膜片钳
- 皮层局部环路结构与功能研究综述
跨突触标记或者膜片钳技术可以记录到介观水平的神经元形态以及连接,但介观难以发现微观水平上存在的连接细节,如无法记录到突触后连接精细的亚水平结构.并且介观水平的分辨率受到光学成像的限制,对突触连接的判断存在一定程度的干扰.所以,微观连接组学(Micro-connectomics)应运而生,分辨率在纳米级,主要利用电镜技术来获取纳米分辨率下的神经元,在局部环路研究上具有非常大的优势.大脑的连接不仅是脑区之间的信号传递,在脑认知研究中最关键的是皮层密集连接,以及
昆明理工大学学报(自然科学版) 2023年2期2023-05-08
- 膜片钳技术在医学本科生实验课程中的教学实践探索
400038膜片钳技术采用尖端开口在1～5 μm 的硅酸盐玻璃电极与细胞膜紧密接触，形成G 欧姆级别（10～100 GΩ）的紧密封接，从而实现高信噪比的记录[1]。该技术于1976 年由德国两位科学家Neher 和Sakmann 发明，其出现革命性地推动了在单细胞水平对可兴奋细胞（神经元和心肌细胞等）放电活动及其离子通道基础的研究，为理解神经系统电活动打开了微观世界的入口[2]。自发明以来，该技术一直是生理学、神经生物学等基础学科在细胞、离子通道功能研究
中国医药导报 2022年28期2022-11-25
- hERG1a突变H70R对hERG1a单源四聚体和hERG1a/hERG1b二源四聚体通道功能的影响
ch 700B膜片钳放大器(Axon公司,美国)，Digidata 1322数模转换器(Axon公司,美国)。Sutter p-97微电极拉制仪(Sutter公司,美国)，MF-830微电极抛光仪(Narishige公司,日本)。1.2 突变诱导，载体表达应用定点突变诱导试剂盒，对携带有野生型KCNH2 cDNA的pcDNA3.1进行c. 209 A>G突变诱导。突变诱导后进行DNA测序证实c. 209 A>G突变存在。采用脂质体转染技术，应用人胚肾(hu
首都医科大学学报 2022年5期2022-10-25
- 全细胞膜片钳技术在遗传性长QT 综合征和不明原因猝死中的研究进展
为重要。全细胞膜片钳技术（Patch clamp techniques）作为先进的细胞电生理技术，在研究离子通道疾病中的应用日益广泛，尤其是对于LQTS 相关基因突变致病性的评估、SUD 的预防和死亡原因鉴定等方面具有重要意义。本文对全细胞膜片钳技术在LQTS 和SUD 中的应用进行综述。1 长QT 综合征的研究现状长QT 综合征是一组以体表心电图QT 间期延长为主要特征、易引发尖端扭转型室性心动过速等心律失常、严重者可导致猝死的心脏离子通道疾病。研究表明
昆明医科大学学报 2022年6期2022-07-04
- ANO1稳定转染细胞模型的构建及生理特性
德国BMG)，膜片钳(德国HEKA)，倒置荧光显微镜(日本Nikon)，流式细胞仪(美国BD)。1.3 方法1.3.1 细胞模型的构建1.3.1.1 最适抗生素浓度的选择 将状态较好FRT铺到96孔板中，16 h后细胞密度达到70%～90%，分别加入浓度为1 000、800、600、400、200 μg/L和100 μg/L的Zeocin，2周后细胞全部死亡的浓度即为Zeocin抗生素筛选的最适浓度。G418应用相同的方法选择最适浓度。1.3.1.2 构建
中国兽医杂志 2021年9期2022-01-17
- 为什么我们能感受温度和触觉
则进入黄瓜内。膜片钳我们的细胞为什么能把钠离子挡在外面呢？无数科学家为此挠破头皮，一直到20世纪70年代，德国科学家伯特·萨克曼发明了一种新的装置：膜片钳。膜片钳的使用方式与显微镜有点像。使用显微镜时，我们首先要从研究目标上切下一小块，制成标本，然后将标本放到显微镜下，依靠显微镜的放大能力进行观察。膜片钳可以看作一把很小的钳子，科学家用它揪住细胞的一角，而后放大这一角的电流，观察其中的规律。结果呢？科学家发现，细胞膜上有许多“小门”，它们十分挑剔，有的只对
科学大众 2021年23期2021-12-28
- 利用全细胞膜片钳技术记录大鼠脑片NMDA电流的研究*
030001)膜片钳技术在1976年由德国科学家Nether和Sakmann 发明，他们首次在青蛙肌细胞上用双电极钳制膜电位的同时记录到乙酰胆碱激活的单通道离子电流[1]。这种技术通过记录细胞膜上单个或几个离子通道开放或关闭引起的电流变化来研究细胞生理功能，已被广泛应用于生命科学领域，尤其是神经科学的许多方面。如记录在脑内功能活动时神经元兴奋性的变化，神经信号的产生和传导，神经环路中突触的传递过程等研究中[2-6]。全细胞记录模式下可以获得细胞膜上所有离子
中国应用生理学杂志 2021年5期2021-12-10
- 家福捕鸟蛛毒素-22钠通道活性与基本性质分析
