原代
- 4种品系小鼠角质形成细胞原代培养比较研究
物实验中[4]。原代KC提取方法主要包括:中性蛋白酶消化法、胰蛋白酶消化法、中性蛋白酶和胰蛋白酶联合消化法以及嗜热菌蛋白酶消化法[5-7]。 胰蛋白酶作用于基底层细胞和棘层细胞,作用强度大,经济有效且操作最为简单方便。选择哪种品系的小鼠提取原代KC最合适尚未有明确的研究,该研究选用4种品系的成年小鼠背部皮肤,使用胰蛋白酶消化法获取原代KC,比较其增殖和分化能力,为皮肤相关疾病模型小鼠的品系选择提供一定的实验依据。1 材料与方法1.1 实验动物8周龄BALB
安徽医科大学学报 2023年6期2023-07-05
- 黄连生物碱改善小鼠原代肝细胞糖异生与脂质蓄积
。本研究使用小鼠原代肝细胞建立糖异生模型与脂质蓄积模型,筛选能改善小鼠原代肝细胞糖异生与脂质蓄积的黄连生物碱单体成分,并探讨其作用机制,为其用于防治代谢性疾病提供实验依据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 主要试剂:黄连总生物碱、黄连碱、小檗碱、表小檗碱、巴马汀、药根碱、非洲防己碱、木兰花碱(成都曼斯特生物科技公司);DMEM培养基(Corning公司);胎牛血清(Gibco公司);Ⅳ型胶原酶(Sigma公司);CCK-8试剂盒(北京聚地安泰科技有限公
基础医学与临床 2023年6期2023-06-05
- 合肥：我国首家“癌细胞银行”投入运行
司的“可再生癌症原代细胞生物银行”近日通过审批，正式投入运行，成为中国首家获批的以肿瘤原代细胞为特色的“活体”生物样本库。可再生癌症原代细胞生物银行，会在征得患者同意后签署协议采集肿瘤样本，根据要求建立不同的细胞生物模型。模型在经过生物学特性等各类标准检测合格后，就会存储到液氮罐中。该生物样本库依托肿瘤原代细胞体外扩增技术，可以模拟出肿瘤在体内的生存环境，将肿瘤患者新鲜癌组织样本变为可再生的原代癌细胞，作为基础科学研究和产业化细胞库资源。研究人员表示，该生
康复 2023年10期2023-05-06
- 视黄醇结合蛋白1通过激活TAK1促进大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大*
K1促进大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大*谢菁， 周艳丽， 陈思思， 王继春， 江洪△（武汉大学人民医院心血管内科，武汉大学心血管病研究所，心血管病湖北省重点实验室，湖北 武汉 430000）探究视黄醇结合蛋白1（retinol binding protein 1， Rbp1）在大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大中的功能和机制。本研究通过联合分析基因表达数据库（Gene Expression Omnibus， GEO）中的小鼠心肌肥厚基因芯片数据，寻找在心肌肥厚发生过程中的
中国病理生理杂志 2023年2期2023-03-10
- miR-200c 对颅咽管瘤侵袭性的影响及作用机制
建国等[2]利用原代培养建立了能稳定传代的颅咽管瘤细胞系，为开展颅咽管瘤的基础研究提供了新的方法。本研究拟初步探讨miRNA-200家族在颅咽管瘤中的作用，现报道如下。1 材料与方法1.1 研究对象 原代细胞培养所需标本来自2017 年6 月-2018 年12 月在四川大学华西医院神经外科手术切除的无菌新鲜颅咽管瘤组织各5 例。1.2 主要实验材料 SYBR Green PCR 试剂盒（Ther mo，F-415XL），逆转录试剂盒（Thermo，#K16
医学信息 2023年2期2023-03-10
- 原代肝细胞外泌体对肝星状细胞活化的影响
本研究拟分离培养原代肝细胞，提取肝细胞外泌体、并与活化的HSC共培养，观察HSC活化及纤维化相关基因的表达，初步探索正常肝细胞外泌体对HSC活化的影响。1 材料与方法1.1 实验动物、试剂及仪器1.1.1实验动物 SPF级C57BL/6雄性小鼠，7～8周龄，体质量约20 g，购于广西医科大学实验动物中心，动物实验操作过程均符合《中华人民共和国实验动物管理条例》及伦理要求。1.1.2主要实验试剂和仪器 实验所用主要试剂包括：D-Hanks液，小鼠肝细胞专用培
贵州医科大学学报 2022年11期2022-12-23
- 福建酸竹提取物通过调节硫氧还蛋白1减轻紫外线诱导的皮肤光损伤的研究
培养和紫外线辐射原代人皮肤角质形成细胞在含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素/谷氨酰胺的杜氏改良Eagle培养基（Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA，USA）中培养，保存于37 ℃、5%CO2的培养箱中培养。UV辐射设备和步骤参照文献[21]～[25]。1.2.2 抗体和试剂Cleaved caspase 3 （#9661，1∶1000）、β-肌动蛋白（#3700，1∶3000）、硫氧还蛋白1（#24
