温育
- 特应性皮炎患儿482例血清过敏原检测结果分析
测所需膜条放置于温育槽中,分别加入1.0 mL已稀释的通用缓冲液进行预处理,温育5 min后吸去液体;在温育槽中加入1.0 mL未稀释的样本,在摇床上温育60 min;吸去槽内血清,用1.0 mL的通用缓冲液清洗膜条3次,然后在温育槽中加入1.0 mL酶结合物(碱性磷酸酶标记的抗人IgE,单克隆),于摇床上温育60 min;如上述步骤清洗后加入1.0 mL底物液,于摇床上温育10 min;清洗3次后将膜条放置在结果判定模块中,风干后判断结果。(2)总IgE
现代医药卫生 2023年19期2023-10-26
- 靶向CD30的CAR-T细胞慢病毒转导条件优化研究
on，MOI）、温育密度、转导前活化时间和转导体系高度等［18-20］。本实验旨在优化抗CD30 CAR-T细胞的慢病毒转导参数，以制备出高质量的抗CD30 CAR-T细胞，以期为临床试验所需的大量细胞的制备提供依据，同时也为其他靶点CAR-T细胞的转导优化提供参 考。1 材料和方法1.1 试剂抗CD30 CAR慢病毒和CD30检测蛋白为武汉波睿达生物科技有限公司赠予，人原代T细胞从人外周血中提取，人CD3磁珠和人T cell TransAct购自德国Mi
中国癌症杂志 2023年7期2023-08-17
- 自制糖化血红蛋白质控品及其临床应用
葡萄糖,37 ℃温育48 h,HbA1c达到预期目标浓度(13.0%～16.0%)后将血红蛋白液放入透析袋中,置于0.05 mol/L pH 6.80磷酸盐缓冲液中,4 ℃透析24 h,中间换缓冲液1次。1.3.2不同水平糖化血红蛋白质控品配制 分别配制3个浓度水平质控品,水平1(目标值:5.0%～6.0%),体检健康者血红蛋白混合而成;水平2(目标值:9.0%～10.5%)和水平3(目标值:13.0%～16.0%),分别用水平1与1.3.1过程中生成的高
临床检验杂志 2023年2期2023-05-18
- 浅析口蹄疫阻断ELISA 试验中易出现的问题及其纠正措施
速完成。3.2 温育过程常出现的问题3.2.1 温育板上不加盖 抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育。温育过程在ELISA 检测中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。温育常采用的温度有43 ℃、37 ℃、室温等。37 ℃ 是实验室中常用的温育温度，为避免蒸发，板上应加盖或用塑料贴纸覆盖板孔（FMD-3ABC 和CSFV 试剂盒）。在试验操作过程中往往板上不加盖。3.2.2 反应板叠放 温育过程中，若要求室温温育，则一般
山东畜牧兽医 2022年11期2022-12-31
- 固相阻断ELISA法检测口蹄疫病毒O型抗体的不确定度评定
0542.2.3温育时间的不确定度(B类) 试验中，孵育时间分别为1 h(±2 min)、1 h(±2 min)、15 min(±1 min)，根据均匀统计分布计算，其标准差分别为2 min/31/2=1.1547 min，2 min/31/2=1.1547 min，1 min/31/2=0.5774 min。u(T1)=[1.15472/602+1.15472/602+0.57742/152]1/2=0.0471温育温度的不确定度(B类) 试验共需孵育3
浙江畜牧兽医 2022年5期2022-11-01
- 免疫印迹法检测ENA抗体在诊断自身免疫性疾病中的应用价值
。将检测膜条放入温育槽中，并在每槽中加入1.5 mL 的样本缓冲液，摇摆摇床温育5 min。在装有膜条的测定槽中加入1 mL 的洗涤剂和10 μL的血清，置于37℃的温水中洗涤30 min。取出后连续洗涤4 次，每间隔1 min 需通过滤纸进行吸干处理。之后行第一步温育处理：吸去槽内液体，在温育槽中分别加入1.5 mL 已稀释（1:101）的血清，摇摆摇床温育30 min。清洗：吸去槽内液体，在摇摆摇床上用1.5 mL工作浓度的清洗缓冲液清洗膜条3 次，每
当代医药论丛 2022年16期2022-10-23
- 基于连续监测法快速检测HBsAg*
行混合，37 ℃温育反应17 min(温育1)后，加入175 μL通用液再37 ℃温育反应15 min(温育2)，其cut off值为0.05 IU/mL，即按照该程序所得结果大于0.05 IU/mL时判断为阳性。选取该方法检测HBsAg阳性样本128份，无明显溶血、脂血和胆红素血。其中，87例为0.05～0.5 IU/mL范围内的弱阳性样本，阴性样本157例。1.2.2确定连续监测法检测程序(方案2) (1)确定“温育1”反应时间。取3例阳性样本(浓度范
临床检验杂志 2022年5期2022-07-11
- Vitek MS快速检测产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌的效果评估
