重链
- 基于串联亲和层析法纯化并鉴定猪初乳中SIgA
约为55 ku的重链和两条分子量约为25 ku的轻链组成,加上15 ku的J链和约为75 ku的分泌成分,SIgA的分子量约为400 ku[6]。除了形成主要的二聚体形式外,SIgA还存在四聚体,五聚体等更多元的聚合形式[7-8]。近年来,基于IgA单克隆抗体的治疗药物研究越来越多[9-10]。针对结核分枝杆菌,大肠杆菌等呼吸道、消化道的病原,靶向黏膜免疫可产生特异性SIgA的黏膜疫苗也成为疫苗研究的新的方向[9,11]。病原感染机体后,SIgA出现时间相
畜牧兽医学报 2023年9期2023-10-09
- 抗体的特异性形成和类别转换
白）具有唯一的由重链可变区和轻链形成的抗原结合域，可以和细胞外液中的抗原结合，中和抗原，形成沉淀，以便巨噬细胞等消灭抗原。而同一个B细胞的膜型免疫球蛋白具有相同的抗原结合域，可识别抗原，激活B细胞。不同类别的免疫球蛋白具有不同的恒定区。B 2 细胞免疫依赖胸腺成熟的辅助性T细胞，而B 1 细胞免疫则不需要。关键词 抗体 特异性 类别转换中图分类号 Ｇ633. 91 文献标志码 B人教版高中生物学（2019年版）《选择性必修一·稳态与调节》中“免疫调节”一章
中学生物学 2023年1期2023-05-30
- 基于分子对接技术研究鱼源抗冻多肽与鱼肌球蛋白的相互作用
的品质。肌球蛋白重链（Myosin Heavy Chain，MHC）具有与完整肌球蛋白形成凝胶的相同能力。而肌球蛋白轻链不能单独形成凝胶，只在肌球蛋白重链碱基凝胶形成中起辅助作用。因此，肌球蛋白重链在肌球蛋白形成凝胶三维网状结构的过程中起着非常重要的作用。抗冻多肽是一类小分子蛋白或蛋白质水解物，它是抗冻蛋白中局部具有抗冻活性的特异多肽链结构域。抗冻多肽在结冰或亚结冰状态下能保护生物体免受伤害，它能非依数性降低溶液冰点、有效降低冰晶生长率、抑制冰晶重结晶的发
食品工业科技 2022年20期2022-10-11
- 重链沉积病的分子机制及诊疗进展*
人民医院肾内科）重链沉积病（heavy chain deposition disease，HCDD）是一种因单克隆免疫球蛋白重链在组织沉积所致的全身性疾病，属于罕见的单克隆免疫球蛋白沉积病（monoclonal immunoglobin deposition dis ease，MIDD），肾脏是最常被累及的器官，还可累及肝脏、甲状腺、皮肤、骨骼肌等[1-2]，36%～50%患者随访1 年内需要血液透析治疗[3]。HCDD 发生机制尚不清楚，可能与重链恒定区
交通医学 2022年3期2022-08-11
- 硬骨鱼类特有免疫球蛋白IgT的研究进展
疫球蛋白是由两条重链(IgH)和两条轻链(IgL)通过疏水作用结合在一起，并由链间二硫键相连组成的“Y”形四肽链结构，每条重链和轻链各包含一个氨基端(N端)的可变区(V)结构域和一个(轻链)或多个(重链)羧基端(C端)的恒定区(C)结构域。在重链和轻链V区的某些特定位置上，其氨基酸残基的组成和排列顺序相比V区内的其他位置变化更大，称为超变区，又称互补决定区(complementary determinant region，CDR)；V区中其他变化较少的部分
大连海洋大学学报 2022年2期2022-05-23
- 蛋白质磷酸化对肌动球蛋白解离及其乙酰化水平的影响
【】研究肌球蛋白重链和肌动蛋白磷酸化对其乙酰化水平、肌动球蛋白解离及ATP酶活性的影响，为通过调控磷酸化水平改善肉品嫩度提供理论依据。以羊背最长肌为材料制备肌肉匀浆液，采用碱性磷酸酶抑制剂（抑制去磷酸化）和蛋白激酶抑制剂（抑制磷酸化）调控其磷酸化水平，在4℃分别孵育0、0.5、4、12、24、48和72 h，利用SDS-PAGE电泳和荧光染色、蛋白质免疫印迹、ATP酶活性测定试剂盒分析蛋白质磷酸化水平、乙酰化水平、肌动球蛋白解离程度和ATP酶活性随孵育时间
中国农业科学 2022年7期2022-04-14
- 基于数据非依赖性采集质谱技术对注射用曲妥珠单抗及其类似药结构的表征及相似性研究*
1.4抗体轻链与重链的分析 取抗体溶液(5 mg·mL-1)20 μL，加入水稀释至100 μL，加二硫苏糖醇(DTT)溶液8 μL，50 ℃金属浴30 min，放冷至室温。加入0.5 mL 10K超滤管中，离心(13 000 r·min-1，r=32 mm，10 min)。取下层液，进行离心(4000 r·min-1，r=32 mm，1 min)，取上清液，加入到内插管，准备进仪器检测。1.4.1色谱条件(UPLC) 色谱柱为MassPREP在线脱盐小柱
医药导报 2022年4期2022-03-28
- B细胞抗原受体组装的结构原理
