的因素进行优化，然后将表达的gB重组蛋白进行亲和层析纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果表明，gB蛋白在大肠杆菌中高效表达，表达蛋白的相对分子量约为32.4 ku，与预期的蛋白大小一致。经BCA（聚氰基丙烯酸正丁酯）蛋白
江苏农业科学 2019年17期2019-11-13
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体间接ELISA检测方法的建立
7基因，构建原核表达载体pET28a-Nsp7，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，并诱导重组蛋白表达。利用亲和层析纯化重组蛋白，Western Blot鉴定表达产物。将纯化后的重组蛋白按不同浓度包被酶标板，通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度，并对其条件进行优化，最终建立检测PRRSV Nsp7抗体的间接酶联免疫吸附测定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）方法。结果表明，试验表达了重组Nsp7
国外畜牧学·猪与禽 2019年8期2019-11-11
- 猪IgG1-Fc基因的克隆、原核表达及表达条件优化
E3）中进行原核表达，然后通过优化异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导浓度、菌体培养温度及菌体培养时间，实现pIgG1-Fc重组蛋白的高效表达。结果表明，成功克隆了pIgG1-Fc的基因666 bp，共编码222个氨基酸;重组原核表达质粒pET30a（+）-pIgG1-Fc经过酶切和测序证明构建正确，重组质粒在大肠杆菌BL21（DE3）中能够表达，表达的融合蛋白分子量约为36 ku。其最佳表达条件如下：在25 ℃条件下加入终浓度为1 mmol/L的IPTG诱
江苏农业科学 2019年15期2019-10-18
- 小反刍兽疫病毒间接化学发光抗体检测方法的建立与优化
摘要：构建了原核表达质粒pET-28a-N，经原核表达纯化获得小反刍兽疫病毒N蛋白。将纯化的小反刍兽疫病毒N蛋白与对应的酶标二抗配对，通过对各个反应条件的优化建立了间接化学发光抗体检测方法。通过对血清样本的检测，对该方法的敏感性、特异性、重复性、符合率进行了评价。试验结果显示：N蛋白最适包被浓度为0.5 μg/mL，最适包被条件为4℃ 24 h;酶标二抗最适工作浓度为1∶2000。特异性试验证明，该方法与羊常见病毒的抗体阳性血清没有交叉反应。通过检测大量小
现代畜牧科技 2019年10期2019-10-17
- 羊口疮病毒127基因的克隆表达及亚细胞定位分析
27基因进行原核表达及亚细胞定位，本试验采用PCR方法扩增出ORFV127基因，成功构建原核表达重组质粒pGEX-6p-1—ORFV127和真核重组质粒pECFP-N1- ORFV127。将原核表达重组质粒转化到大肠埃希氏菌中表达，并进行纯化和鉴定。以纯化的蛋白质免疫BALB/e雌鼠制备多克隆抗体，利用Western-blot技术鉴定其反应原性。利用脂质体介导法将重组质粒pEGFP-N1-ORFV/27转染至Vero细胞，通过倒置荧光显微镜观察其在细胞中的
江苏农业学报 2019年3期2019-09-10
- 拟南芥细胞周期基因AtCDC5的功能研究及抗体制备
肠杆菌中进行原核表达和纯化，免疫家兔获得针对AtCDC5的多克隆特异性抗体，从表型、细胞和蛋白质水平研究AtCDC5基因的功能。结果表明，GK_278809的主根因发育受到抑制而生长速度缓慢;AtCDC5-GFP融合蛋白主要定位于细胞核中：经过分离得到的AtCDC5蛋白抗血清能够有效地检测出10ng原核表达的AtCDC51_144抗原，并在原生质体AtCDC5过表达体系中检测出1条分子量约为120 000的条带，此条带与AtCDC5-GFP大小相近。本研究
江苏农业学报 2019年1期2019-09-10
- 肝片吸虫CatB4蛋白分子特征及其免疫原性分析
征分析;构建原核表达载体pET-CatB4，经IPTG诱导获得融合蛋白后进行SDS-PAGE和Western blotting检测分析;并以融合蛋白CatB4免疫小鼠制备多克隆抗体，利用免疫组化对融合蛋白在肝片吸虫体内的表达进行定位分析。【结果】肝片吸虫CatB4基因片段为699 bp，其编码蛋白等电点（pI）7.95，理论分子质量25.89 kD，无信号肽和跨膜区，属于非分泌性蛋白;CatB4蛋白存在10个潜在的磷酸化位点、2个N-糖基化位点和 7个N-
南方农业学报 2019年1期2019-09-10
- 丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740的克隆表达和免疫原性分析
;特异基因;原核表达;免疫原性中图分类号：S852.62文献标志码：A 文章编号：1008-0384（2019）10-1124-050引言【研究意义】丝状支原体山羊亚种Mycoplasmamycoides subsp.capri，Mille是引起羊支原体性肺炎（Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats，MPGS）的重要病原之一，此外，还可引起山羊的乳房炎、败血病、角膜结膜炎等。MPGS以羊持续流鼻液、渐进性消瘦为主要
福建农业学报 2019年10期2019-09-10
- 鸭疫里默氏杆菌Tet（X）基因原核表达及其功能鉴定
，以大肠杆菌原核表达体系进行诱导表达，利用生物信息学软件分析原核表达蛋白的功能和特性，并采用实时荧光定量PCR检测四环素和多西环素对鸭疫里默氏杆菌Tet（X）基因的调控作用。【结果】从鸭疫里默氏杆菌基因组扩增获得的Tet（X）基因编码框全长1167 bp，编码388个氨基酸，其编码蛋白分子量约42.53 kD，理论等电点（pI）为10.073，与AS87_09615（Yb2）、RIA_0369（YA-GD）、RAYM_08235（RA-YM）、G148_1