血平板，35 ℃温育过夜。取复苏后的新鲜单菌落，用纸片扩散法复核亚胺培南和美罗培南的药敏结果，抑菌圈的判读标准参照2021年CLSI M100-S31文件。1.2.2Vitek MS鉴定 以大肠埃希菌ATCC 8739作为质控菌株，通过Vitek MS对试验菌株进行鉴定。鉴定操作参考Vitek MS标准操作规程。1.2.3碳青霉烯酶基因检测 采用PCR方法对A组和B组菌株进行blaKPC、blaVIM、blaIMP、blaNDM和blaOXA-48碳青霉烯
临床检验杂志 2022年2期2022-03-30
- 肝癌患者化疗栓塞术后早期外周血免疫细胞的变化
，混匀后室温避光温育15 min。再加入0.5 mL溶血素混匀，避光温育10 min后加0.5 mL鞘液上流式细胞仪检测。（3）CD45modCD11b+CD14-CD15-细胞的检测：于流式管中加入单克隆抗体CD11b FITC和CD15 RD1 20 μL，CD14 PC5 和 CD45 PC7 10 μL，加入100 μL血液，混匀后室温避光温育15 min。再加入0.5 mL溶血素裂解红细胞，避光温育10 min后，用鞘液洗涤1次，加0.5 mL鞘
浙江临床医学 2022年1期2022-03-02
- 金属抗菌肽SIF4对大肠杆菌的抑菌机制
30 r/min温育3 h,间隔0.5 h吸取5 mL菌悬液于6 500 r/min离心10 min,取上清液与0.5 mL 1 g/L PNPP溶液混匀,37 ℃暗处理30 min,加入0.2 mL 1 mol/L NaOH终止反应,测定OD405 nm值[11]。1.2.4 胞内K+泄露的测定取对数生长期菌液6 500 r/min离心10 min,用无菌去离子水洗涤菌体3次并重悬(OD600 nm=0.5),加入SIF4使终浓度为1/2 MIC、MIC
食品与发酵工业 2022年1期2022-01-24
- 浅谈影响ELISA试验结果的因素
温度与时间的控制温育是 ELISA至关重要的一步。只有在适宜的温度下抗体和抗原才能充分反应结合，每个试剂盒都有规定的温育温度，一般温育温度是37℃。不同的温育环境对检测结果有影响，在试验开始之前应提前将电热恒温箱开启，并按照试剂说明书上的要求设置好温育温度，以确保能在规定的温度下进行反应，同时不要反复开关恒温箱门，以免温度过低影响酶的反应，从而影响试验结果的准确性。除此之外，温育时间也是影响检测结果的一大因素，在ELISA检测中，要严格按照说明书的要求控制
当代畜禽养殖业 2021年3期2021-12-03
- 41 ℃温浴对高效价冷凝集素样本血常规检测结果的影响
℃)及37 ℃温育不同时间混匀后，以手动进样方式用Sysmex XN- 9000血液分析仪进行血常规分析，另一管41 ℃温育30 min后以同样方式上机检测。血细胞分析仪配套稀释液、溶血剂均为原厂试剂。同时将上述标本分别用预热玻片制作外周血涂片进行瑞氏染色，用显微镜观察红细胞分布情况。为了评估孵育本身对结果的影响，收集门诊和住院患者的血常规标本共74例，排除冷凝集素、溶血、黄疸和乳糜血的干扰，所有标本在室温下检测完成后，置于41 ℃水浴箱水浴30、60
中国医学科学院学报 2021年4期2021-09-08
- 基于新城疫病毒NP蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立
L/孔)，37℃温育2 h，洗涤3次；用1%的脱脂乳稀释待检血清，加至酶标板(100 μL/孔)，37℃温育1 h，洗涤3次；加入1%脱脂乳稀释的HRP标记羊抗鸡IgG，37℃温育1 h，洗涤3次,加底物,加入TMB显色液(100 μL/孔)，避光37℃温育15 min后，加入终止液终止反应；以酶标仪测定各孔的D630值。1.6 NDV NP蛋白间接ELISA反应条件的优化该模块在市场上已有许多成熟的系统，需要从系统技术先进性、可扩展性、需求符合度等方面对
中国兽医学报 2021年3期2021-04-12
- 影响ELISA试验检测结果的环节及试验成功的关键
致。1.4.5 温育: 温育是ELISA试验的一个重要环节，必须按照说明书规定的时间、温度进行温育，实践中常采用的温育温度有室温或37℃，通常抗原抗体在37℃经过规定的温育时间产物的生成达到顶峰。封板温育时若阳性标本蒸发，会出现“花板”现象。1.4.6 洗板: 洗板在ELISA试验中虽算不上一个反应步骤，但却决定着试验的成败，洗板的目的是为了去除反应体系中未结合的酶结合物以及反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。洗板不干净易导致试验结果假阳性，而过度
今日畜牧兽医 2021年11期2021-03-28
- 奇异变形杆菌不同温育时间对呋喃妥因的MIC值影响
在显著不同，不同温育时间也影响着药敏结果的准确判断，因此，筛选最适温育时间才能获得合理准确的药敏判断结果，提供临床合理规范用药。本实验通過不同的温育时间判断呋喃妥因对奇异变形杆菌的不同MIC值。1 材料和方法1.1 实验试剂 湖南天地人肠杆菌细菌生化药敏实验卡 型号 TDR ONE-961.2 实验菌株 临床分离出奇异变形杆菌株及质控大肠埃希菌J01010101-21.3 实验器材 湖南天地人自动加样仪 规格型号 TDR-J100 湖南天地人自动微生物分析