使用Igα与一条重链（µHC）的Cµ3-Cµ4 结构域结合，而将另一条重链（µHC’）空着。两种µHCs 的跨膜结构域（TMD）螺旋与Igα/β异二聚体的跨膜结构域（TMD）螺旋相互作用，形成紧密的四螺旋束。TMD 的不对称性阻止了两分子Igα/β异二聚体的募集。令人惊讶的是，µHC的ECD和TMD之间的连接肽介入Igα和Igβ的ECD和TMD之间，以通过显著的电荷互补来引导TMD组装。IgβITAM 的密度较低但明显，与TMD 相邻，表明ITAM 磷酸化
广东药科大学学报 2022年6期2022-02-26
- 人源抗体转基因动物平台及专利保护
是将部分人源抗体重链和κ和/或λ轻链转入动物体内，同时敲除动物内源的免疫球蛋白重链、κ轻链和/或λ轻链，其代表为Lonberg博士和Larry Green博士两个团队分别培育出的HuMAb©小鼠和XenoMouse©小鼠[7-8]；第二代人源抗体转基因动物在第一代基础上，实现了完整人源免疫球蛋白基因的稳定转入，使人源抗体重排多样性得到了保障，其代表为日本麒麟公司培育的TCTMMouse小鼠[9]；第三代人源抗体抗体转基因动物又在第二代的基础上，重点解决人源
生物学杂志 2021年6期2021-12-20
- MYH3 基因在主要模式动物和畜禽中的研究进展
由2 个肌球蛋白重链（Myosin Heavy Chain）和4 个肌球蛋白轻链（Myosin Light Chain）组成，可以通过水解ATP 将化学能转化为机械能，与肌动蛋白等协作完成肌肉的收缩过程[1]，是肌肉组织的重要组成部分。肌球蛋白重链由MYH基因家族进行调控，其与肌肉收缩速度有关[2]。哺乳动物至少有10 种肌球蛋白重链亚型[3]，不同亚型的肌球蛋白重链会对肌肉剪切力、肌内脂肪含量造成不同的影响[4]。20 世纪80 年代，科学家在研究中发现
中国畜牧杂志 2021年12期2021-12-17
- 抗登革病毒人源化单克隆抗体h1A1D的构建及纯化
鼠源单克隆抗体轻重链可变区氨基酸序列与人源抗体轻重链恒定区氨基酸序列合成至pcDNA 3.1(+)载体上，转染CHO-K1细胞进行抗体表达，Protein A亲和纯化后，成功制备了抗DENV人源化单克隆抗体h1A1D，本研究结果对进一步探索DENV致病机制及研发登革热的抗体药物提供参考。1 材料与方法1.1 试剂和仪器仓鼠卵巢细胞CHO-K1细胞购自中国科学院细胞库；限制性内切酶、质粒提取试剂盒、DL5000 DNA Marker均购自Sigma公司；F-
中国兽医学报 2021年9期2021-11-02
- 弓形虫SAG1重组抗体制备及抗原表位鉴定
知序列信息的抗体重链和轻链而形成，可以避免多克隆抗体的批次不稳定性和杂交瘤单克隆抗体失效的问题，从而被科研工作者所青睐[6]。目前，弓形虫蛋白抗体大多是多克隆或杂交瘤单克隆抗体，而重组抗体比较少见。本研究利用单个质粒表达抗体重链和轻链，制备了弓形虫SAG1重组抗体，试验结果表明该重组抗体特异性高、批次间可重复性强，而且可重新编辑加入荧光基团，适用于免疫印迹和免疫荧光试验。本研究采用的重组抗体制备方法可为其他蛋白的抗体制备提供借鉴。1 材料与方法1.1 虫株
中国兽医学报 2021年6期2021-08-10
- 抗GPC3/CD3双特异性重链抗体的制备及其抗肝癌作用评价
作为一种仅含单个重链可变区的特殊抗体，具有相对分子质量小且易于渗透的特点，能发挥一定的抗肝癌效果[9]。将其与PE38等毒素融合构建免疫毒素，可进一步增强抗肿瘤活性[10]。将抗CD3 scFv和抗GPC3 scFv用短的Linker进行连接构建双特异性T细胞衔接子(BiTE)，可有效募集T细胞靶向杀伤GPC3阳性肝癌细胞[11]。但BiTE亲和力低、纯化困难和半衰期短的缺点限制了其应用。另外靶向GPC3的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法也是目前肝
中国临床医学 2021年3期2021-07-03
- α重链病临床特征和实验室检查特征
441000α重链病又称免疫增生性小肠病，也曾被称为“地中海淋巴瘤”，是由SELIGMANN在1968年首次发现的，其特征为只合成和分泌不完整的免疫球蛋白α重链，而无轻链表达[1]。该病在临床上非常少见，本研究以华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的1例α重链病患者(病例4)，2007年徐三清等[2]报道的1例α重链病患者(病例1)，2014年赵辰等[3]报道的1例α重链病患者(病例2)，山东菏泽市立医院宝荣等[4]报道的1例α重链病患者(病例3)各项
检验医学与临床 2020年9期2020-05-21
- 猪的免疫球蛋白基因鉴定和注释
IG)的基因包括重链(immunoglobulin heavy chain)和轻链(immunoglobulin light chain)基因，重链和轻链的胚系基因(germline gene)由编码可变区(V区)和恒定区(C区)的多个基因偏关串联形成的基因簇组成。重链可变区基因包括V、D、J三类基因片段，轻链可变区基因包括V、J两类基因片段[13]。重链和轻链基因在基因组中通常位于不同染色体上，其胚系基因彼此由内含子隔开。免疫球蛋白是指具有抗体活性且化学