福建轻纺 2022年11期2022-11-23
- 猕猴原代肾小球系膜细胞分离提取培养与鉴定
和GMCs组成。原代肾组织中细胞提取培养中，与内皮细胞与上皮细胞相比，GMCs是较易生长的肾小球细胞，因为它们的生长需求最小，增殖能力较强[4]。目前已有对大鼠、小鼠、兔、人及猪的GMCs分离方法的报道[5]，但尚未见对猕猴原代GMCs分离方法的报道。有文献[6]报道称，可以利用小鼠肾脏进行GMCs培养，但其操作步骤繁琐，利用50、100目和200目三道筛网才能筛出纯度较高的肾小球组织。肾小球位于肾脏肾皮质部位，小鼠肾皮质部位小，需要足够量的小鼠肾组织才能
安徽医科大学学报 2022年8期2022-09-21
- 利用NASH大鼠原代肝细胞与原代Kupffer细胞共培养建立NASH原代细胞模型*
提纯NASH大鼠原代肝细胞以及原代肝Kupffer细胞进行共培养，建立NASH大鼠体外细胞模型，为之后的NASH相关药物研究提供技术支持。1 材料与方法1.1 实验动物选择SPF级雄性SD大鼠40只，体质量( 180±20) g，实验动物由西南医科大学实验动物中心提供(实验动物生产许可证，SCXK(川)2018-17)，适应性饲养一周后(实验动物使用许可证，SYXK(川)2018-065)，随机分为NASH组和对照组，每组各20只，NASH组大鼠采用高脂饲
中国应用生理学杂志 2022年2期2022-08-29
- TRPC6通过GSK-3β/β-catenin通路调控EMT减轻TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞损伤*
验对象，分离培养原代TEC，从细胞水平研究TRPC6通过调控EMT减轻肾纤维化损伤的分子机制。1 材料与方法1.1 动物与试剂本实验以SPF级成年雄性TRPC6-/-和WT小鼠为实验对象。其中WT小鼠为构建TRPC6-/-小鼠的背景小鼠129 SvEv，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司，TRPC6-/-小鼠由美国NIH/NIEHS Lutz Birnbaumer实验室提供。EMT分子标记和通路相关抗体购买于CST公司。1.2 分离培养TEC与实验分组
华中科技大学学报（医学版） 2022年4期2022-08-19
- 猕猴冠状动脉原代内皮细胞分离和培养及其功能验证
鼠和猪的冠状动脉原代内皮细胞分离方法，尚未见猕猴相关方法报道[5-7]。与其他动物相比，猕猴表现出与人类遗传、免疫和代谢的高度相似性，是基础研究和临床应用之间一个理想的转化模型[8]。在体外实验中，为更好模拟人体细胞的病理生理状态，探索一种简便可行的猕猴冠状动脉原代内皮细胞分离方法十分必要。该研究成功建立了猕猴冠状动脉原代内皮细胞的分离培养方法，并对其进行鉴定和功能研究。1 材料与方法1.1 实验动物选取3～5岁普通级实验猕猴，饲养于安徽医科大学临床药理研
安徽医科大学学报 2022年6期2022-07-13
- 原代滑膜细胞培养及同时提取微量总RNA和蛋白质的方法在体外细胞分子生物学研究中的应用
，曹福洋，许建中原代细胞培养技术是广泛应用于疾病体外研究的重要方法之一[1,2]，对原代培养的细胞进行分子生物学研究，可以排除其他细胞干扰，提高生物信息的准确性和特异性，进一步保证研究结论的可靠性。但原代细胞培养成功率低，有时纯度达标困难。解决了纯度问题，又会出现可用于实验研究材料的原代细胞的代数不多，仅2～3代可用[3,4]，传至4代以后的细胞就老化的问题，不能保持原代细胞原有的特征和功能。采用传代的原代细胞培养进行体外分子生物学研究，必须保证传代细胞具
中华骨与关节外科杂志 2022年4期2022-06-30
- 瘦素对猪原代脂肪细胞脂滴相关基因mRNA 表达的影响*
较少。本研究以猪原代脂肪细胞为材料，通过不同质量浓度LEP 处理猪原代脂肪细胞，以TAG 含量以及PLIN1、PLIN2和FITM2mRNA 表达水平为分析指标，探究LEP 对脂滴相关基因表达的影响。1 材料与方法1.1 试验动物及处理麻醉放血处死3 头15 日龄健康状况良好的三元杂交仔猪（Duroc×Landrace×Yorkshire，DLY），取背部皮下脂肪。试验动物来自云南农业大学实验猪场。1.2 猪原代脂肪细胞分离培养及诱导分化参照李永能等[15
云南农业大学学报(自然科学) 2022年1期2022-01-24
- 改良法分离培养SD新生乳鼠原代心肌细胞*