特别健康·下半月 2020年11期2020-12-15
- 动物性食品中氟苯尼考检测的电化学免疫传感器构建
养箱中在37 ℃温育1 h，得到anti-FF/GR-CS/GCE。再移取10 μL的5% BSA溶液，垂直滴涂于anti-FF/GR-CS/GCE表面，37 ℃继续温育1 h，得到BSA/anti-FF/GR-CS/GCE，并用CV法对修饰电极进行表征。将含有FF的待测样液取10 μL垂直滴涂在BSA/anti-FF/GR-CS/GCE表面，37 ℃进行温育。采用三电极体系，以BSA/anti-FF/GR-CS/GCE为工作电极，铂丝电极为辅助电极，饱和
食品科学 2020年20期2020-10-28
- 骨肉瘤中O-GlcNAc糖基转移酶的表达及其对增殖和顺铂敏感性的影响
%的细胞培养箱中温育。经磷酸盐缓冲液（phosphate-buffered saline，PBS）清洗后，用2.5%的胰酶消化细胞，计数后以每孔5×105个细胞接种于6孔板中。实验分为shOGT质粒组和shNC空转质粒组，过表达OGT组及过表达空转质粒组。待细胞贴壁生长至60%～70%，按照LipofectamineTM3000试剂盒说明，分别将OGT沉默及过表达质粒转染至骨肉瘤细胞中，并检测其转染效率。1.4 实时荧光定量聚合酶链反应（real-time
中国癌症杂志 2020年9期2020-10-15
- ANA及ANAs在原发性血小板减少症患者诊断中的应用
待测标本后才开始温育。使用聚苯乙烯加样板；(4)将载片盖在加样板对应的凹槽里，反应即开始。确保每个标本均能够与生物薄片相接触，而标本之间不相互接触。室温(18 ℃～25 ℃)温育30 min；(5)将20 μL荧光标记的抗人球蛋白加入洁净加样板的每个反应区。完全加完所有的二抗后，方可继续温育。从PBS-Tween清洗缓冲液中取出一张载5 s内用吸水纸擦一下背面和边缘后，立即将载片覆有生物薄片的一面朝下，盖在加样板的凹槽里。注意避免阳光直射载片。室温(18
锦州医科大学学报 2020年4期2020-09-10
- ELISA 法检测家禽活疫苗中禽白血病病毒污染的测量不确定度评估
是移液器加样量、温育时间、温育温度、酶标仪测量。1.2.3 测量不确定评定1.2.3.1 测量样品重复性引入的不确定度评定利用ALV ELISA 检测试剂盒检测各样品的OD650nm值，每批疫苗的连续3 代细胞培养物P1、P2、P3样品分别重复测定6 次[5]，按照文献[3]计算标准不确定度相对标准不确定度。其中，为样品平均值，Sxi为样品重复检测的标准差，xi为每次重复的测量值，n为重复次数。1.2.3.2 移液器加样引入的不确定度评定 移液器加样产生的
中国动物检疫 2020年9期2020-09-07
- PFKFB3在胃癌中的表达及对胃癌细胞生长和凋亡的影响研究
的抗体进行4 ℃温育过夜，经洗膜缓冲液（TRIS-buffered saline Tween，TBST）洗膜3次，根据一抗的来源种属，与对应二抗室温温育1～2 h，再经TBST洗膜3次，将电化学发光（electrochemical luminescence，ECL）试剂滴加于条带上，通过凝胶成像分析仪分析胃癌组织及细胞中PFKFB3的表达，每次实验重复3次，取平均值。1.5 免疫组织化学检测新鲜的胃癌及癌旁组织立即置于4%中性多聚甲醛固定，经石蜡包埋后切成
中国癌症杂志 2020年4期2020-05-19
- 酶联免疫试验两步法检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响因素研究
，混合均匀，进行温育，并且封板后放置，温度为(37±1.1)℃，温育时间为(60±1.3) min[5]；进行加酶，除空白孔之外每个孔中加入酶标准试剂50 μL，也需要混合均匀；温育—封板后放置，温度为(37±1.1)℃，温育时间为(30±1.4) min[3]；洗板—利用洗板机进行洗涤，不少于5遍，并将其扣干；颜色显露时间的变化—在每个孔中加入显色剂A、B液为50 μL，混合均匀，温度为(37±1.1)℃，颜色显露的时间为(30±1.4) min；进行最
山西卫生健康职业学院学报 2020年5期2020-03-23
- 环状RNA hsa_circ_0005320在三阴性乳腺癌中的表达及其对细胞增殖的影响
胃蛋白酶37 ℃温育30 min，并用4%多聚甲醛固定20 min，然后加入杂交液55 ℃温育2 h；将探针与杂交液按1∶200的比例稀释，于PCR仪上85 ℃ 2 min变性，37 ℃2 min平衡后加入探针37℃避光温育过夜；加入DAPI复染20 min，抗荧光淬灭剂封片，置于荧光显微镜下拍照。hsa_circ_0005320探针序列为5'-AGATCTTTTCAAGGCCTCCTGGCT-3'。1.2.5 EdU实验检测细胞增殖接种至24孔板的各组细