中国实验动物学报 2020年2期2020-05-03
- 新疆双峰驼纳米抗体、重链抗体和常规抗体的热稳定性比较
在天然缺失轻链的重链抗体(Heavy Chain Antibodies, HCAbs)以来[1]，但研究者对于HCAbs自身的功能和特性、其在骆驼体液免疫系统中的作用、与疾病的关系等研究较欠缺、鲜有文献报道。研究骆驼HCAbs的功能及性质，对分析骆驼免疫系统的功能，研究更有效的疾病预防和治疗手段，开发和利用这类抗体具有重要意义。【前人研究进展】 骆驼科现存3属6种动物。在所有这些动物中，除具有由2条重链和2条轻链组成的IgG1型常规抗体外，还存在天然缺失轻
新疆农业科学 2020年2期2020-03-12
- 重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定
化抗VEGF抗体重链轻链序列,其中一对表达量和生物效应较好,可进一步扩大培养.1 材料与方法1.1 材料与仪器HEK-293,HEK-293F,C6细胞由长春工业大学细胞生物实验室保存,常规培养;pcDNA3.1+质粒由长春工业大学细胞生物实验室保存;质粒大提试剂盒(北京天根生化科技有限公司)；转染试剂(美国 Polysciences公司)；内切酶(大连Tokava生物技术公司)；辣根过氧化物酶(HRP)兔抗人IgG(北京索莱宝公司)；标准品(美国Roch
吉林大学学报（理学版） 2019年6期2019-11-28
- HEK 293细胞中重组型抗体表达和分泌的监测系统的构建
。IgG由2条γ重链和2条轻链通过二硫键共价连接形成四聚体蛋白质，每个轻链和重链的N端均含有针对同一抗原的抗原结合域。在IgG的Fc结构域上有一个高度保守的N-糖基化位点[5]。目前生物抗体药物主要由经过基因工程改造可大规模培养的宿主细胞表达生产，这些工程细胞株主要有中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）、幼年叙利亚地鼠肾细胞 （Baby Hamster Syrian Kidney、BHK），小鼠骨髓瘤细胞株 Sp2/0和
食品与生物技术学报 2019年7期2019-10-30
- 鲫和虹鳟IgM重链恒定区的融合表达及抗血清的制备
。Ig分子由两条重链（IgH）和两条轻链（IgL）通过二硫键连接在一起，抗原结合位点位于IgH和IgL链的可变区。虽然鱼类的免疫系统比较原始，但是，硬骨鱼体内产生的Ig包括IgM[1]、IgD[2-4]和IgT/IgZ[5，6]。在机体内发挥功能的免疫球蛋白主要是IgM[7]，哺乳动物体内的IgM分子主要是以五聚体形式存在，而硬骨鱼的IgM分子主要为四聚体[8]。IgD在体液免疫中发挥重要作用[9，10]，IgT 在粘膜免疫应答中产生[11-13]。抗体具
水产学杂志 2019年4期2019-08-13
- 三个品系蛋鸭β2m基因的克隆及多态性研究
CxVxH”和与重链相互作用的位点均保守性存在；筛选的47条β2m氨基酸序列同源性为95%～100%，完全一致序列普遍存在；鸭β2m氨基酸序列与鸡同源性最高，与鱼类和两栖类最低，结果与遗传进化分析相一致；成熟肽中高变异位点和与重链相互作用的变异位点多位于β折叠上，但不会对β2m的功能产生影响。综合来看，鸭β2m基因保守性高，仅存在一种类型，与MHCⅠ重链的作用方式也相对固定。本试验结果有助于深入理解鸭β2m的分子特性，推动MHCⅠ相关免疫研究的开展。关键词
山东农业科学 2018年8期2018-11-22
- 黏膜相关淋巴组织淋巴瘤中Ig蛋白重链表达与IgH基因重排的研究
，立足于Ig蛋白重链可变区的IgH基因重排与重链恒定区的抗体类别转换，分表1 试验组及对照组中各种Ig蛋白重链表达情况及表达模式[n(%)]a:试验组间比较；b：试验组各肿瘤分别与对照组比较;c:Fisher检验；d:试验组与对照组比较；▲:IgE在各组中均为阴性表达，因而不列入表中;-:此项无数据析IgH基因重排与Ig重链表达的情况，以期找到有利于MALToma诊断和鉴别诊断的新方法。1 资料与方法1.1一般资料 收集江苏省连云港市第一人民医院病理科20
重庆医学 2018年28期2018-10-29
- 人源化抗Siglec-9抗体Fab片段的制备及鉴定①
PCR扩增抗体轻重链可变区和恒定区，阳性克隆送检测序后与数据库VBASE2比对，得到可变区和恒定区的核酸和氨基酸序列。根据可变区和恒定区的序列和重叠延伸PCR的原理设计抗体轻链和重链的可变区和恒定区引物，轻链引物和重链引物分别如下：L-F：CATGCCATGGGCCAGTCTGCCCTGACTCAGCCCC； L-R；CCCAAGCTTTTATGAACATTCTGTAGGGGCCAC；H-F：CCGGATATCGCAGGTGCAG-CTGGTGCAGTCT