315040)原代心肌细胞由于不受机体神经体液因素干扰，同时保持着众多在体心肌细胞的结构和功能特点，是心血管疾病临床和基础研究无可替代的体外实验模型。自20世纪60年代，Harary等[1]成功分离培养心肌细胞以来，关于原代心肌细胞纯化培养的方法不断改进和完善[2-4]，但仍旧存在操作繁琐、耗时较长、存活率不高、结构破坏等诸多缺陷[5]，且心肌细胞近乎是终末分化细胞无法传代培养，实验时必须每次从头分离纯化。因此，如何实现原代心肌细胞的简单快捷、高纯度、高
中国应用生理学杂志 2021年6期2021-12-08
- 良性脑膜瘤原代细胞培养及脂多糖对其增殖的影响
性脑膜瘤及柔脑膜原代细胞，并用脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)对细胞进行处理，检测细胞的增殖活力及炎症因子表达水平；以探讨良性脑膜瘤及柔脑膜原代细胞的培养技术和LPS对细胞增殖的影响，以及炎症与良性脑膜瘤发生发展的机制。1 材料与方法1.1 材料 孕19 d的SD大鼠(购于西谱尔-必凯公司)，饲养于SPF级环境，人工昼夜节律，自由饮食。待娩出新生鼠后，将新生1 d的SD大鼠用于提取柔脑膜原代细胞。动物实验遵循上海交通大学医学院动物伦理
临床神经外科杂志 2021年5期2021-11-11
- AFB1对犬肝细胞的毒性作用及NAC的保护效应
关于AFB1对犬原代肝细胞的毒性研究尚未见报道。N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)，简称乙酰半胱氨酸，是氨基酸L-半胱氨酸的N-乙酰衍生物。NAC含有的巯基具有抗氧化作用，能够减少自由基的产生[11]。同时NAC也是半胱氨酸的供体，半胱氨酸是谷胱甘肽形成时的必需氨基酸，因此NAC还能够维持动物体内抗氧化物谷胱甘肽水平[12-13]。有研究表明，NAC对肝脏具有保护作用，可调节大鼠肝细胞凋亡基因[14-15]。薛画眉等[16]研究了NAC对玉米赤霉烯酮致大鼠睾
西北农林科技大学学报（自然科学版） 2021年7期2021-08-09
- 褪黑素上调SIRT1改善高糖诱导原代心肌细胞损伤的机制研究
黑素在高糖诱导的原代心肌细胞损伤的作用以及机制,为糖尿病心肌病的治疗提供新的实验依据和理论依据。1 材料与方法1.1 实验动物与试剂C57BL/6乳鼠,出生1-3 d,购自第四军医大学实验动物中心;褪黑素、胶原酶Ⅱ购自美国Sigma公司、沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin1,SIRT1)、Beclin1和自噬相关5同源物(autophagy related 5 homolog,Atg5)购自美国CST公司;cleaved Caspase-3、Bcl
山西医科大学学报 2021年5期2021-06-18
- 人用狂犬病疫苗原代地鼠肾细胞蛋白质国家对照品的建立
病毒固定毒株，在原代地鼠肾细胞适应传代，研制成功原代地鼠肾细胞培养的人用狂犬病灭活疫苗，至今为止，在我国已有50多年的使用历史［1-3］。目前该类疫苗仍在市场流通，为我国狂犬病的预防做出了卓越的贡献。狂犬病是致死性疾病，全世界每年因其死亡约59 000人［4］，我国近年的狂犬病疫情虽有所缓解，但情况仍不容乐观。我国人用狂犬病疫苗市场需求量较大，2015—2019年连续5年人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）的批签发量就分别达到了80万、80万、100万、120万和
中国生物制品学杂志 2021年5期2021-05-19
- 青钱柳中5种三萜酸成分对肝细胞糖异生的影响
三萜酸成分对小鼠原代肝细胞糖异生及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6Pase)的影响，以期发现抑制肝糖异生的先导化合物，为青钱柳降糖提供更充分的科学依据。1 材料1.1 试剂与药物D-Hanks缓冲液、DMEM高糖、噻唑兰(MTT)、PBS溶液(江苏凯基生物技术股份有限公司)；氯化钙、ITS(Insulin、Transferrin、Selenium)细胞培养添加物、丙酮酸钠、乳酸钠、Ⅳ型胶原酶、地塞米松(美国Sigma公司)
中医药信息 2021年3期2021-05-14
- 大鼠股动脉血管原代内皮细胞的分离与培养
较小血管如股动脉原代内皮细胞分离、培养方法及功能研究鲜有报道。大鼠股动脉位于腹股沟耻骨联合处，管径窄小，分离其原代内皮细胞有一定难度。所以，探索一种简便可行的提取、分离、培养方法十分必要。该研究综合股动脉生理特性与血管内皮细胞生长需求，制备出一种有效、简便的内皮细胞分离与培养方法，并对其进行了鉴定和功能研究。1 材料与方法1.1 实验动物 选取7～8周龄SPF级雄性Wistar大鼠，并饲喂于安徽医科大学SPF级实验动物中心。温度：20～26 ℃；日温差：≤
安徽医科大学学报 2021年4期2021-04-09
- CYP450蛋白在HepG2细胞与小鼠原代肝细胞中的表达差异*