中国癌症杂志 2019年11期2019-12-13
- 水产品中孔雀石绿BA-ELISA检测方法的建立及应用
作浓度、封闭液、温育时间、盐离子强度及pH等参数。其中，包被原和抗体的最佳工作浓度采用棋盘法优化，封闭液组成、温育时间、助溶剂浓度及盐离子强度等实验条件通过单因素实验优化。用CBS将包被原稀释至5个浓度梯度，分别为1∶500、1∶1 000、1∶2 000、1∶4 000及1∶8 000，用PBS将抗体稀释至7个浓度梯度，分别为1∶500、1∶1 000、1∶2 000、1∶4 000、1∶8 000、1∶16 000及1∶32 000。在封闭液优化实验中
中国渔业质量与标准 2019年4期2019-09-16
- 自身抗体对乙型肝炎病毒相关性肾炎的诊断和预测价值
的一面接触，室温温育30 min；(2)用PBS吐温缓冲液流水冲洗载片，立即将其浸入装有PBS吐温缓冲液的烧杯中浸泡至少5 min；(3)滴加20 μL FITC标记的抗人IgG至洁净的加样板，将浸泡后的载片盖在加样板上与抗人IgG接触，室温温育30 min；(4)重复步骤(2)；(5)滴加约10 μL封片介质至盖玻片，将浸泡后的载片盖在盖玻片上，显微镜下观察荧光模型。免疫印迹法检测血清自身抗体谱，包括nRNP、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl
国际检验医学杂志 2019年9期2019-05-17
- 肺隐球菌病标本在六胺银染色中的最佳温育时间
采用水温箱60℃温育40～60min，作者实践发现该温育条件存在过染现象。为了寻求一种染色效果好、操作简便、染色时间短、污染少、染色方法可重复性高的六胺银染色方法，我们对最佳孵育时间进行了摸索。资料与方法1 标本收集厦门大学附属第一医院病理科2017年1月—2017年12月确诊的30例肺隐球菌感染病例，每例病例选取最具代表意义的一个蜡块连续切片3张，厚度为4μm，不同蜡块为区组因素，将每个蜡块切取的3张切片简单随机化分为3组，每组1张，通过区组随机化将90
中国组织化学与细胞化学杂志 2019年1期2019-04-22
- 820例抗核抗体阳性临床标本检测结果回顾性分析
抗原基质于室温下温育反应30 min，使用磷酸盐缓冲液冲洗浸泡至少5 min后滴加荧光标记的抗体IgG并避光温育30 min，冲洗浸泡至少5 min后吸干边缘水分，放到滴加甘油的盖玻片上进行封片。使用荧光显微镜进行结果判读。1.2.2 ELISA/IIF检测抗dsDNA 均采用欧蒙相应方法的抗双链DNA抗体IgG检测试剂盒。标本使用ELISA进行筛查，标本1:201倍稀释后加100后加到相应微孔，同时加入阴阳性对照及校准品，室温温育30 min后使用稀释后
当代医学 2018年31期2018-11-20
- 应用ELISA法检测HPRRS抗体的几个影响因素分析
果的因素有很多，温育时间、温度、洗板次数等是其中的重要环节[1]。本文以检测高致病性猪蓝耳病抗体为例，就不同温育时间、温度、洗板次数，对比、分析可能引起ELISA试验数据不成立（即试验失败）的原因及影响。1 材料与方法1.1 样本与试剂 样本选取经过高致病性猪蓝耳病疫苗免疫后呈现不同抗体效价的猪血清12份。试剂为猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒（法国LSI）。1.2 仪器 生化培养箱、微量移液器、酶标仪。1.3 方法 将经过高致病性猪蓝耳病疫苗免疫后呈现不
福建畜牧兽医 2018年3期2018-06-14
- 电化学DNA传感器制备及用于花椰菜花叶病毒35S启动子快速检测
合后在37 ℃下温育16 h，随后13 000 r/min下离心水洗3次，用PBS缓冲液（pH 7.4）定容至1 mL，得到Thi-AuNPs-cDNA纳米复合物[15]。1.2.3 AuNPs-HRP-SA制备。取1 mL制备好的AuNPs溶液于离心管中，10 000 r/min下离心10 min，弃去上清液，用PBS（pH 7.4）缓冲液重新定容至300 μL，完成AuNPs溶液的浓缩，加入20 μL SA-HRP（0.1 mg/mL）溶液，4 ℃振荡
安徽农业科学 2018年17期2018-05-14
- 烯酰吗啉对土壤呼吸及微生物多样性的影响
表征)时，选择的温育时间分别为96，120，144和168 h[17]。故本研究选择以上温育时间进行分析。1)McIntosh指数(U)[18]。其计算公式为：式中：ni是第i孔的相对吸光值，Ci为第i孔在590 nm的吸光值，R为对照孔在590 nm的吸光值。2)Simpson优势度指数(D)[19]。其计算公式为：式中：ni是第i孔的相对吸光值，N是相对吸光值总和，Ci为第i孔在590 nm的吸光值，R为对照孔在590 nm的吸光值。3)Shannon
西北农林科技大学学报（自然科学版） 2018年2期2018-05-08