P-HPLC和膜片钳活性测定，从其粗毒中分离鉴定到1个对TTX-R钠电流具有明显抑制作的毒素分子（JFTX-22），并进行了JFTX-22的基本理化性质分析、空间结构预测和同源序列比对.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物：家福捕鸟蛛采自广西宁明县桐棉镇和爱店镇的山区，SD大鼠购自湘雅医学院动物养殖中心.1.1.2 试剂：Sigma公司的葡萄糖、D-glucose、NaOH、KCl、冰乙酸、氯化铯、MgCl2、EGTA、三氟乙酸、胰蛋白酶抑制剂、
怀化学院学报 2021年5期2021-12-01
- 电生理膜片钳相关设备使用规范
小敏【关键词】膜片钳系统;微电极拉制仪;仪器设备;使用规范一、膜片钳技术的工作原理膜片钳技术是用于了解离子通道行为的通用型电生理工具，首先用微玻管电极（膜片电极或膜片吸管）接触细胞膜，然后以千兆欧姆以上的阻抗使电极尖端与细胞膜封接，通过吸破或者电破的方式使与电极尖开口处相接的细胞膜的小区域与其周围区域在电学上分隔，然后细胞膜破裂，进而对此区域上的离子通道的离子电流进行监测记录的方法。该方法广泛应用于神经细胞，肌纤维细胞，心肌细胞及高表达单一通道的卵母细胞。
消费电子 2021年9期2021-11-05
- 利用膜片钳技术标记脑片神经元的方法*
1)在进行脑片膜片钳实验时，经常需要甄别实验中选取的是哪一类细胞。通常是根据目标区域中细胞的镜下形态、细胞的静息电位及一些电生理学特性来进行初步的鉴别和区分。本实验室采用了一种通过全细胞膜片钳技术对脑片上目标神经元实施荧光标记的方法。该方法在记录离子通道电流后经过处理就可以更直观呈现观察神经元胞体和部分突起的形态，为实验提供形态学的证据。实验中用到的两种染色生物制剂分别为NeurobiotinTMTracer和Streptavidin-Texas Red。
中国应用生理学杂志 2021年4期2021-10-22
- TRPA1 抑制剂的高通量筛选及新型骨架的发现
筛选系统和手动膜片钳检测技术，靶向TRPA1 通道，对自建的已上市药物样品库进行抑制活性筛选，发现多种不同特性的三环类分子具有明显的TRPA1 抑制活性，且结构呈现一定的规律性。在已报道的TRPA1 抑制剂中，还没有三环类骨架，本研究将为TRPA1 抑制剂的药物研发提供新的骨架结构。1 材料与方法1.1 试剂AITC 购自Sigma；HC030031 由Biobond 制药公司合成；酮替芬和苯噻啶苹果酸酯购自九鼎化学；米安色林和米氮平购自毕得医药；奥氮平购
科学技术创新 2021年19期2021-07-16
- 不同中药对NaV1.7离子通道的抑制率比较
膜，使用全细胞膜片钳技术，研究这些药物分别对NaV1.7离子通道抑制作用。结果 抑制率的比较的结果：三七的抑制率最高，临床有统计学意义。结论 对于临床骨科常用药物止痛效果有一定的指导意义。关键词：疼痛 膜片钳 离子通道 中药镇痛中图分类号：R73 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2021）01（a）-0250-03Comparison of Inhibition Rates of Di
科技资讯 2021年1期2021-03-24
- 走自制实验设备之路 凸显学科专业特色
等［2］创建的膜片钳技术就是以细胞膜电流为研究对象的电生理学技术，该技术于1991 年获得诺贝尔医学和生理学奖，凸显该技术在生命科学研究中的重要性，广泛应用于神经科学、心血管科学、药理学、细胞生物学、病理生理学等领域研究。我院较早将生物物理学作为重点发展的学科方向，2007 年获批国家重点学科，2008 年建成“国家理科基础科学研究和教学人才培养基地”，具有较完善的生物物理学科研平台和较强的学科团队。为推动这方面人才的培养，在第6 学期为生物科学专业学生开
实验室研究与探索 2021年2期2021-01-26
- 左归降糖解郁方对DD大鼠海马NVU神经元mEPSC的影响
型;采用全细胞膜片钳记录NVU体外共培养体系神经元mEPSC，比较各组NVU培养体系神经元mEPSC频率和电流幅度。结果 经免疫细胞化学鉴定，NVU培养体系中细胞结构完整。与正常组和空白血清组相比，模型组大鼠海马NVU培养体系神经元mEPSC的频率和幅度均显著上升（P0.05）。结论 左归降糖解郁方可降低DD大鼠海马NVU体外培养体系神经元mEPSC的频率和幅度，对海马NVU培养体系的具有调控作用。〔关键词〕 糖尿病;抑郁症;左归降糖解郁方;微小興奋性突出
湖南中医药大学学报 2020年7期2020-08-12
- 氢气影响大鼠神经兴奋传导的研究
没有相关研究。膜片钳技术利用玻璃微电极与细胞膜进行封接，对细胞膜表面的离子通道的离子电流和电导等参数进行记录和分析，在神经系统功能研究和药物研究等生理功能研究中已经有了广泛的应用[13]。动作电位是神经或者心肌细胞等可兴奋细胞受到刺激信号时在静息条件下的基础上产生的可扩布的电位变化过程，动作电位过程中包含着钠、钾、钙和氯离子等的转运和相应的离子通道的开闭，并且在不同的可兴奋细胞具有特征性的动作电位[14-16]。因此，研究神经细胞动作电位的变化是研究神经功