南方农业学报 2019年4期2019-09-10
- 桂花萜烯合酶（TPS）的生物信息学与原核表达分析
及其结构，在原核表达系统中进行4个TPS蛋白的体外表达，并对可溶性的TPS4重组蛋白进行了体外酶反应功能分析。结果表明：（1）4个TPS蛋白的理化性质差异较小，但仅有TPS4蛋白定位于其他靶向，不含信号肽，延伸链的比例较低，在靠近氨基端的区域内不含延伸链。（2）4个TPS蛋白在原核系统中均可成功表达，但仅有TPS4获得了可溶性重组蛋白。（3）将纯化的TPS4重组蛋白分别与GPP、NDP和FPP进行反应，均只检测到一种产物，分别为反式-β-罗勒烯、β-水芹烯
广西植物 2019年5期2019-09-10
- 尼罗罗非鱼PPARδ的原核表达及其多抗制备和纯化
，将其克隆至原核表达载体pET-B2m中，构建重组表达载体;重组质粒转人大肠杆菌B21并用IPTG进行诱导表达，用SDS-PAGE鉴定表达产物。用镍柱纯化重组蛋白后免疫日本大耳兔制备多克隆抗体，用间接ELISA技术检测抗体效价，WesternBlot鉴定抗体的特异性。[结果]成功构建了原核表达载体pET-B2m-PPAR8，实现了重组蛋白的原核表达和纯化，重组蛋白以包涵体蛋白和可溶性蛋白2种形式存在，分子量约为90kD;制备的多克隆抗体效价为1：20480
福建农业学报 2019年9期2019-09-10
- 集胞藻Synechocystis sp. PCC 6803 slr1501的克隆及原核表达分析
lr1501原核表达载体，并转化至大肠杆菌BL21（DE3）进行分析。经1 mmol/L IPTG诱导2 h后Slr1501蛋白成功表达，表达量随诱导时间的延长而增加，且主要以包涵体形式表达。Western blot检测结果显示Slr1501重组蛋白特异性表达。本试验结果为进一步研究该基因的功能奠定了基础。关键词：集胞藻6803; 乙酰基转移酶; slr1501; 原核表达; 基因功能中图分类号：S555+.6：Q785文献标识号：A文章编号：1001-4
山东农业科学 2019年7期2019-09-03
- 解淀粉芽孢杆菌草酸脱羧酶基因的克隆、原核表达与活力测定
对该基因进行原核表达。通过PCR技术克隆了淀粉芽孢杆菌C（10）的草酸脱羧酶基因，构建了原核生物表达载体pET28a-Baoxdc，对其进行表达与纯化。结果表明，扩增所获解淀粉芽孢杆菌C（10）的草酸脱羧酶全基因序列全长为1 161 bp，在大肠杆菌中进行表达，添加诱导剂IPTG、MnCl2至终浓度分别为0.6、6 mmol/L，诱导4 h时的酶活力和比活力最高，分别为3.793 2 U/mL和3.145 3 U/mg。关键词：解淀粉芽孢杆菌;草酸脱羧酶;
江苏农业科学 2019年12期2019-08-21
- 毛白杨木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶PtoXTH35原核可溶性表达方法研究
.1a等5种原核表达载体，经双酶切和测序验证后转化至BL21（DE3）感受态，使用终浓度为0.4 mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导其表达目的蛋白。经SDS-PAGE检测，结果表明5种载体均可表达目的蛋白，pET28a、pET32a、pGEX-4t-1等3种载体所表达蛋白均以包涵体的形式存在，而pMAL-c5e和pET 43.1a载体携带蛋白表达量高并且所表达蛋白50%为可溶性蛋白，实现了毛白杨PtoXTH35在原核表达系统中的
江苏农业科学 2019年8期2019-08-20
- 新型免疫分子TRIM23参与斑马鱼抗嗜水气单胞菌免疫应答
序列，将其与原核表达载体pGEX-4T-1连接并转化至E.coli Rosetta感受态细胞，用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，利用谷胱甘肽巯基转移酶（GST）蛋白纯化介质纯化目的蛋白后，将其与嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）孵育，检测抑菌活性。结果显示，重组表达载体pGEX-TRIM23在宿主菌Rosetta中表达出约91 ku的重组蛋白，且蛋白部分以可溶形式存在于上清中，经体外抑菌试验检测发现，TRIM23蛋白能够抑制嗜
江苏农业科学 2019年4期2019-08-10
- 甘蔗花叶病毒辅助成分一蛋白酶基因原核表达及抗血清制备
，酶切后连接原核表达载体pEHISTEV，得到重组质粒pE-HISTEV - SCMV - HC - Pro。将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta，经IPTG诱导后，表达出57 kD的融合蛋白。切胶回收融合蛋白，多点注射法免疫新西兰长耳兔，制备SCMV HC - Pro抗血清。间接ELISA结果表明，该血清效价为1：8 192。感染DWKI的玉米叶片病汁液稀释128倍时，该血清仍然能够有效检测出HC - Pro。Westem - blot检测结果表明，
山东农业科学 2019年3期2019-08-03
- 北柴胡转录因子BcAP2-13的原核表达和多克隆抗体制备
6×His的原核表达载体，构建了调控北柴胡皂苷生物合成的转录因子基因BcAP2-13的原核表达载体p13-SUMO-His6。载体热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）后，用异丙 基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG）诱导培养，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表明，28 ℃和37 ℃不同温度诱导条件下均得到了融合蛋白13-SUMO-His 6。以Ni-NTA柱纯化的融
江苏农业科学 2019年10期2019-07-08