- 一种快速提取土壤微生物DNA的方法
的SDS裂解细胞温育时间、PEG沉淀DNA时间、CTAB溶解DNA沉淀温育时间、异丙醇沉淀DNA放置时间、SDS裂解细胞离心条件以及异硫氰酸胍试剂的加入与否等实验条件进行了优化，旨在建立一种经济、快速、简单的土壤微生物DNA提取方法。1 材料与方法1.1 土壤样品土壤样品分为2种：一种采自潜江某油田作业油井及废弃老井附近，共采集7个土样，分别记为：1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#；另一种是采自长江大学西校区农学院实验基地：麦田、草地、大豆田、玉米田
长江大学学报(自科版) 2018年2期2018-02-08
- 浅谈如何提高EELLIISSAA测定的准确性
叉污染。3.2 温育温育是ELISA测定中的一个关键环节，只有在一定适宜的温度和与之相对应的特定时间，液相中的抗原（抗体）才能与固相载体上的特异抗体（抗原）充分结合。不同试剂盒有不同的温育温度和时间的要求，应严格按试剂盒说明操作，不能人为改变。此外，微孔板温育时要加贴封片，这样可以防止孔内液体蒸发或水珠等杂质滴入孔内影响检测结果。3.3 洗板洗板是将温育过程中液相非特异性成分与反应中固相载体的抗原（抗体）结合产生的抗原抗体清除出去，从而保证ELISA测定的
粮油与饲料科技 2017年6期2018-01-09
- 凝沉型及交联型淀粉微球的水包水乳液法制备及理化特性比较研究
包水乳液法在不同温育温度下制备了凝沉型和交联型淀粉微球，并对微球的产率和理化特性进行比较研究。随着温育温度的提高，凝沉型淀粉微球的产率降低，但交联型淀粉微球的产率提高。温育温度为6℃时，凝沉型淀粉微球产率最高，达到79.8%。交联型淀粉微球的溶胀率和亚甲基蓝吸附量明显大于凝沉型淀粉微球。扫描电镜照片显示，凝沉型和交联型淀粉微球基本均为球形，但凝沉型淀粉微球表面较粗糙且有多个小凹坑，而交联型淀粉微球表面较致密。X射线衍射图谱显示凝沉型淀粉微球为部分结晶结构，
河南工业大学学报（自然科学版） 2017年3期2017-07-18
- 如何提高ELISA测定的准确性
防交叉污染。2.温育。温育是ELISA测定中的一个关键环节，只有在一定适宜的温度和与之相对应的特定时间，液相中的抗原（抗体）才能与固相载体上的特异抗体（抗原）充分结合。不同试剂盒有不同的温育温度和时间的要求，应严格按试剂盒说明操作，不能人为改变。此外，微孔板温育时要加贴封片，这样可以防止孔内液体蒸发或水珠等杂质滴入孔内影响检测结果。3.洗板。洗板是将温育过程中液相非特异性成分与反应中固相载体的抗原（抗体）结合产生的抗原抗体清除出去，从而保证ELISA测定的
兽医导刊 2017年17期2017-04-04
- 卡式配血法常见原因分析及应对措施
7.27%）；⑤温育时间缩短，4例（36.36%）。结论 操作不标准是导致卡式配血法出现假阳性结果的主要原因，实验室应建立标准化规定，并建立复检程序，以提高试验结果的准确率。卡式配血法；假阳性；常见原因；应对措施卡式配血法在1988年被发明出来，用于鉴定血型与交叉配血，在卡式配血法应用到临床领域后，抗人球蛋白应用输血检测得以实现，这种方法有效克服了其他传统方法的既有缺陷，令试验检测出现了质的飞跃，在输血发展史上，卡式配血法可谓是一座重要的里程碑[1]。但是
临床医药文献杂志(电子版) 2017年33期2017-03-08
- 基于STM32F103的BV自动检测系统设计
工操作完成，采样温育后由人工读取结果，不同操作员读取数据常存在差异[2-3].本文设计的自动检测系统可自动完成温育、结果读取和记录工作，简化了操作流程，避免了人工判读带来的差异，也为其他采用类似方法的试剂检测提供了很好的自动检测系统设计参考.1 系统结构图本文设计的系统结构图如图 1所示，以STM32F103为处理器[4]，用户通过串口液晶屏的触摸功能输入指令，由主控芯片控制温育平台的加热进行恒温温育，温育结束后启动光电检测模块由硅光电池将样本颜色信息转化
赤峰学院学报·自然科学版 2017年1期2017-03-03
- 兽医实验室酶联免疫吸附试验操作要点
液方法。3.2 温育温育是讲抗原与抗体混合，在一定条件下进行的抗原抗体反应。实验室一般在4℃、37℃以及43℃的情况下，开展ELISA反应的温育操作。温育过程中，除了确保反应温度及时间，同时还要注意反应样品在温育温度下要快速达到平衡，一次不能增加太多反应板叠块在培养箱中。并根据ELISA规定的要求，室温进行温育反应，严格控制温度，确保试验结果的精确度。试验中温育的温度与时间要严格控制，确保试验精确性，温育避免发生有蒸发的情况，并采用的塑料贴纸或者是保鲜膜将
中国畜牧兽医文摘 2017年9期2017-01-16
- 浅析影响口蹄疫O型液相阻断ELISA实验的因素