生物技术进展 2020年4期2020-07-30
- 神经科学的突破性方法:膜片钳技术
编译 李升伟膜片钳技术最初是为了记录离子通过细胞膜通道蛋白的电流而发展起来的，现在它已经成为神经科学工具箱中真正的中坚力量。大脑中的信息被认为是由数千个神经元细胞产生的复杂电脉冲模式编码而成的。每个脉冲，即动作电位，是由流经神经元膜的带电离子电流调节的。但是，这些离子是如何穿过神经元的绝缘膜的，多年来一直是个谜。1976年，埃尔温·内尔（Erwin Neher）和伯特·沙克曼（Bert Sakmann）开发了膜片钳技术，该技术明确表明电流是由膜中许多通道蛋
世界科学 2020年2期2020-02-27
- 犬左室三层细胞的分离和电生理记录*
芳 宋卫峰随着膜片钳技术的逐渐推广和心肌细胞电异质性等研究领域的发展，心肌细胞已成为各类心血管疾病结构重构和电重构机制研究的重要部分。尤其是对犬等大型动物的心肌细胞的电生理特性的研究越来越多，也越来越精细。目前分离的犬心房肌细胞即刻存活率为80%～90%，复钙至1.0 mmol/L KB液中静置72 h存活约70%左右[1-2]；分离犬心室肌细胞即刻存活率为60%～80%[3-4]，复钙后存活40%～60%。成功分离出高活性和高产量的犬心室肌三层心肌细胞并
中国心脏起搏与心电生理杂志 2019年4期2019-08-31
- 碘普罗胺对心室肌细胞离子通道的影响
：EPC-10膜片钳放大器(HEKA，Germany)；微电极玻璃毛细管(微探极，武汉，中国)；水平拉制仪(Sutter P-97，USA)；抛光仪(Narishige Scientific Instrument Lab.，Japan)。1.2 大鼠心室肌细胞的分离 Wistar大鼠腹腔注射普通肝素（5000U/kg），20min后腹腔注射1%戊巴比妥（1ml/kg），待麻醉完成后迅速开胸切取心脏，并置于4℃无钙台式液中，冲洗后转入4℃无钙台式液培养皿中，
承德医学院学报 2019年4期2019-07-09
- 黄芪汤对肾脏集合管细胞ENaC活性的影响作用研究
溶酶刺激后，以膜片钳测定其膜电流变化。结果：纤溶酶刺激后，空白对照组的膜电流显著增强（P0.05）。该两组的膜电流增幅间无显著差异（P>0.05），但均显著低于空白对照组（P关键词 黄芪汤 上皮钠离子通道 膜片钳中图分类号：R289.5； R256.51 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2019）03-0034-04Study on the effect of Huangqi decoction on ENaC activity in ren
上海医药 2019年3期2019-03-10
- 离子通道电流虚拟仿真实验在生理教学中的应用
通常依靠昂贵的膜片钳-离子通道测量平台才能实现,而我校教学实验室不具备进行该实验的设备条件。为此,采用计算机仿真技术模拟实验操作环境,研制了离子通道电流虚拟仿真实验教学设备,在无膜片钳-离子通道测量平台设备的情况下开设了生理学测量离子单通道电流的教学实验,建立新型实验教学模式[2]。1 离子通道电流虚拟仿真仪器特点离子通道电流虚拟仿真实验仪器主要应用于生物电生理实验教学,可用于心脏、肝脏、神经、肌肉等多脏器的实验项目[3-9],对学生掌握抽象的离子通道蛋白
实验技术与管理 2018年3期2018-03-30
- 探讨多离子通道阻断的抗心律失常中药研究
最近几年研究的膜片钳技术给心律失常患者带来福音，同时这也是细胞生物学的一场革命。将膜片钳技术与中药的研究结合在一起，可以有效的帮助研究出抗心律失常的中药，且将其研究成果已经成功通过临床实验。1 利用膜片钳技术来深入研究中药多离子通道作用膜片钳技术的问世，就有无数的专家学者都投身其中进行研究，对多离通道阻断的中药主要包括单体、单味以及一些复方的中药等。接下来对一些学者的深入研究膜片钳现状进行介绍。作者张婉在2008年研究了苦参碱来阻断心肌细胞通道[1]，并将
中西医结合心血管病杂志(电子版) 2018年24期2018-01-16
- 急性分离的脊髓腹角神经元膜片钳记录技术
脊髓腹角神经元膜片钳记录技术高凌云， 张环环， 查盈盈， 郑 超， 汪萌芽(皖南医学院 细胞电生理研究室，安徽 芜湖 241002)目的：建立急性分离的脊髓腹角神经元膜片钳记录技术以深入研究脊髓腹角神经元上受体的作用。方法选用6～11 d的新生SD大鼠，麻醉后分离出含腰骶膨大的脊髓，制备切片，给予酶消化，切除背角，将腹角吹打分离出单细胞，进行膜片钳记录。结果①分离的腹角神经元形态良好，胞体呈纺锤形、三角形和多边形伴多条细长突起；②7个神经元记录到自发动作电
皖南医学院学报 2017年6期2017-12-27
- 膜片钳技术在慢性痛大鼠背根神经节神经元电生理学特性改变中的应用*