中国免疫学杂志 2018年6期2018-07-06
- A型肉毒素重链干预神经细胞组蛋白3乙酰化水平的初步研究
T/A分子由一条重链(heavy chain-HC, 分子量为100×103)和一条轻链(light chain-LC，分子量为50×103)构成，由二硫键相互连接。重链的羧基端含有与突触前膜蛋白受体结合的位点，可与膜受体结合形成毒素-受体复合物，轻链随重链内吞进入细胞发挥毒性作用[1]。本研究团队的前期研究结果显示人工重组的BoNT/A重链可促进体外培养的神经细胞突起生长；在体实验也进一步证实BoNT/A重链可干预脊髓损伤后局部多种分子量水平的蛋白表达[
中国比较医学杂志 2018年6期2018-06-26
- 凡纳滨对虾网格重链蛋白与WSSV结构蛋白在体外的相互作用*
到深入阐释。网格重链蛋白(Clathrin Heavy Chain, CHC)是网格蛋白的主要成分之一，是进化上保守的大分子蛋白，迄今只在真核生物中发现，包括近端区、连接区、脚踝区、膝弯曲区、腿远端区、腿近端区和铰链区。网格重链蛋白N端有一个衔接蛋白结合结构域(TD)，通过结合衔接蛋白连接要运输的物质(Teret al, 1998;Pearseet al, 2000; Zhu, 2015)。网格蛋白具有介导膜蛋白、生长因子、受体、病原体、突触等物质进行内吞
渔业科学进展 2018年2期2018-03-29
- 色谱法分析重组单克隆抗体电荷异质性应用进展
单克隆抗体由2条重链2条轻链组成，相对分子质量高达150 kDa左右，结构复杂。目前，单克隆抗体大多是采用哺乳动物细胞表达系统进行生产，单克隆抗体在生物化学和生物物理方面是异质的，这主要取决于复杂的翻译后修饰和降解事件[1]，导致了产品的分子大小、电荷、糖基化修饰等不均一性及其相应的变体产生[2]。采用一些电荷分离技术如等电聚焦(IEF)凝胶电泳、毛细管等电聚焦(cIEF)凝胶电泳、阳离子交换色谱(CEX)、阴离子交换色谱(AEX)分析单抗会发现变体，这些
实用药物与临床 2018年4期2018-03-17
- A型肉毒素重链干预对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白表达的影响
毒素氨基端，称为重链(heavy chain，HC), 负责与靶细胞膜结合及介导毒素的内吞；较短的一条位于毒素的氨基侧，称为轻链(light chain，LC)。轻链部分具有Zn+依赖的蛋白水解酶活性，是毒素的毒性催化单位[12-13]。一些在体实验发现A型肉毒素引起肌肉麻痹的恢复期(注射后3～4月)，随着肌肉功能的逐渐恢复，局部组织内可见运动终板样神经末梢结构[14]。因此，根据BoNT/A化学结构的功能特征，在去除轻链的毒性作用后，BoNT/A重链本身
中国比较医学杂志 2018年2期2018-03-05
- 骆驼天然单域重链抗体库的构建与鉴定
统内存在一种仅由重链单一的折叠单元组成的抗体，将其称为单域重链抗体(variable domain of heavy-chain of heavy-chain antibody,VHH)或纳米抗体(nanobody,Nbs)[1]。纳米抗体仅由重链抗体的可变区组成，较普通抗体具有一些独特性能[2]，如分子量小、稳定性高、亲和力高[3]、免疫原性弱、良好而广泛的抗原结合能力[4]以及水溶性好等特点[5]，使其在病原的检测、食品安全分析[6]等领域被广泛应用。
动物医学进展 2018年1期2018-02-10
- 靶向家蚕丝素重链基因的锌指蛋白结构域的人工构建*
5)靶向家蚕丝素重链基因的锌指蛋白结构域的人工构建*刘婷婷，梁梓强，梁安文，郭技星，李广宏，王方海(中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室//昆虫学研究所，广东 广州510275)将多个可特异识别并结合DNA的锌指单体串联在一起即可构成锌指蛋白结构域，若将其与不同的功能域因子融合，则会构建出有很多用途的人工蛋白分子，从而实现对基因组的各种定点修饰或调控。以家蚕丝素重链基因为研究对象，首先利用Zinc Finger Tools软件筛选到了一个合适的靶标
中山大学学报(自然科学版)(中英文) 2017年2期2017-06-10
- 一种新型的利用DSS交联剂避免重链轻链干扰的免疫沉淀技术
对分子量较大的为重链，大小为55KDa，另外两条较短的相对分子量较小的为轻链，大小25KDa。在免疫沉淀技术中如果目的条带大小和重链轻链的大小一样或接近将影响实验结果的判断。本文章通过DSS 使抗体和蛋白A/G磁珠紧密交联，即使高温或还原剂作用下也不会破坏交联的结构，而高温或还原剂可以使抗体和抗原分开，从而达到SDS-PAGE 检测到的条带都是蛋白条带而没有重链轻链条带的干扰的目的。关键词 DSS 重链 轻链 免疫沉淀当抗原或抗原类似物侵入机体将诱导淋巴细