胞模型主要有小鼠原代肝细胞、肝细胞系等。小鼠原代肝细胞来源于小鼠肝组织，其肝脏药物代谢酶的表达情况最接近于机体，被广泛应用于药物代谢途径、代谢效率、药物代谢酶的抑制和诱导等方面的研究[7-8]。HepG2细胞来源于肝细胞，是一种表型与肝细胞极为相似的肝胚胎瘤细胞株，保留了肝细胞的许多生物学特性[9-10]。细胞模型的选择在体外代谢实验中及其重要，且细胞中CYP450表达丰度直接影响到相关研究的科学性，故本研究旨在分析HepG2细胞和小鼠原代肝细胞中CYP4
贵州医科大学学报 2020年10期2020-11-03
- 两株自筛酵母衰退性对葡萄酒发酵原酒品质的影响
个发酵罐分别接入原代酵母和传代酵母进行平行试验，通过对发酵过程和发酵结果的对比，从发酵性能、理化分析、感官品评等方面综合分析原代酵母与传代酵母的差异，从而进一步研究自筛酵母衰退性对原酒品质的影响。1 材料与方法1.1 材料、试剂及仪器1.1.1 试验菌株来自河北昌黎产区酿酒葡萄自然发酵液中筛选的两株优良酵母CC17 和SC5，经过中试试验，在生产发酵中有良好的表现，并取得了国家专利[11-12]；原代酵母菌种采用甘油管冷冻法[13]保藏于中国农业大学食品学
酿酒科技 2020年9期2020-11-02
- 法舒地尔通过调控糖酵解通路对原代小胶质细胞的影响
糖（LPS）激活原代小胶质细胞来研究法舒地尔对细胞炎症水平的影响，以及对Aβ的吞噬作用，并研究其可能的作用机制。结果发现法舒地尔可以降低原代小胶质细胞的促炎因子水平，提高原代小胶质细胞的Aβ吞噬能力，下调小胶质细胞HIF-1α的转录活性来降低糖酵解过程相关酶的相对表达量，抑制糖酵解的过程，从而增加ATP的产生，提示法舒地尔是治疗AD的潜在药物。1 材料与方法1.1 材料原代小胶质细胞由山西大同大学脑科学研究所分离培养。DMEM(Gibco)培养基购自Lif
山西大同大学学报(自然科学版) 2020年3期2020-07-17
- STING 蛋白在绵羊原代肺泡巨噬细胞的表达与生物信息学分析
核周。但有关绵羊原代肺泡巨噬细胞中的STING 蛋白还未见报道。宁夏地处西北，养殖业资源丰富，绵羊是其主要的养殖物种，但疾病的发生阻碍了绵羊养殖业的发展，特别是羊传染性胸膜肺炎的发生给羊养殖业带来重大的经济损失，因此对绵羊抗感染相关基因的探究特别是针对其呼吸道第一道防线——绵羊肺泡巨噬细胞中抗感染基因的发现对于该病的防控具有重要意义。为此，本研究首先证明了绵羊原代肺泡巨噬细胞中含有sting 基因，明确了STING 蛋白在绵羊原代肺泡巨噬细胞中的表达；利用
中国预防兽医学报 2020年3期2020-07-01
- 丙泊酚对高糖诱导大鼠原代成骨细胞氧化应激损伤的影响研究
丙泊酚对高糖诱导原代成骨细胞氧化应激损伤的影响，为高血糖所致骨骼系统相关疾病的预防与治疗提供新的思路。1 材料与方法1.1实验试剂与仪器 胎牛血清、α-MEM培养基均购于Hyclone公司；CCK-8检测试剂盒购于Dojindo Molecular Technologies公司；ROS检测试剂盒(批号：20170115)购自碧云天生物技术研究所；丙泊酚(批号：01708271)购自北京费森尤斯卡比医药有限公司；葡萄糖购于美国Sigma公司；0.25%胰酶购
解放军医药杂志 2020年3期2020-04-08
- 小鼠原代肝细胞糖异生研究模型的建立
主要器官[8]。原代肝细胞是体内肝细胞的良好代表，是在体外研究肝功能的有用工具，如基因表达的变化、内源性物质的代谢以及外源性药物的药理特性，新分离的肝细胞比肝脏来源的细胞株更能反映正常肝脏在体内的功能[9]。原代肝细胞的分离方法包括非灌流的机械分离法、胰酶消化法和胶原酶消化法，采用灌流的离体胶原酶灌流法、Seglen两步灌流法、下腔静脉逆向胶原酶灌流法和Gerlach五步胶原酶灌流法。迄今，Seglen两步灌流法是分离大量高活性原代肝细胞的首选方法。在第一
生物技术通讯 2020年6期2020-03-10
- 狂犬病病毒感染小鼠原代神经元细胞模型的建立
力的RABV感染原代神经元细胞，建立了RABV感染原代神经元细胞模型，确定了两种不同毒力病毒的最佳感染条件。在最佳感染条件下，检测了突触循环相关核心蛋白SNARE主要复合物（synaptobrevin/VAMP、syntaxin及SNAP 25）的蛋白表达情况，为进一步了解RABV致神经性症状提供理论依据和基础。1 材料与方法1.1 毒株、细胞系与实验动物RABV弱毒株SAD、固定毒株CVS 11由本实验室保存；m NA细胞由内蒙古大学杨洋副教授惠赠；怀孕
中国动物传染病学报 2019年5期2019-12-16
- 人乳腺癌原代细胞组织块培养方法的改良及其鉴定