4）·论 著·膜片钳技术在慢性痛大鼠背根神经节神经元电生理学特性改变中的应用*蔡 捷1方 东2李 松1邢国刚1△（1北京大学神经科学研究所/基础医学院神经生物学系，北京100191；2河南大学药学院，开封 475004）目的：以骨癌痛大鼠为例，探讨全细胞膜片钳技术在慢性痛研究中的应用。方法：急性分离背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）神经元，利用全细胞膜片钳技术分别记录对照组和骨癌痛组大鼠小直径DRG神经元的动作电位及TRPV1
中国疼痛医学杂志 2017年1期2017-11-20
- 奎尼丁对HEK293细胞hERG电流和hERG蛋白的影响
3细胞,全细胞膜片钳技术记录电流和Western blot技术观察hERG通道蛋白表达的影响。实验分组:①HEK293细胞转染进质粒48 h时加入不同浓度(0，1，3，10 μmol/L)的奎尼丁,并进行膜片钳实验观察奎尼丁的瞬时作用。②HEK293细胞转染进质粒24 h时往培养基加入不同浓度(1，3，10 μmol/L)的奎尼丁,继续培养24 h洗脱奎尼丁后立即进行膜片钳及Western blot实验观察奎尼丁的慢性作用。 结果 ①1 μmol/L、3
山西医科大学学报 2017年4期2017-08-07
- GABAA受体激动剂对AD模型配体门控氯通道的作用
细胞模型；通过膜片钳(Patch clamp)技术在大鼠海马神经元上记录配体门控氯通道瞬时外向电流，采用非特异性氯通道阻断剂(NFA)和无GABA的细胞外液确定该电流成份为瞬时外向氯电流；通过膜片钳技术观察GABAA受体激动剂蝇蕈醇对于在大鼠海马神经元上记录瞬时外向电流的作用；向AD细胞模型中加入GABAA受体激动剂，采用MTT观察各组细胞活力。结果 加入GABAA受体激动剂蝇蕈醇后GABA激活氯电流强度增加；加入浓度为1 mmol/L蝇蕈醇的AD模型细胞
中风与神经疾病杂志 2017年4期2017-05-10
- 全细胞膜片钳技术检测化学损伤致痫大鼠海马脑片电生理特性
础研究·全细胞膜片钳技术检测化学损伤致痫大鼠海马脑片电生理特性徐祖才 张 骏 黄 浩 王 静1徐忠祥 彭 燕 陈 娅 徐 平(遵义医学院附属医院神经内科，贵州 遵义 563003)目的 应用全细胞膜片钳技术检测化学损伤致痫大鼠海马脑片神经元基本电生理特性。方法 将成年SD大鼠建立氯化锂-匹罗卡品模型后，急性分离获得海马脑片，应用全细胞膜片钳电流钳技术实时观察化学损伤致痫大鼠海马脑片CA1区锥体神经元膜电位及其单位时间内动作电位频率的变化情况；通过全细胞膜片
中国老年学杂志 2016年21期2016-12-06
- 大蒜素对H9c2细胞钠电流的作用
， 采用全细胞膜片钳记录钠电流。观察Gar对钠电流和门控机制的影响。结果 Gar对INa的抑制效应呈电压依赖性。-30 mV时， 200 μmol/L Gar可使INa由（-98.4±5.6）pA/pF降低为（-66.5±5.3）pA/pF （P0.05）。结论 大蒜素可能通过减少钠通道激活， 降低钠电流。【关键词】 大蒜素；H9c2细胞；钠电流；膜片钳DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.27.192【Abstract】
中国实用医药 2016年27期2016-11-30
- 绿色荧光蛋白基因与hERG基因G604S突变共表达功能研究
内的表达定位；膜片钳实验记录hERG电流。 结果 在转染pcDNA3-WT-hERG或pEGFP-WT-hERG的细胞中，hERG蛋白表达于胞质与胞膜；在转染pcDNA3-G604S-hERG或pEGFP-G604S-hERG的细胞中，hERG蛋白仅在胞质表达。HEK293细胞转染pcDNA3-WT-hERG后，hERG电流的最大尾电流密度为(75.4±2.2)pA/pF，明显高于转染pEGFP-WT-hERG的最大尾电流密度[(15.1±0.7)pA/p
山西医科大学学报 2016年9期2016-10-29
- 钙激活氯通道密度调节Anoctam in 1电流作用的研究
6 h获得。膜片钳方法检测钙离子激活的Ano1的全细胞电流。激活电流曲线以指数曲线拟合。结果Ano1质粒表达6 h的电流密度显著低于表达24 h的电流密度（P＜0.05）。在低CaCCs密度时，Ano1的激活电流曲线最适于用单指数拟合，τslow为（292.71±38.11）ms。在高CaCCs密度时，Ano1的激活电流曲线最适于用两指数拟合，τfast为（47.78±4.58）ms；τslow为（385.74± 71.44）ms。高CaCCs密度下的A
中国医科大学学报 2016年4期2016-10-11
- M3受体激动剂对急性缺血性心肌的保护作用*
血环境，全细胞膜片钳技术记录L-型钙电流(ICa-L)变化；激光扫描共聚焦技术观测细胞内钙变化，探讨胆碱对细胞内钙及钙库的影响。结果在膜片钳实验结果显示，与正常组比较， 缺血组ICa-L电流密度明显增高，应用胆碱后ICa-L下降，差异有统计学意义(P[关键词]心肌缺血；胆碱；L-型钙电流；膜片钳；激光扫描共聚焦心脏是人体的重要器官，维持全身血液的供应，心肌缺血及梗死都存在局部供血和代谢障碍，缺血时的细胞外体内微环境改变主要是酸性代谢产物排出困难，从而造成堆