科教导刊 2017年10期2017-06-09
- A型肉毒杆菌神经毒素重链干预大鼠脊髓损伤后蛋白表达的初步研究*
肉毒杆菌神经毒素重链干预大鼠脊髓损伤后蛋白表达的初步研究*兰 婧， 王 红， 白 娟， 王亚芳， 李夏青△(山西医科大学病理生理教研室， 山西 太原 030001)目的： 初步观察大鼠脊髓损伤模型基础上局部注射小剂量A型肉毒杆菌神经毒素重链(BoNT/A HC)后对局部蛋白表达谱的影响，为探讨BoNT/A HC干预在体神经损伤后相关蛋白表达及其干预神经再生机制提供实验基础。方法：复制大鼠单侧腰段脊髓损伤模型；采用SDS-PAGE及双向电泳观察不同剂量BoN
中国病理生理杂志 2016年12期2017-01-03
- 人源抗EV71病毒中和表位SP70 的Fab抗体研制
因引物扩增轻链及重链Fd区基因，分步克隆至pComb3载体，构建Fab噬菌体抗体库。以SP70为抗原对Fab噬菌体抗体库进行富集筛选，将获得的重组噬菌体感染XL1-Blue菌并诱导表达，用SP70对诱导表达的菌上清进行筛选。结果 共获得3株轻、重链基因组合序列不同的克隆，且这3株Fab抗体可特异性结合SP70多肽。结论 成功构建人源抗EV71病毒Fab噬菌体抗体库，并从中筛选出3株针对EV71病毒结构蛋白VP1上中和线性表位SP70的特异性人源Fab抗体，
中国人兽共患病学报 2016年8期2016-12-01
- 心肌血管紧张素Ⅱ在运动和高血压性心肌肥大时肌球蛋白重链变化中的作用探讨
肌肥大时肌球蛋白重链变化中的作用探讨王传辉 陈金水（福建医科大学附属第一医院，福建福州350005）目的 为了解心肌局部血管紧张素对运动和高血压两种不同的心肌肥大细胞表型是否参与变化调节。方法 分析正常的自发性高血压大鼠产生运动后其心肌血管紧张素Ⅱ与肌球蛋白重链的异型变化，并通过十二周时间的游泳训练再行观察。结果 正常安静的自发性高血压大鼠心肌血管紧张素Ⅱ与α-和β-肌球蛋白重链的变化没有明显的关联性（r=0.1801；0.1822；0.1798；P＞0.
心血管病防治知识 2016年9期2016-11-21
- 动物免疫球蛋白的研究现状及发展前景
轻链和两条相同的重链所构成的多肽链结构，其中重链有五种，与之相对应的免疫球蛋白分子为5类，即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)整个免疫球蛋白分子可分为恒定区和可变区两个部分。由于免疫球蛋白重链恒定区在免疫过程中起着多种效应作用，目前已对多种动物的免疫球蛋白重链恒定区进行了研究，如哺乳动物，爬行类，鸟类等。了解免疫球蛋白的结构和功能，对于了解免疫系统有着重要意义。1 鱼类免疫
山东畜牧兽医 2016年11期2016-04-05
- 乌珠穆沁羊生长过程中骨骼肌MyHC基因变化
羊骨骼肌肌球蛋白重链（MyHC）基因相对表达量的变化规律，实验选择自然放牧条件下的1、3、6、9、12、18月龄的乌珠穆沁羊，屠宰后采取股二头肌、背最长肌，采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis，SDS-PAGE）法分离骨骼肌中肌球蛋白重链异构体，利用实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术
肉类研究 2015年7期2015-05-30
- 家蚕丝素重链C末端序列分析、克隆及表达纯化
101)家蚕丝素重链C末端序列分析、克隆及表达纯化刘青松1,2，#李 瑜1,2，#李珍珍1,3刘莉娜1王叶菁1,2何华伟1,2,3,*(1.西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室，2.生物技术学院，重庆 400716;3.中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室，北京 100101)蚕丝主要由丝素和丝胶蛋白组成，其中丝素包括丝素重链，丝素轻链和P25蛋白。丝素重链蛋白分子量大，体外表达困难，难以分离纯化，很难对其结构进行研究。本文通过对丝素重链基因
蚕学通讯 2015年2期2015-04-06
- A型肉毒素重链对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用*
01)A型肉毒素重链对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用*高美玲，李夏青△ (山西医科大学病理生理教研室，山西太原030001)目的:观察A型肉毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain，BoNT/A HC)对Neuro-2的促神经再生作用。方法: (1)在细胞培养液中加入不同浓度的BoNT/A HC，于3个时点收集细胞做免疫荧光检测轴突长度和有突起细胞的百分比。(2)在培养液中加入同一浓度的Bo