所以，建立体外的原代人乳腺癌细胞培养模型，用于人乳腺癌细胞分子生物学特征的研究，其重要性日显突出。研究表明，原代培养人乳腺癌细胞的常见方法包括组织块贴壁法、酶消化法和细胞培养法，与酶消化法和细胞培养法相比较，组织块贴壁法实验成本更低廉，细胞存活率更高[7]。但其在实际应用中也存在自身的缺点，如易污染，在剪碎组织培养细胞过程中，易造成组织损伤及失活，不利于细胞爬出，耗时较长等，尤其是成纤维细胞的生存和适应能力强，较早于肿瘤细胞从组织块中爬出，进一步包绕组织块
遵义医科大学学报 2019年4期2019-10-22
- 青蒿虎酯对人急性髓系白血病原代细胞及其细胞株K562增殖和凋亡的影响研究
青蒿琥酯对AML原代细胞与细胞株K562的增殖抑制及促凋亡作用，以期为进一步明确AML的发病机制及青蒿琥酯的临床应用提供理论依据。1 材料与方法1.1 研究材料 AML儿童纳入标准：（1）经细胞形态学、组织化学染色及流式细胞免疫学分型确诊；（2）初治或复发AML；（3）患儿家属均对本研究内容知情且签署知情同意书；（4）临床诊治资料完善。采用密度梯度法分离2016年10月—2018年10月于河南省儿童医院血液科就诊的符合纳入标准的24例初治或复发AML患儿的
中国全科医学 2019年30期2019-10-09
- PGE2/PGE2-R介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径与子宫肌瘤发病机制的研究
达。培养子宫肌瘤原代细胞，同时加入PGE2-R(EP1受体)抑制剂sc-51322或激动剂17-PT-PGE2，分为原代细胞组、原代+sc-51322组和原代+17-PT-PGE2组。1.3.2细胞培养 子宫肌瘤组织置于1%双抗(青链霉素混合液)的HBSS中；0.4%胶原酶8 ml(内含DNase I)，37 ℃摇床消化；消化结束后后用含10%的DMEM-F12重悬细胞，置细胞培养瓶中，置于37 ℃、5% CO2的细胞培养箱中孵育培养。每隔20 min将没
安徽医科大学学报 2019年5期2019-06-12
- PTEN基因沉默对小鼠原代肝细胞Akt/GSK-3β信号通路的影响*
丙泊酚可引起小鼠原代肝细胞蛋白激酶B(Akt)和糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化水平降低，抑制小鼠原代肝细胞磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt/GSK-3β信号通路，抑制小鼠原代肝细胞糖原合成，从而引起小鼠原代肝细胞胰岛素抵抗[4]。第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物蛋白(PTEN)可从上游调节PI3K/Akt信号通路[5-7]，在先前研究的基础上[4]，笔者推测PTEN参与了丙泊酚所致的胰岛素抵抗。本实验将通过基因沉默，探讨PTEN
重庆医学 2019年7期2019-04-25
- 一种肠肌间神经丛胶质细胞无血清原代培养法的建立
制目前仍不清楚。原代EGC培养可排除在体环境下的神经体液因素，是深入探讨EGC功能特性的重要方法。目前已有肠道肌间神经丛EGC原代培养方法的报道[9-11]，但关于培养过程中成纤维细胞污染的去除，现有方法尚需改进。有研究者尝试应用无血清法去除雪旺细胞培养中成纤维细胞的污染，效果良好[12-13]，但此方法尚未运用于EGC的原代培养。本实验方法结合无血清培养改进现有的肌间神经丛EGC原代培养法，有效去除了成纤维细胞污染，获得了纯度较高，活性良好的结肠肌间神经
首都医科大学学报 2019年2期2019-04-22
- 原代猪肝细胞及主动脉内皮细胞的提取和培养
细胞浸润。传统的原代肝细胞的提取方法主要有机械破碎法和胶原酶消化法，提取的原代肝细胞数量和细胞活力有限，若应用于珍稀动物，如转基因猪的原代肝细胞提取就会表现出不足，本研究在Seglen［5］经典的两步法提取原代肝细胞基础上做了一些改进，采用蠕动泵灌注胶原酶消化的方法提取到了大量高活力的原代猪肝细胞［6］。目前血管内皮细胞原代提取方法中，一般采用酶消化法及组织贴壁法，所获得的血管内皮细胞数量和纯度已经不能满足科研实验的需要。本研究采用胶原酶血管管腔灌注消化的
实用器官移植电子杂志 2018年5期2018-11-09
- 应用原代软骨细胞与SW1353软骨肉瘤细胞系建立体外骨关节炎模型的效果评价
实验研究大多采用原代细胞或细胞系来进行[7,8]，如正常软骨细胞、OA软骨细胞或软骨肉瘤细胞系（如SW1353细胞系）等。但以上细胞在作为OA体外实验研究对象时，细胞的病理变化及对炎症的反应程度存在一定的差异。因此，本研究通过比较白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）处理下，来源于OA患者的原代软骨细胞及SW1353软骨肉瘤细胞系的增殖活力、OA的炎症标志性产物白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）及基质金属蛋白酶-13