重庆医学 2016年17期2016-07-15
- 蛇床子素对大鼠心室肌细胞钠通道的影响
离和处理。应用膜片钳技术，观察给予不同浓度蛇床子素(Ost)后钠离子通道电流特征的变化。结果Ost(>100 μmol/L)能明显抑制钠电流，其作用呈浓度依赖性(500 μmol/L几乎完全阻断)和时间依赖性(10 min左右抑制力达到最强)。100 μmol/L和300 μmol/L Ost使钠电流I-V曲线明显上移，峰值钠电流(-29.8±4.21) pA/pF分别降为(-20.1±3.7) pA/pF和 (-17.7±5.7 ) pA/pF (P关键
实用临床医药杂志 2016年7期2016-05-13
- 膜片钳技术简述
610041)膜片钳技术简述管一世(成都体育学院 四川 成都 610041)80年代初发展起来的膜片钳技术(patchclamptechnique)为了解生物膜离子单通道的门控动力学特征及通透性、选择性膜信息提供了最直接的手段。该技术的兴起与应用，使人们不仅对生物体的电现象和其他生命现象更进一步的了解，而且对于疾病和药物作用的认识也不断的更新，同时还形成了许多病因学与药理学方面的新观点。膜片钳;细胞;膜电位;膜片构型;通道一、 膜片钳技术的基本原理用一个尖
福建质量管理 2016年13期2016-04-17
- 全细胞膜片钳技术在神经元钙通道药理研究中的应用
01)全细胞膜片钳技术在神经元钙通道药理研究中的应用林智颖,张静,黄天文,陈晓春(福建医科大学附属协和医院，福建省老年医学研究所，福建省神经生物学研究中心，福建 福州350001)全细胞膜片钳技术是研究离子通道和药物对离子通道影响的最重要的技术之一，但是由于其对实验技术要求高，对实验标本制备和实验环境、实验用溶液等条件均有严格要求等原因致使其在实际运用中较为困难。本文报告了运用全细胞膜片钳技术进行神经元钙通道药理研究的一些经验。1 材料与方法1.1材料1
中国药理学通报 2016年9期2016-01-31
- 丙泊酚对大鼠S1区锥体神经元电压门控钠离子通道及动作电位的影响
片，采用全细胞膜片钳技术测定电流及电压。加入不同浓度（10、30、100、300 μmol/L）丙泊酚，记录各组神经元钠电流（INa），绘制电流电压（IV）曲线、稳态激活曲线、稳态失活曲线及去失活曲线并计算相关参数。向神经元施加幅度50 pA、刺激时程30 ms的去极化刺激电流，记录各组神经元动作电位。结果：丙泊酚呈浓度依赖性抑制大鼠S1区神经元电压门控性INa，加快钠通道的失活过程，使稳态失活曲线向超极化方向移动，延缓钠通道失活后的恢复，但并不影响钠通道
温州医科大学学报 2015年12期2015-10-13
- 大鼠心室肌细胞膜片钳技术研究生实验设计
大鼠心室肌细胞膜片钳技术研究生实验设计范 茁, 吴振强 (华南理工大学 生物科学与工程学院,广东 广州 510006)面向生物学科硕士研究生开设细胞电生理实验可弥补高校细胞电生理实验教学领域的空缺，使学生更好掌握细胞电生理理论知识。论文详细阐述了依托于膜片钳实验技术、以大鼠心室肌细胞动作电位为主要研究对象的细胞电生理实验课程的具体实验内容，相关的实验方法和实验结果。记录大鼠心室肌细胞的动作电位、三种主要成分(Na+、K+和Ca2+)离子电流的分离可以使学生
实验室研究与探索 2015年2期2015-02-27
- 激活视网膜水平细胞NMDA受体抑制内向整流钾通道活动
膜水平细胞进行膜片钳全细胞记录，在给药激活NMDA受体前后，分别记录内向整流钾通道的电流大小；另外在无钙及螯合胞内钙条件下，观察NMDA受体对内向整流钾通道的作用。结果 激活NMDA受体后，内向整流钾通道电流减小，灌流洗脱后电流恢复；在无钙和螯合胞内钙的条件下，激活NMDA受体不能改变内向整流钾通道活动。结论 激活视网膜水平细胞NMDA受体可以通过胞内钙信号抑制内向整流钾通道电流。关键词：视网膜；内向整流钾通道；钙，胞内钙库；NMDA受体；膜片钳网络出版时
中国药理学通报 2015年10期2015-02-26
- 杨梅黄酮对炎性痛大鼠的外周镇痛作用
；背根神经节；膜片钳网络出版时间：2015－7－22 10：42 网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20150727．0901．019．html疼痛是身体和内脏受到损害的警报信号，是许多疾病的共同症状，不仅给病人带来痛苦，而且严重的疼痛可以产生疼痛性休克，威胁病人生命。因此，开发高效、低毒的镇痛药一直受到国内外医学界的关注。杨梅黄酮（myricetin）是从常绿灌木杨梅的叶子中提取的黄酮类化合
中国药理学通报 2015年8期2015-02-26