中国病理生理杂志 2015年10期2015-01-26
- Neuro-2a细胞株用于A型肉毒毒素重链体外实验的可行性研究
用于A型肉毒毒素重链体外实验的可行性研究王红，李夏青 (山西医科大学，山西太原030001)目的:探讨Neuro-2a细胞株用于A型肉毒毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain，BoNT/A HC)体外细胞模型的可行性。方法:体外培养Neuro-2a细胞检测HC相关受体，确定是否可用于HC作用的体外模型;后于Neuro-2a细胞培养液内加入一定浓度的HC，于不同时点在相差显微镜下摄取图片观察HC对细胞
中国病理生理杂志 2015年10期2015-01-26
- 大菱鲆mIgD重链基因的克隆与表达分析*
乳动物免疫球蛋白重链根据其恒定区氨基酸组成及抗原性差异，可分为γ，α，ε，μ和δ5种类型，分别相应构成IgG，IgA，IgE，IgM 和IgD［1］。相比于哺乳动物，鱼类免疫球蛋白研究起步较晚，且在很长一段时间内人们认为鱼类只存在IgM一种免疫球蛋白，随着分子生物学研究的发展，近年在鱼体上发现了IgD、IgT及IgNAR等免疫球蛋白类型［2－4］。其中，单体结构的IgD被视为最神秘的免疫球蛋白，它在机体内含量很低，抗体活性很难被检测到，其基因与蛋白结构在不
中国海洋大学学报（自然科学版） 2014年3期2014-10-16
- 拟南芥网格蛋白重链突变体的遗传分析*
蛋白复合体由3条重链(clathrin heavy chains,CHC)和3条轻链(clathrin light chains,CLC)组成，形成一个三脚架结构，一般由36个或60个三脚架复合体进一步形成一个由12个五边形和若干个六边形组成的网格状笼形结构(网格蛋白因此而得名)，其中CHC是构成三脚架结构的主要骨架，而CLC具有调控网格蛋白笼型结构组装和拆卸的功能[1-3].目前，已知网格蛋白介导的内吞(clathrin-mediated endocyt
浙江师范大学学报（自然科学版） 2014年4期2014-08-06
- 肾脏重链沉积病（IgG-γ1型重链）1例
析[1]用IgG重链抗体，分别为IgG1单抗（sigma，clone 8c/6-39）、IgG2单抗（sigma，clone HP-6014）、IgG3单抗（sigma，clone HP-6050）和IgG4单抗（sigma，clone HP-6025）冰冻切片荧光染色，显示IgG1++，弥漫分布，呈团块状沉积于肾小球系膜区，呈类线状沉积于肾小球外周血管袢（图5）。IgG1肾小球球囊壁、肾小管基膜及间质血管壁阳性（图6）。IgG2、IgG3、IgG4阴性。
中华老年多器官疾病杂志 2014年3期2014-04-27
- 大鲵铁蛋白重链FTH基因的克隆、鉴定及表达分析
00)大鲵铁蛋白重链FTH基因的克隆、鉴定及表达分析杨 辉1,2李锋刚1,2蓝青景1,2胡 伟1刘小林1王立新1,2(1. 西北农林科技大学动物科技学院, 杨凌 712100; 2. 陕西省农业分子生物学重点实验室, 杨凌 712100)从大鲵皮肤cDNA文库中, 筛选出大鲵铁蛋白重链AdFTH的cDNA序列, 其全长为864 bp, 开放阅读框为531 bp, 编码176个氨基酸, 5′和3′非翻译编码区(Untranslated region, UTR
水生生物学报 2014年1期2014-04-10
- 微小核糖核酸-34a对大鼠肥厚心肌组织肌球蛋白重链α基因表达的调控*
心肌组织肌球蛋白重链α基因表达的调控*杨蕊珂，杨丽红，王淑辉，乔鹏，徐金义，李涵，张强目的: 探讨微小核糖核酸-34（amiRNA-34a）对左心室肥厚大鼠心肌组织肌球蛋白重链α基因表达的调控及其意义。心肌肥厚; 微小核糖核酸-34a; 肌球蛋白重链α(Chinese Circulation Journal, 2014,29:138.)心肌肥厚是心肌对长期压力超负荷、内分泌激活、能量代谢障碍等刺激因素的代偿表现。肥厚心肌结构功能的改变与肌球蛋白“胚胎化”
中国循环杂志 2014年2期2014-03-02
- 甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体轻链和重链可变区基因的巢式PCR扩增及序列分析
扩增抗体的轻链和重链可变区基因并进行测序，为下一步分析抗体与抗原的结合靶位提供基础及实验依据。1 材料与方法1.1 材料大肠杆菌DH5α菌株由本实验室保存；6株甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体A1-6、A1-8、A1-12、H1-4、H1-13和H1-28由本实验室制备，抗体轻链亚型均为κ链；总RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒、质粒提取试剂盒和DNA凝胶回收试剂盒购自北京天根生物公司；ExTaq聚合酶、rTaq聚合酶、限制性内切酶、pMD19-T载体、D