中国组织化学与细胞化学杂志 2018年5期2018-11-07
- 紫杉醇对肝癌细胞HepG2和大鼠原代培养肝细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的研究
细胞HepG2和原代肝细胞的影响，本研究以肝癌细胞HepG2和原代肝细胞为研究对象，通过细胞形态学、细胞活性和细胞凋亡检测等来比较分析紫杉醇对这两种细胞的毒性作用。初步探讨紫杉醇对两种细胞的凋亡影响，为探索其抗肝癌作用机制提供理论依据。1 材料与方法1.1材料1.1.1细胞株 肝癌细胞株HepG2购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。1.1.2实验动物与试剂 SD大鼠♂，3只, 体质量(50±5)g，由广西医科大学实验动物中心提供。DMEM高糖培养
中国药理学通报 2018年7期2018-07-04
- 特异性Aurora激酶抑制剂对人乳腺癌原代细胞增殖、周期、自噬、凋亡的影响及其机制
前关于其在乳腺癌原代细胞中的作用相关研究报道较少。2015年5月～2016年8月，我们观察了AT9283对乳腺癌原代细胞增殖、周期、自噬、凋亡的影响，并探讨其可能作用机制。1 材料与方法1.1 细胞、试剂及仪器 人乳腺癌瘤组织来自河北北方学院附属第一医院乳腺外科，采用细胞培养法培养原代细胞。在无菌条件下收集乳腺癌原发病灶标本，去除坏死组织，用含有青霉素和链霉素的PBS漂洗2～3次，将组织剪碎，1 000 r/min离心5～10 min，弃上清液，加入含20
山东医药 2018年15期2018-06-01
- 醛固酮瘤细胞原代培养方法的建立及细胞鉴定
。醛固酮瘤细胞的原代培养对研究肿瘤的致病背景及下游功能有十分重要的作用。然而，大部分醛固酮瘤直径在2 cm以内，这对醛固酮瘤细胞的原代培养造成了很大的困难。目前国际上仅有个别文献报道了APA的原代培养[6- 7]，国内尚无相关报道。本研究的目的即是建立醛固酮瘤细胞的原代培养方法及培养细胞的鉴定。1 材料与方法1.1 材料Ⅰ型胶原酶(Gibco公司)；DMEM/F12培养基(Hyclone公司)；标准级胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；青链霉素(×
基础医学与临床 2018年6期2018-05-30
- 骨髓间充质干细胞对七氟烷所致的原代神经元凋亡及细胞活性的影响
处理干预七氟烷对原代神经元的凋亡和细胞活性产生的影响，探索BMSCs在缓解神经毒性损伤中起的作用；并通过检测培养液上清中的炎症因子TNFα水平，探索BMSCs通过抗炎、抗免疫失调机制产生神经保护作用的可能性，为防治七氟烷造成的神经毒性损伤提供新的思路。1 材料和方法1.1 主要试剂与仪器DMEM培养基、Neuron-basal培养基、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶（Gibco公司，美国）；多聚赖氨酸（Sigma公司， 美国）；caspase-3 抗体、β-a
组织工程与重建外科杂志 2018年1期2018-04-09
- 原代人黑素细胞Wnt5A基因沉默的研究
9南京）·论著·原代人黑素细胞Wnt5A基因沉默的研究粟倩雅 林彤 张孟丽 彭霖210042南京，中国医学科学院 北京协和医学院 皮肤病医院激光科（第一作者现在东南大学附属中大医院皮肤科，210009南京）目的 优化Wnt5A特异性siRNA转染原代人黑素细胞的实验条件，建立沉默Wnt5A基因的模型。方法 培养原代人黑素细胞，将不同浓度（0、20.0、33.3、40.0、60.0 nmol/L）的阳性参照基因GAPDH特异性siRNA通过脂质体法介导转染原
中华皮肤科杂志 2017年10期2017-12-12
- 正常宫颈上皮细胞原代培养体系的改良*
正常宫颈上皮细胞原代培养体系的改良*李 雅，荣守华，智艳芳，樊婷婷，邱 翠，李肖甫#郑州大学第三附属医院细胞室 郑州 450052#通信作者，男，1964 年7 月生，硕士，教授，研究方向：肿瘤细胞病理学，E-mail：lixiaofu1964@163.com原代培养；宫颈上皮细胞；中性蛋白酶；角质细胞无血清培养基目的：探索一种高效、可重复的正常宫颈上皮细胞原代培养方法。方法：取60例正常宫颈组织，分成2组，分别采用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25 g/mL胰蛋
郑州大学学报（医学版） 2017年3期2017-06-07
- Matrigel三维细胞培养方法培养的原代乳腺癌细胞生长情况及对阿霉素敏感性观察