- 血管内皮TRPP2/TRPV4通道复合体参与调节盐敏感性高血压大鼠血管内皮功能*
利用血管开放式膜片钳，观察高盐饮食是否影响MAECs上TRPP2/TRPV4活性;利用分子生物学和膜片钳体外观察高盐和醛固酮对该复合体的影响。结果: TRPP2/TRPV4在MAECs上天然定位，并介导内皮细胞NO产生;在SS鼠中，高盐导致该通道活性和表达降低;体外实验证明高盐和醛固酮均抑制TRPP2/TRPV4活性。结论:在盐敏感高血压发展过程中，MAECs上TRPP2/TRPV4通道活性和表达下降，其机制可能是由高盐和醛固酮协同介导。国家自然科学基金资
中国病理生理杂志 2015年10期2015-01-26
- 穿孔膜片钳记录肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道方法初探
们用常规全细胞膜片钳记录BKCa和由其开放所介导产生的自发性瞬时外向电流（spontaneous transient outward currents，STOCs）时，发现随着时间的推移，BKCa宏观电流的幅度越来越小且STOCs 很难记录到，或在很短时间内STOCs就完全自行消失，这可能是电极液和细胞内液相互渗透，造成胞质内容物被稀释，特别是维持离子通道功能和信号转导的物质被吸到电极内，改变了细胞内钙缓冲能力［1-2］。这极大地局限了我们对细胞内局部自发
西南军医 2014年3期2014-11-26
- 研究生细胞电生理实验课设计与实践
由于其所依托的膜片钳实验系统价格相对昂贵，操作精细、复杂，主要服务于科研领域，一直是高校生物学科实验教学领域的空缺。本文将根据华南理工大学生物科学与工程学院现有的教学和科研条件，阐述利用膜片钳技术为生物学科研究生开设细胞电生理学实验课程的必要性和可行性，并对课程的内容、设置及考核方式进行详细的探讨。1 为生物学科研究生开设细胞电生理学实验课程的必要性细胞电生理是组织及机体电生理现象的基础，因为难以检测使之变得更抽象、更难理解。任何一个学科，尤其是生物学科，
实验技术与管理 2014年12期2014-04-10
- 小鼠胰腺腺泡细胞钙振荡的激光共聚焦成像研究方法*
要是利用全细胞膜片钳技术，记录在细胞外液中加入兴奋剂（如ACh）后胞浆Ca2＋浓度变化所激活的Cl-通道电流，通过Cl-通道电流间接反映 PACCOs的情况［4］。直接法：利用钙荧光指示剂与胞内Ca2＋结合后在相应波长的激发光作用下可发出特定波长的荧光的特点，通过荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜（laser scanning confocalmicroscope，LSCM）或双光子显微镜等仪器检测兴奋剂作用后引起的钙荧光变化，直接研究 PACCOs［1，3
中国应用生理学杂志 2014年4期2014-01-23
- Amphotericin B在全细胞穿孔膜片钳技术中的应用研究*
，付崇罗常规的膜片钳技术采用负压抽吸或电击破膜形成全细胞模式。在此过程中，电极内液和细胞内液之间的扩散交换常使一些受胞内物质调控的通道电流出现时间依赖性的衰减。1988年Horn等［1］对传统全细胞记录进行了改进，建立了穿孔膜片钳技术（perforated-patch clamp）：即利用某些抗生素具有在生物膜上形成通透性孔道的性质，将这类抗生素充灌在电极液中，在高阻封接形成之后自发性形成的全细胞模式。海德氏突触（calyx）位于哺乳动物听觉脑干斜方体中核
中国应用生理学杂志 2014年1期2014-01-22
- 大鼠海马神经元癫痫样放电模型的构建
h，应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元的放电情况。结果在培养第12天时，神经元突起间彼此接触形成神经网络。在“无镁细胞外液”处理3 h后神经元产生稳定的放电，恢复正常细胞培养液培养24 h，神经元仍可检测到自发的“癫痫样放电”。结论体外培养第12天海马神经元，在“无镁细胞外液”处理后可形成稳定的自发性癫痫样放电，为今后在细胞分子水平研究癫痫发病机制提供了一种理想模型。海马;神经元;膜片钳;癫痫样放电;动作电位;原代培养药物难治性癫痫是神经科常见病之一，其发
河北医药 2014年14期2014-01-19
- 探索应用于膜片钳研究的脑片制备方法
13)有关脑片膜片钳技术最早可追溯至1985年，美国的Gray和Johnston采用酶解撕裂法对豚鼠海马脑片GABA受体通道进行了研究。而将膜片钳技术成熟地应用于离体脑片神经元则是1989年，德国马普研究所Edwards、Sakmann和日本京都大学Takahashi首次将微分干涉相差技术应用到膜片钳技术领域，并对大鼠(海马，视皮层，嗅球，小脑，额叶皮层和脊髓等)、小鼠(海马)、猫(视皮层)神经元离子通道特点进行了广泛研究。近年来随着膜片钳技术的日益成熟，
吉林医药学院学报 2013年5期2013-10-10
- 大鼠心室肌细胞单通道钙电流的记录及其电生理学特性分析