板，震荡，37℃温育90分钟；移板，封板，37℃温育60分钟；洗板，加豚鼠抗体工作液，37℃温育30分钟；洗板，加兔抗豚鼠IgG-HRp工作液，37℃温育30分钟；洗板，加底物溶液，37℃温育15分钟，再加终止液终止反应，读取D490nm。2.3 结果判定2.3.1 试验成立标准：病毒抗原对照D490nm值应该在1.5±0.5范围内。阳性对照抗体效价应在1∶1024±1滴度以内，阴性对照血清抗体效价应＜1∶8。2.3.2 抗体效价的判定：被检血清D490n
中兽医学杂志 2017年1期2017-01-15
- 癌抗原15-3酶促化学发光免疫分析方法的建立
/孔，置于37℃温育。2h后，甩弃封闭液，将包被板自然晾干。3.2 辣根过氧化物酶标记抗体的制备 参照郭春祥等［5］简易高碘酸钠法制备辣根过氧化物酶（HRP）标记的 CA15-3抗体。将0.5 mg HRP溶于0.25 mL蒸馏水中，向其中缓慢滴加100 μL NaIO4（0.1mol/L）溶液，4℃搅拌20min后在HAc-NaAc缓冲液（1 mmol/L，pH 4.4）中透析过夜。次日，将碳酸缓冲液（0.0 5 mol/L，pH 9.6）透析的 CA1
标记免疫分析与临床 2016年11期2016-12-10
- 不同样品前处理对转基因棉Bt蛋白含量测定的影响
品前处理方式以及温育时间、显色时间等影响因子进行分析。[结果]自制抗体法较试剂盒更为灵敏，其同一时期同一组织的Bt蛋白含量显著高于试剂盒，但不同方法对Bt蛋白含量的检测结果在时空表达变化的趋势上基本一致。样品在液氮研磨后抽提5或8 h，对检测结果影响较小，差异未达显著水平；匀浆机研磨过滤后离心与否，对检测结果影响较小。从样品前处理方式看，匀浆机较液氮研磨对样品组织蛋白的萃取效率更高，其检测结果显著高于液氮研磨处理的样品，差异达显著水平。温育时间和显色时间的
安徽农业科学 2016年8期2016-06-15
- ELISA试验中常出现的问题及解决方法
0 min。3.温育时间不足或培养箱温度不足37℃，在ELISA试验中一定要注意温育时间和温度的重要性，在温育的过程中尽量不要打开温箱，僻免温度忽上忽下。温育时间不足，温度过低都会影响显色。4.严格按照试剂说明书要求的洗涤方法洗涤，洗涤时加洗涤液不能冲击过大，浸泡时间过长，要按照说明书上要求的洗涤次数洗涤。5.加样不足，加样时要按照加样量调整好移液器的刻度，使用配套，内壁光滑清洁的吸头，吸头不能交叉使用，同时要对移液器进行校准，僻免加样不足使显色不足。6.
兽医导刊 2016年15期2016-04-06
- 酶联免疫法做抗体检测时应注意的事项
现误差。2.4在温育反应时，温育30 min误差应控制在±2 min以内，温育10 min误差应控制在±1 min以内，避免因反应时间缩短或延长而造成整体显色降低或升高。2.5每次洗板时，不管是手洗还是洗板机洗，洗完后都要把反应板拍干。2.6每次试验温育反应所用的封板膜不能重复使用，试剂瓶盖也不能交叉使用，以免造成交叉污染，从而影响试验数据的准确性。2.7试验中所用的终止液属于强腐蚀性物质，一定要做好个人防护，避免其掉到身体或衣物上。2.8在使用酶标仪前，
现代农村科技 2016年2期2016-03-29
- 超声波温育处理提取水稻种子DNA方法探讨
65℃恒温下常规温育，进行样品前处理，作者曾研究过样品颗粒细度与CTAB细胞裂解缓冲液温育时间对DNA提取与转基因成分荧光PCR检测灵敏度的影响[11－13].超声波振荡处理能使样品与CTAB细胞裂解缓冲液充分作用，能提高生物DNA提取的产量与纯度[14－15]，但在超声波环境中以CTAB裂解缓冲液65℃温育提取水稻种子DNA，迄今未见报道.为提高水稻种子DNA提取效率，在保证检测结果准确的前提下，缩短DNA提取时间，本研究以3种不同颗粒细度的水稻种子粉末
福建农林大学学报（自然科学版） 2015年5期2015-12-24
- 水稻种子样品前处理对转基因成分荧光PCR检测的影响
AB)裂解缓冲液温育时间等进行分析，以期筛选出优化的前处理措施组合，提高稻谷转基因成分实时荧光PCR检测结果的准确性，为建立水稻种子转基因精准检测方法提供依据.1 材料与方法1.1 供试材料非转基因水稻“汕优63”种子与转基因水稻科丰6号种子(转基因稻谷质量分数为100%)由福建省农业科学院提供，科丰6号转基因大米阳性参照物质(转基因大米质量分数为0.01%)由中国检验检疫科学研究院提供.1.2 试剂TE缓冲液(pH 8.0)、超纯水、蛋白酶K、RNA分解
福建农林大学学报（自然科学版） 2015年1期2015-12-24
- 延长不同实验步骤温育时间对HBsAg酶免结果的影响
的因素较多，其中温育时间是影响测定结果的最关键因素，本研究对加酶前、加酶后、显色等步骤的温育时间进行对比分析，旨在探讨ELISA 法检测不同强弱程度HBsAg 阳性标本的部分影响因素。1 材料与方法1.1 材料 阳性对照、阴性对照(试剂盒自带)，0.5 IU/ml质控血清(康彻思坦生物有限公司提供)，HBsAg 阳性标本36 份，其中HBsAg 弱阳性标本12 份、HBsAg 中阳性标本12 份、HBsAg 强阳性标本12份，HBsAg 阴性标本32 份(
河南医学研究 2015年5期2015-11-18