胞培养方法培养的原代乳腺癌细胞生长情况及对阿霉素敏感性观察张震1,2,3，齐晓敏1,2,3，张薇1,2,3，张培1,2,3，曹旭晨1,2,3，肖春花1,2,3(1天津医科大学肿瘤医院，国家肿瘤临床医学研究中心,天津300060；2天津市“肿瘤防治”重点实验室；3天津市恶性肿瘤临床医学研究中心；4乳腺癌防治教育部重点实验室)目的 观察Matrigel三维细胞培养方法培养的原代乳腺癌细胞生长情况及其对阿霉素的敏感性。方法 分别采用二维单层培养法、Matrige
山东医药 2017年19期2017-06-05
- EV71病毒对树鼩原代肾上皮细胞感染模型的建立
V71病毒对树鼩原代肾上皮细胞感染模型的建立杨铭1，胡晓星1，王文广2，张莉1，董书维1，冯悦1，代解杰2*，夏雪山1*(1. 昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明 650500；2. 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩标准化研究与疾病动物模型创建省创新团队，昆明 650118)目的 建立EV71对树鼩原代肾细胞的感染模型。方法 胰蛋白酶消化法获得树鼩的原代肾细胞，用EV71感染树鼩肾细胞，测定1、2、4、6和8 d培养上清病毒滴度，分别用
中国实验动物学报 2017年2期2017-05-18
- 人轮状病毒G1P[8]型感染树鼩原代小肠上皮细胞模型的建立
[8]型感染树鼩原代小肠上皮细胞模型的建立李道群1，彭杰1，甸子芩1,2，王文广3，张阿梅1，冯悦1，牛华2，代解杰3*，夏雪山1*(1. 昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明 650500；2. 昆明理工大学附属医院(云南省第一人民医院)，昆明 650032；3. 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩标准化研究与疾病动物模型创建省创新团队，昆明 650118)目的 探究树鼩原代小肠上皮细胞的增殖特性，建立人轮状G1P[8]型病毒体外感染树鼩
中国实验动物学报 2017年2期2017-05-18
- 用megaTAL 核酸酶对原代人T 细胞CCR5 基因座进行有效修饰可建立HIV-1 抵抗力
TAL 核酸酶对原代人T 细胞CCR5 基因座进行有效修饰可建立HIV-1 抵抗力已有研究表明，HIV-1 协同受体( co-receptor) CCR5 基因中自然发生的32 个碱基对缺失( 32-base pair deletion)可保护人CD4+T细胞，对抗HIV感染。最近，用工程化核酸酶干扰该基因和模拟此突变的基因工程方法展示了HIV 治疗获得成功的迹象。Romano Ibarra 等研制了一个靶向CCR5 基因第3 细胞外茎环( extrace
中国病理生理杂志 2017年2期2017-01-17
- 家族型帕金森病α-突触核蛋白突变体寡聚化对神经元毒性的影响
0P聚集体对大鼠原代神经元的神经毒性。方法 取大鼠前脑皮质神经元进行原代培养，在培养基中加入体外孵育的α-Syn聚集体。培养14 d后，MTT法和神经元流式细胞术观察神经元的细胞活力。免疫荧光染色后以激光共聚焦显微镜观察细胞内聚集体的分布。硫磺素S染色观察细胞内包涵体的形成。结果 加入α-Syn聚集体各组的原代神经元细胞活力较对照组降低(P帕金森病；α-突触核蛋白；寡聚体；原代神经元；神经毒性目前研究认为，老化、遗传和环境因素的相互作用是帕金森病(PD)发
中国老年学杂志 2016年23期2016-12-23
- 乳源免疫调节肽提高DDP对卵巢癌细胞的影响
合PGPIPN对原代卵巢癌细胞增殖抑制情况，流式细胞术检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞凋亡率和周期的影响，细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果MTS实验表明PGPIPN联合DDP处理组对卵巢癌细胞抑制率显著高于单独用DDP组,差异有统计学意义(P人原代卵巢癌细胞；联合用药；免疫调节肽；顺铂卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，其发病率位于女性生殖道恶性肿瘤的前列[1-2]。现有的治疗主要是手术和化疗两种方式，但化疗很容易出现耐药性，进而治疗效果逐渐降低
安徽医科大学学报 2016年10期2016-11-25
- 原代小鼠肝细胞培养方法的比较
，陈 雯，陈丽萍原代小鼠肝细胞培养方法的比较王珊，柏青，王方萍，李慧瑶，陈燊，何志妮，王庆，陈雯，陈丽萍*（中山大学公共卫生学院预防医学系，广东广州510080）目的： 比较3种不同培养条件下原代小鼠肝细胞的形态以及肝细胞功能，寻找适合于原代小鼠肝细胞体外培养的培养基配方。方法：采用改良Seglen两步胶原酶灌注法分离原代小鼠肝细胞，糖原染色观察细胞纯度，在贴壁4 h后用基础培养基、基础培养基加DMSO(DMSO组)、基础培养基加DMSO和EGF(DMSO