生物技术通讯 2013年1期2013-10-29
- 肾脏轻-重链沉积病
光染色，符合轻-重链沉积病(IgA-λ型)。讨 论中年男性患者，病程3年，临床表现中等量蛋白尿、少量镜下血尿、高血压、肾功能不全，伴贫血(正细胞性)、白细胞减低，免疫固定电泳见λ型IgA单克隆免疫球蛋白条带，血游离轻链比例异常(κ/λ比值0.18)，骨髓细胞学检查浆细胞比例5%及增生性贫血。临床诊断符合意义未明的高丙种球蛋白血症(MGUS)伴肾脏损害。该患者接受肾活检以明确肾脏损害的类型。图1 A：肾小球体积增大，系膜区重度增宽，呈结节状(PAS，×400
肾脏病与透析肾移植杂志 2013年1期2013-08-07
- 抑制T细胞增殖的抗CD98重链单克隆抗体的建立
由一条 CD98重链(CD98 heavy chain，CD98hc，又称4F2hc)—Slc3a2的基因产物和一条轻链(CD98 light chain，CD98lc，又称 4F2lc)组成。30年前Haynes等［4］首次发现 CD98hc是 T细胞激活的一种标志。随后 Hemler等［2］证明，CD98与细胞的增殖及存活有关，且发现CD98高表达于增殖的组织表面。CD98具有两种不同的功能:介导整合素信号通路及氨基酸转运［5，6］;CD98hc的不同
中国实验动物学报 2013年2期2013-05-24
- 黄颡鱼免疫球蛋白M基因的克隆与组织表达分析
用。Ig分子包括重链和轻链两部分，根据重链恒定区化学结构的差异，可将Ig划分为多种类型。不同动物所拥有的Ig种类不同，目前已报道的硬骨鱼类Ig有IgM、IgD、IgZ/T和IgM－IgZ嵌合体等几种类型［1－5］。有报道指出，病原菌感染可明显提高鳜鱼IgM的表达水平，而IgD和IgZ无明显变化［6］，内毒素刺激则可增加鲤IgM－IgZ嵌合体基因的转录［5］，这说明不同类型的Ig有不同的免疫应答机制。在这些Ig分子中，IgM存在于所有有颌类脊椎动物中，其重链
大连海洋大学学报 2013年6期2013-02-08
- 人源化乙肝表面抗体重链克隆、表达及免疫学特性初步鉴定
，HB-sAb)重链，为人源化、个体化的乙肝治疗性抗体开发提供理论和实验依据。对象与方法1．研究对象:选取健康志愿者8名，无各种器质性和免疫性疾病史，未接种过乙肝疫苗，乙肝三系各项检测均为阴性(放射免疫法)，对志愿者注射乙肝疫苗(基础免疫3针)，完成第3针注射后的第30日清晨各志愿者均空腹抽血20ml，以枸橼酸钠(1∶9)抗凝，每份样本取2ml全血3000r/min离心取500μl血浆检测其HBsAb浓度(放射免疫法)，筛选得到HB-sAb＞1000mIU
医学研究杂志 2012年3期2012-12-07
- 获得性漏斗胸膈肌肌凝蛋白重链MyHC-Ⅰ的表达变化和意义
斗胸膈肌肌凝蛋白重链MyHC-Ⅰ的表达变化和意义王 靖1，李 俊2，吴学东2，王 宁2(1大理学院基础医学院，云南大理671000;2大理学院附属医院)目的 通过检测获得性漏斗胸大鼠膈肌肌凝蛋白重链MyHC-Ⅰ的表达变化，探讨肌凝蛋白重链在获得性漏斗胸发生发展中的作用。方法 选用4周龄SD大鼠48只，随机分为3组，每组16只。其中肋软骨组和膈肌组分别为从胸骨旁切断下位3对肋软骨并造成膈肌局部物理损伤而获得漏斗胸模型，对照组不做任何干预。于术后第2周和第4周
山东医药 2012年44期2012-09-11
- 游离轻链检测对多发性骨髓瘤诊断的临床意义
,合成速度略快于重链。在与重链结合后有部分轻链游离于血中,正常人维持在低浓度水平,而在多发性骨髓瘤时游离轻链大量增加。实验室常以本周氏蛋白阳性与否来判断是否有游离轻链。而本周氏蛋白(尿中游离轻链)检测受多种因素的影响[1](如患者的肾脏功能及尿量),而血清游离轻链在判断患者病情、监测疗效等方面优于尿轻链。该检测在国外已较广泛地应用于浆细胞增殖性的诊断和监测中,其检测的灵敏度高,特异强[2-4]。本实验室将以骨髓瘤患者为对象,评价几种常用检测方法,在诊断、疗
中国实验诊断学 2011年9期2011-09-28
- 人源Fab段噬菌体抗体库的构建及抗IL-4抗体的初步筛选*
方法1.2.1 重链Fd和轻链基因的获得 抽取来自天津市泌尿外科研究所18例健康成人外周血，分离淋巴细胞。每1×107细胞加入1 mL TRIzol充分裂解细胞，提取总RNA，琼脂糖凝胶电泳鉴定总RNA。以Oligo（dT）15为引物，用Quantscript RT试剂盒逆转录为cDNA，分别以重链和轻链5端和3端引物[3]的不同组合聚合酶链反应（PCR）扩增重链Fd段和轻链基因片段。扩增条件为：94℃预变性3 min。94℃变性1 min，退火温度因引物