- 耐热乳酸菌的筛选及其β-半乳糖苷酶性质分析
乳糖苷酶在55℃温育1 h，仍保持51.2%的酶活力。分析菌株MF1567的β-半乳糖苷酶氨基酸序列和蛋白质结构，发现该菌株中β-半乳糖苷酶LacZ存在22个氨基酸替代，其二级结构α-螺旋的比例较高（26.5%）。结果显示，蛋白质一级和二级结构的改变可能是该酶具有较好耐热性的原因。乳酸菌，β-半乳糖苷酶，耐热，氨基酸序列乳糖是乳及乳制品中特有的糖类，是人体正常代谢和生长发育的能量来源之一。人体摄入乳糖后，存在于小肠粘膜绒毛膜表面的β-半乳糖苷酶（betag
食品工业科技 2015年18期2015-11-04
- 不同温育条件对酶联免疫吸附试验法测定乙型肝炎表面抗原结果的影响研究
准确，以及温度及温育、洗板、显色时间及温度等［1］。其中，不同温度及温育是实际操作中影响结果的重要因素之一。我们对不同温度及温育条件下ELISA法测定HbsAg 的阳性结果进行系统研究，现报告如下。1 资料与方法1.1 一般资料:选择2014 年1 月～2014 年5 月我院住院患者HbsAg 阳性标本60 份，分离血清后置于-20℃冰箱中保存备用。1.2 方法:采用DR-200BS 酶标仪、DRW-320 洗板机、HHW21-600BS 型数显恒温水浴锅
吉林医学 2015年11期2015-05-15
- 凉州区规模场猪繁殖障碍性疫病疫苗免疫效果监测分析
被板中，经37℃温育半小时，洗板后加入酶标二抗，37℃温育半小时，洗板加入底物，37℃温育10分钟后，加入终止液，于450nm波长测定OD值。在阴阳性对照成立的情况下，按公式S/P=样品孔A值/阳性对照孔平均A值计算，S/P≥0.18为阳性，S/P＜0.15为阴性，0.15≤S/P＜0.18为可疑。1.2.5猪伪狂犬病gE抗体检测试验按猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书检测：待检血清1:100稀释，加入抗原包被板中，经37℃温育半小
中兽医学杂志 2015年7期2015-04-20
- 影响米粉干转基因成分荧光PCR检测的若干因素分析
00目的颗粒，对温育时间要求一般是1h(如大豆)或以上(如大米等)，由于这些条件往往无法稳定满足对深加工产品转基因成分检测的准确性。为此，本文针对影响深加工米制品转基因成分检测的实时荧光PCR［14-16］结果准确性的各种因素进行研究，建立了规范的技术操作程序，为保障我国进出口米制品安全提供了科学检测依据。1 材料与方法1.1 材料与仪器非转基因大米与米制品米粉干(线状)为企业送检留样，科丰6号转基因大米样品(含CaMV35S、Nos、Cry1Ab、Ub-
食品工业科技 2014年21期2014-12-16
- 如何正确进行ELISA操作
试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。现分述如下。1 临床标本的收集和保存用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清(浆)，有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注意收集
当代临床医刊 2014年6期2014-08-15
- 296名变态反应性皮肤病患儿血清过敏原检测分析
ml通用缓冲液的温育槽中；②样本温育：吸去液体，在温育槽内加入1.0 ml未稀释样本，60 min后吸去液体，每次用1 ml通用缓冲液清洗3次，每次5 min；③酶结合物温育：吸去液体，在温育槽内加入1.0 ml酶结合物，在摇摆床上用1.0 ml通用缓冲液清洗膜条3次，酶促5 min；④底物温育：吸去液体，在温育槽内加入1.0 ml色原/底物液，于摇摆床上室温温育10 min；⑤终止反应：吸去液体，用蒸馏水冲洗；⑥判断结果：将检测膜条放置在结果判定模板中，
中国优生优育 2014年4期2014-08-03
- 微型丝网印刷电极快速检测克仑特罗的方法
L/孔，37 ℃温育2.0 h[18-19]。1.3.4 间接竞争免疫反应将克仑特罗抗原标准品原液倍比稀释后加入酶标板孔内，加入量为50 μL/孔；再将1/8 000倍稀释的克仑特罗单克隆抗体加入到酶标板孔内（50 μL/孔），混匀，37 ℃温育。1.3.5 抗体与酶标二抗反应使用洗板机将含抗原抗体反应混合物的酶标板清洗3 次，拍干后加入1/10 000倍稀释的HRP标记的羊抗鼠酶标二抗（100 μL/孔），混匀，37 ℃温育。1.3.6 酶促反应及酶反应
食品科学 2014年8期2014-03-09
- 荧光聚合酶链式反应检测白粿干模拟转基因样品前处理优化
化铵裂解缓冲液中温育时间等因素进行优化。结果表明：提取的DNA量在样品颗粒细度与十六烷基三甲基溴化铵缓冲液温育时间的9种处理组合间都有极显著差异，其中最优条件为样品颗粒细度＞100目、十六烷基三甲基溴化铵缓冲液温育时间＞8 h（过夜）。采用最优前处理组合，样品的主要转基因成分检出限从公认的转基因含量0.01%（m/m）降到0.001%（m/m），检测灵敏度提高10倍，有效提高了米制品转基因成分检测结果的准确性。米制品（白粿干）；转基因成分；实时荧光聚合酶链