癌变·畸变·突变 2016年2期2016-09-02
- 改良人牙龈上皮细胞原代培养方法
良人牙龈上皮细胞原代培养方法余婧婷1,2， 孟焕新1△， 刘凯宁1(北京大学口腔医学院·口腔医院1.牙周科，2.综合科口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室口腔数字医学北京市重点实验室, 北京100081)目的：建立稳定的人牙龈上皮细胞的原代培养方法，为牙周组织的细胞学研究提供可靠的细胞来源，对原有的原代培养方法进行了改良，期望达到培养成功率高、原代培养时间短且操作简便的效果。方法： 选择行“冠延长术”的牙周相对健康者9人，取冠延长术切除的领圈牙龈组织进行
北京大学学报（医学版） 2016年4期2016-09-01
- 不同消化时间对原代心肌细胞的影响
杨晓敏0 引 言原代心肌细胞培养是一项重要的体外实验技术，其为建造心血管疾病发生发展过程的模型及探讨基因、蛋白质及信号通路的变化提供重要的基础保障。此外，在体内心肌细胞的活动受到神经、体液等多方因素的影响，限制对其病理变化的过程的研究。而体外培养的原代心肌细胞不仅具有心肌细胞固有的活性，而且还有不受神经、体液等因素的影响的可控制性。因此，原代心肌细胞培养的好坏，是影响实验的结果的关键因素之一。本研究通过比较不同消化时间对原代心肌细胞的影响，探讨一套简便易行
医学研究生学报 2015年6期2015-05-07
- 新生鼠肺成纤维细胞原代培养方法的比较与体外肌成纤维细胞分化模型的建立
贴壁法2种不同的原代培养方法，分别进行新生乳鼠FB的培养，观察并分析采用不同培养方法的优缺点，探讨新生乳鼠肺FB原代培养的最佳方法;并采用TGF-β1诱导肺 FB向肌FB分化，为建立体外肌FB分化模型、更好地研究矽肺纤维化提供进一步的理论基础和实验依据。1 材料与方法1.1 动物 SRF级SD大鼠雌雄各2只(北京华阜康公司，许可证号:SCXK京20090004)，6～8周龄，体重160～180g，自由交配，于河北联合大学动物中心屏障动物实验室饲养，室温27
医学研究生学报 2014年2期2014-09-28
- EA.HY926人脐静脉内皮细胞株与原代细胞生物特性的比较研究
内皮细胞，主要有原代脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVECs)和EA.HY926人脐静脉内皮细胞株。本实验在建立原代人脐静脉内皮细胞体外分离和培养方法的同时，比较原代人脐静脉内皮细胞与 EA.HY926人脐静脉内皮细胞株的生物特性，为血管性疾病研究的细胞来源的选择提供理论支撑。1 材料与方法1.1材料原代细胞：来源于新疆医科大学第一附属医院产科健康剖宫产产妇分娩后所取的新生胎儿脐带，长度15～
新疆医科大学学报 2014年1期2014-07-13
- 羊睾丸原代细胞传代试验
0011）羊睾丸原代细胞传代试验张玉红，何玉仙，井莲娜，王玉红（新疆天康畜牧生物技术股份有限公司，新疆 乌鲁木齐830011）生产山羊痘活疫苗时，羊睾丸采集工作量大，易污染，费时费事，是否有办法减少人员外出采集羊睾丸次数，值得摸索，本实验将长成单层的羊睾丸细胞进行传代，长成致密单层后进行接毒，收获毒液，并对毒液及疫苗成品进行病毒含量测定，结果表明，羊睾丸细胞完全可以传一代，细胞形态良好，毒液、疫苗成品毒价均达到规程要求，羊睾丸原代细胞传代可以大大提高睾丸组
草食家畜 2013年3期2013-06-05
- 体外培养不同代角膜缘干细胞特性分析△
免疫荧光染色分析原代、第1代和第2代角膜缘细胞形态学特性;流式细胞技术定量检测原代、第1代和第2代角膜缘细胞ABCG2表达;MTT比色法测定体外培养原代、第1代和第2代角膜缘干细胞的增殖活性变化。结果倒置相差显微镜下可见原代细胞培养24 h有单个细胞从组织块边缘迁出，48 h细胞局部可见拉网样生长趋势，72 h出现大片细胞，细胞呈现多边形或多角形，96 h细胞几乎铺满整个培养板。随着传代次数的增加，细胞形态变得不规则，CK3单克隆抗体表达阳性率逐渐增强;p
眼科新进展 2012年7期2012-01-17
- 体外培养树鼩视网膜Mǜller细胞的实验研究*
Mǜller细胞原代培养的技术方法。方法:将树鼩大鼠视网膜原代培养,换液时用胰蛋白酶流经培养面洗脱神经元。免疫组化和电镜鉴定分次胰蛋白酶清洗后原代培养细胞的纯度。结果:原代培养的细胞有大量神经元混杂, 经多次低浓度胰蛋白酶清洗可将附着在Mǜller细胞上的神经元洗脱,通过电镜证实培养的为Mǜller细胞,GFAP显示Mǜller细胞纯度可达95%以上。结论:分次胰蛋白酶清洗是一种简便有效的纯化原代视网膜Mǜller细胞的方法。
中国病理生理杂志 2010年10期2010-02-11