域的研究热点。膜片钳技术是研究离子通道的主要技术，共有4种基本记录模式。由于L-型钙通道电导小，大多实验室都采用全细胞记录模式研究整个细胞中L-型钙通道的作用，但是单通道记录模式可以使我们了解到L-型钙通道的门控机制、通道性质与结构关系、细胞内通道信号的转导过程等，其中细胞贴附式记录模式可用于检测离子通道的特性，内膜外记录模式可以便于更换细胞内液，适于研究离子通道的细胞内成分的效应［6］。所以确立稳定的心室肌细胞的膜片钳单通道的记录模式尤为重要。本研究在以
中国医科大学学报 2013年3期2013-09-07
- 大鼠心室肌细胞的分离及其单通道钙电流的记录
室肌细胞，应用膜片钳制技术单通道模式记录大鼠心室肌细胞的钙电流，并进行膜片钳电生理学研究.心室肌细胞；膜片钳；单通道；钙电流记录细胞的电活动是生命活动的基础，而这些电活动则是通过细胞膜离子通道而实现的[1]，离子通道的基本功能是通过维持离子的跨膜运动，产生生物电现象而完成的.因此研究膜离子通道的通透机制及各种离子通透性的变化对阐明细胞生物电现象和其他生命现象的机制具有重要的理论意义和应用价值[2].德国生理学家Neher和Sakmann（1976）[3]首
赤峰学院学报·自然科学版 2013年12期2013-07-13
- 肺癌干细胞中存在容积激活氯通道*
上机检测。2 膜片钳记录电流采用全细胞膜片钳记录方法，应用膜片钳放大器(HEKA，EPC－9，German)和 PULSE软件(HEKA，Lambrecht，German)在电压钳制状态下记录CSCs上的容积激活氯电流。吸取细胞液少许，加入1 mL细胞池内，该细胞不易贴壁，故待细胞沉底行封接后，再以细胞外液灌流。玻璃电极(外径1．2 mm)经微电极拉制仪分二步拉制而成，充灌电极内液进入细胞外液后阻抗为2．0～3．0 MΩ。电极接触细胞前补偿液接电位，轻施负
中国病理生理杂志 2012年5期2012-11-13
- 膜片钳技术在高血压研究中的应用1）
杨 沙，王 舒膜片钳技术（patch－clamp technique）是1976年由Nehetr和Sakroann在电压钳的基础上发展而来的一种记录细胞膜离子通道电生理活动的技术。通过微电机与细胞膜之间形成紧密接触，采用电压钳或电流钳技术对生物膜上离子通道的电活动进行记录。膜片钳技术的应用将细胞水平和分子水平的生理学研究联系在一起，已成为现代细胞电生理研究的常规方法，使人们对于疾病和药物作用的认识不断更新。膜片钳技术用于心血管领域的研究也越来越多。本文拟对
中西医结合心脑血管病杂志 2012年1期2012-08-15
- 慢性缺氧时足细胞上调β4-亚基而抑制BKCa通道的活性
清楚。本文通过膜片钳技术检测到足细胞暴露于2%的O224 h后，可以引起明显的BKCa通道电流的降低。分子生物学实验表明，慢性缺氧提高了BKCa通道β4-亚基mRNA和蛋白的表达，但是未提高与孔道形成有关的α-亚基或β3-亚基mRNA和蛋白的表达。同时，慢性缺氧使通道激活移向去极化方向，并降低其激活动力学，产生类似于β4-亚基的特性。本文结果表明BKCa通道通过上调β4-亚基的表达量，参与足细胞对慢性缺氧的应答反应。这些发现为研究足细胞对缺氧的细胞学反应机
天津医药 2012年8期2012-08-15
- 新生大鼠海马神经元原代培养及膜片钳全细胞记录＊
速发展，特别是膜片钳技术在神经学科的应用以来，对原代培养的神经元状态要求越来越高，本实验在参照文献［1－4］的培养方法基础上稍作改进，培养出细胞膜上各离子通道功能良好的且适应于膜片钳全细胞记录的海马神经元，现报道如下。1 材料与方法1.1材料1.1.1动物与主要实验仪器 1d内新生Wistar大鼠购自重庆医科大学实验动物中心；SW－CJ－2FD型超净工作台购自苏净集团安泰公司，细胞培养箱购自美国Thenno Fonna，细胞培养板购自美国Costar，TE
重庆医学 2012年31期2012-06-29
- 豚鼠心肌细胞中Kir2.1对内向整流钾电流组成的贡献
1.3 仪器 膜片钳放大器Axon 200B为美国Axon公司产品;电极拉制器和三位操纵器均为Sutter公司产品;倒置显微镜TE2000-S为Nikon公司产品。1.4 方法 豚鼠心肌细胞的急性分离:将豚鼠麻醉后快速开胸取出心脏，至于冰无钙台式液中进行主动脉插管，连于Langendorff灌流装置上，进行恒压恒温逆行灌流。灌流液温度37℃，流速7 ml/min，用前用100%O2饱和。先用无钙台氏液灌流5 min，冲洗心脏中残留的血液，然后灌以含12 m
河北医药 2011年13期2011-07-16
- 穿孔膜片钳方法记录L型钙通道及脱氢紫堇碱对其影响的研究
)在采用全细胞膜片钳技术对L型钙通道电流记录时，L型钙通道电流会发生随时间的经过而逐渐减小的“rundown”现象，对观察药物对L型钙通道效应造成很大影响。而穿孔的膜片钳方法的使用减少了“rundown”现象的发生。此文比较了全细胞膜片钳和穿孔膜片钳方法记录L型钙通道电流随时间经过的变化差异，并观察了脱氢紫堇碱(dehydrocorydaline，DHC)对L型钙通道的影响。1 材料与方法1.1心室肌细胞的分离采用急性酶分法获得单个心室肌细胞［1］。1.2