天津医药 2011年6期2011-03-13
- 一种具有人VEGF结合活性的人源单一重链可变区的克隆与表达
合活性的人源单一重链可变区的克隆与表达刘珩1,2，刘思国2，武艺2，马梓力1,2，刘煜3，张爱民2，陈建泉2，成国祥21 同济大学生命科学与技术学院，上海 2000922 上海转基因研究中心，上海 2012103 中国药科大学 生化教研室，南京 210009为避免一种来自五特征转基因小鼠的全人VEGF单克隆IgM抗体分子量大的不足，本研究探讨了该抗体单一重链可变区的功能特性。首先，PCR获得该抗体的重链可变区，将该序列克隆至pET28a表达载体内，在大肠杆
生物工程学报 2010年11期2010-10-11
- 半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库
建天然噬菌体单域重链抗体文库涂 追1,2，许 杨1,2,*，何庆华1,2，陶 勇2(1.南昌大学 食品科学与技术国家重点实验室，江西 南昌 330047；2.南昌大学 中德联合研究院，江西 南昌 330047)目的：构建天然噬菌体单域重链抗体文库，淘选可应用于食品安全检测的单域重链抗体。方法：以未经免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血为起始材料，提取RNA反转录为cDNA，根据重链抗体保守序列设计引物，通过半巢式PCR法扩增获得全套重链抗体可变区编
食品科学 2010年19期2010-09-15
- 停止训练与肌球蛋白重链异形体转变及其相关性能变化研究进展
，肌球蛋白由两个重链和两个轻链构成，肌球蛋白重链（myosin heavy chain，MHC）有多种异形体表达，决定着骨骼肌机械活动的本质。研究表明[12，38]，肌球蛋白重链异形体通常可区分为3或4种，即MHC-I、MHC-IIA和MHC-IIB 或 MHC-I、MHC-IIA、MHC-IIX 和 MHC-IIB。由于其组成与骨骼肌的收缩性能和肌球蛋白ATP酶活性密切相关，故探讨肌球蛋白重链异形体的组成模式已成为反映肌纤维收缩功能的表型标志。研究表明[
中国运动医学杂志 2010年2期2010-08-15
- 天然人源IgG Fab噬菌体抗体库的构建及多样性分析①
是不同基因家族的重链V(variable)-D(Diversity)-J(joining)片段的重排与轻链V-J片段的重排及轻重链的不同组合。抗体基因重排过程中随机发生的体细胞突变又进一步增加了抗体的多样性。抗体多样性的分子发生机制为B淋巴细胞产生无限多样性的免疫球蛋白基因产物提供了理论解释。最新数据库资料显示重链可变区基因(VH)可分成7个基因家族,VH1～VH7,其中每个基因家族之间的同源性可达80%以上[1]。一般认为,在健康个体,VH基因的表达常取
中国免疫学杂志 2010年11期2010-07-30
- α-硫辛酸对肉仔鸡肉品质及肌纤维组织特性的影响
型检测 肌球蛋白重链（MYHC）基因mRNA在胸、腿肌的相对表达参照测定方法参照李玥等（2006）、Tidyman 等（1997）、Schiaffino 和Reggiani（1994）。1.7 数据统计分析 试验数据差异显著性采用GLM 进行 t检验（SAS V8）。2 结果与分析2.1 硫辛酸对AA肉仔鸡生产性能的影响 硫辛酸对肉仔鸡生产性能的影响见表2。由表2可知，日粮中添加硫辛酸对肉仔鸡各阶段料肉比无显著影响（P>0.05）。与对照组相比，600 m
中国饲料 2010年16期2010-06-29
- 铁蛋白与SPIO在磁共振细胞活体示踪中的增效作用
2 构建鼠铁蛋白重链全基因质粒应用Trizol试剂(Invitrogen，美国)从小鼠肌肉组织提取总RNA。在Oligo(dT)引物作用下，利用逆转录试剂(Promega，美国)将mRNA逆转成cDNA。根据鼠铁蛋白重链基因序列(GenBank，序列号NM-010239)设计含有NotI 和BamHI限制性内切酶位点的聚合酶链式反应(PCR)引物，PCR扩增出鼠铁蛋白重链全基因片段(Fth)。应用NotI和BamHI(大连宝生物公司)对全基因片段和pcDN
磁共振成像 2010年4期2010-06-02
- 鲢鱼骨骼肌轻酶解肌球蛋白基因的cDNA克隆
200 000的重链亚基和4个相对分子质量约20 000的轻链亚基,每个重链的氨基端形成一个球状的头部(S1)和颈状结构(S2),余下的羧基端形成具α-螺旋结构的被称之为轻酶解肌球蛋白(light meromyosin,LMM)的尾部;两对轻链分别非共价地结合在重链的颈部[1]。肌球蛋白分子的头部具有ATPase的活性;而LMM具有使肌球蛋白在生理条件下形成丝状的能力,它的结构性质在很大程度上决定了鱼肌肉蛋白质的凝胶形成特性[2]。自从1990年 Gerl
食品与生物技术学报 2010年4期2010-03-15