中国药理学通报 2011年8期2011-05-31
- Ouabain对髓袢升支粗段管周膜50pS钾通道活性的影响
实验利用单通道膜片钳技术，观察钠－钾泵抑制剂ouabain对髓袢升支粗段管周膜50pS钾通道活动的影响，探讨50pS钾通道是否在功能上与钠－钾泵偶联。1 材料与方法1.1 肾小管的分离 SD大鼠，体质量70～120 g，♀♂不拘。由徐州医学院实验动物中心提供。大鼠经10%的水合氯醛(400 mg·kg－1)腹腔麻醉后，立即打开腹腔取出肾脏，去除包膜，从肾脏的中间部分用刀片切出厚约0.5～1 mm的冠状切片，浸入浓度为1 g·L－1胶原酶溶液，放进37℃恒温
中国药理学通报 2011年1期2011-02-10
- 急性分离大鼠皮层神经元的方法与体会
动的主要方法是膜片钳技术，而获得活力好的神经元便成为应用膜片钳技术的重要先决条件。许多离子通道研究是需要单个分散的神经元，人工培养的神经细胞易受培养环境的影响，自身特性改变较大，而急性分离的细胞却能相对保持完好的生理特性[1-3]。笔者结合文献并加以改进，摸索出一种简便易行的适用于全细胞膜片钳研究的大鼠顶叶皮层神经元急性分离方法，现报道如下：1 材料与方法1.1 实验动物Wistar大鼠，10～16 d，雌雄不限，由哈尔滨医科大学附属二院动物研究中心提供。
中国医药导报 2011年18期2011-01-30
- ＊ 基于小波包分解的细胞膜离子电流重构
)级离子电流,膜片钳技术可以记录到离子电流信号.在膜片钳测量系统中,通常采用阈值检测方法消除噪声,由于该方法不仅需要人为设定阈值,并且在信噪比较低(SNR＜5.0)时,电流恢复误差不能满足膜片钳测量系统的精度要求.基于隐马尔可夫模型(HMM)的离子单通道电流恢复是在强噪声背景下,从膜片钳记录中得到理想化通道电流的一种有效方法[1].然而,HMM算法中的状态重估公式只有在确知通道状态数目的条件下才能应用,在强背景噪声下,这一先验知识往往很难获得,并且 HMM
山西大学学报（自然科学版） 2011年1期2011-01-11
- ATP对髓袢升支粗段管周膜50pS钾通道的调节
实验利用单通道膜片钳技术，观察ATP对髓袢升支粗段管周膜50 pS钾通道活动的影响，进一步阐明髓袢升支粗段对NaCl的重吸收机制，为开发新的高效、安全利尿药提供理论依据。1 材料与方法1.1 肾小管的分离 健康SD(Sprague-Dawley)大鼠，体质量70～100 g，♀♂不限。由哈尔滨医科大学第二临床学院实验动物中心提供。大鼠在颈关节脱位后，立即打开腹腔取出肾脏，去除包膜，从肾脏的中间部分用刀片切出厚0.5～1 mm的冠状切片，浸入浓度为1 g·L
中国药理学通报 2010年10期2010-06-09
- 豚鼠心室肌细胞的分离及其基本电生理特性的观察
代［1］，随着膜片钳制技术的发展及其在心肌细胞上的应用，特别是以钙离子内流为主的慢内向电流的发现，带动了心肌电生理学的进一步深入发展。心肌细胞动作电位的研究是心肌电生理学研究必要的第一步。1964年Trautwein第一次用双电极电压钳制技术在犬的Purkinje纤维上记录出了心肌细胞的离子流，Hamill等［2］改进了Neher和Sakmann的膜片钳技术［3］，使其能够适用于心肌细胞电流的记录，20世纪80年代研究者发现并阐明了心肌细胞各种主要离子流的
中国医科大学学报 2010年4期2010-05-25
- 三种实用而简单的急性酶分离动脉平滑肌细胞的方法＊
研究,常应用到膜片钳技术、共聚焦显微技术、胞内物质的测定、流式细胞仪技术等研究领域。这些研究对单个细胞的要求都非常高,需要细胞获取率高、活性好、膜光滑、膜的折光性好。而影响急性酶分离法的关键因素在于控制酶的浓度、消化时间、消化温度等。那怎么样才能获取单个的高质量的动脉平滑肌细胞呢?现就笔者从事多年的动脉平滑肌细胞的研究工作的经验,以单个人体肠系膜动脉平滑肌细胞应用于膜片钳技术中为例,介绍几种实用的急性酶分离动脉平滑肌细胞的方法,以供大家参考。1 材料与方法
四川生理科学杂志 2010年4期2010-05-07
- 慢性房颤患者心肌瞬时外向钾通道电流密度变化
耳。采用全细胞膜片钳技术研究心房肌瞬时外向钾通道电流密度的变化。结果 慢性心房颤动患者心房肌瞬时外向钾通道电流密度降低，在测试电位-20 mV以上各电位水平时均有显著性差异(n=16，P【关键词】瞬时外向钾通道；膜片钳；人体心房肌细胞；心房颤动心房颤动是一种常见的慢性心律失常，60岁以上人群中的发病率为2%~4%，随着人口的老龄化，心房颤动变得更加常见[1]。心房有效不应期的缩短[2-4]和折返环的存在[5-7]在心房颤动中起重要作用。瞬时外向钾通道电流(
中国实用医药 2009年3期2009-02-19