食品科学 2014年2期2014-01-17
- The Uptake and Membrane Transport of Cesium in Human Erythrocytes
胞外Cs+浓度，温育时间、温育温度、介质pH值对人红细胞摄取Cs+过程的影响。选用不同离子通道或离子载体的特异性抑制剂进一步探讨Cs+的跨膜途径和机理。结果显示，各实验参数对人红细胞摄取Cs+均有一定的促进作用。Cs+主要借助Na+/K+-泵的主动运输方式跨膜；少量的Cs+能“漏入”细胞，微量的Cs+可以模拟Na+/Li+-反向协同运输的方式跨膜；在允许HCO3-存在的pH环境下，少量Cs+以Cl-/CsCO3-交换的形式通过膜上带3蛋白进入人红细胞；Ca
无机化学学报 2013年12期2013-09-29
- 不同放置水浴时间对人血浆甲胎蛋白(AFP)放射免疫分析方法的影响分析
观察不同放置水溶温育时间对放免检测甲胎蛋白(AFP)结果的影响分析。方法我们通过80例患者，每个分别用两种相同采血管同时进行采血，用放免方法进行检测，得到两组数据，进行统计分析。结果经过统计学分析，两种方法差异无统计学意义。结论 放免分析中两种不同放置水浴时间对人血浆甲胎蛋白(AFP)检测结果无影响。放置时间;甲胎蛋白;放免分析甲胎蛋白(AFP)由胚胎干细胞合成，它是血清球蛋白，在胎儿的发育中，由卵黄囊和胎儿肝产生，在妊娠13周时，胎儿血液中的AFP达到最
中国现代药物应用 2013年8期2013-01-25
- IGF-1R抑制剂AG1024对头颈鳞癌FaDu细胞放射敏感性的影响
L AG1024温育处理细胞24 h后，6 MV X线分别照射0、2、4、6、8、10 Gy，1 h后按不同浓度梯度接种于6 cm培养皿中培养2周。细胞集落经4%多聚甲醛溶液固定以及0.1%结晶紫染色后，显微镜下观察细胞集落形成情况。以含>50个细胞的集落计为1个存活克隆，计数各组细胞的克隆数。应用Sigma plot多靶单击模型拟和存活曲线。1.4 AnnexinⅤ-FITC/PI 双标记法分析细胞凋亡取对数生长期FaDu细胞接种于6孔板。培养24 h后
中国癌症杂志 2012年7期2012-05-30
- 渗透压冲击法提取大肠杆菌周质中的人生长激素
r⋅min－1，温育20 min，4℃ 14 000 ×g离心20 min，弃高渗液，向菌泥中加入60 mL的4℃ RO水，轻轻搅匀，冰浴20 min，4℃14 000×g离心20 min，得60 mL上清液即为周质蛋白，试验重复两次.蛋白含量测定:采用Bradford法［2］.以对照品溶液浓度与其相对应的吸光度计算线性回归方程.另精密量取待测样品溶液适量，同法测定，从线性回归方程计算待测样品溶液中的蛋白浓度，并乘以稀释倍数.SDS－PAGE分析:取周质蛋
药学研究 2012年7期2012-02-02
- 可再生使用的磁性纳米修饰C反应蛋白电流型免疫传感器*
的BSA中37℃温育反应1 h，以封闭GMPs剩余的活性位点，防止其对CRP抗原产生非特异性吸附。将制备的HRP-anti-CRP/GMPs纳米探针分散在20 mL pH 6.5 PBS 中，4 ℃储存，备用。1.5 免疫传感器的制备将SPCE表面依次用无水乙醇和蒸馏水冲洗几次，晾干备用，取 5 μL上述制备的 MCNTs-Thi-Nafion溶液滴在SPCE工作电极表面，红外灯下晾干，作为基底电极。再取5 μL浓度为0.83 mg/mL的磁性纳米探针悬浮
传感技术学报 2011年10期2011-10-20
- 青海省玉树地区牛病毒性腹泻-黏膜病血清学调查
生物素标记的抗体温育，洗涤后，加入亲和素标记过的HRP，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物温育，最后加入终止液，在450 nm波长处测定各孔OD值。2 结果对6个县的571份牛血清进行了抗体水平检测。检测出阳性43份，阳性率7.5%，结果见表1。3 讨论3.1 本次检测结果与2006年检测结果相比较（2006年在玉树共检测30份血清，未检出阳性数），表明牛病毒性黏膜病在我省牛群中的感染率和感染范围均在不断扩大，对养牛业的发展构成了潜在的威
中国动物检疫 2011年10期2011-08-16
- 对186例流产孕妇及其配偶血清弓形虫抗体检测分析
l封闭，置37℃温育1 h，同前法洗涤后加入稀释为1∶100的血清，每孔500 ml，置37℃温育1 h，同前法洗涤后加入稀释为1∶1 000稀释的羊抗人IgG辣根过氧化物酶标记物，每孔500 ml，置37℃温育1 h，洗涤后加入新鲜配制的底物液，每孔 0.1 ml，置室温 0.5 h 后，加 2 mol/L H2SO4终止反应，于30 min内测定A值，所用波长450 nm。①目测:根据临界孔显色来进行判断样本孔显色比临界孔深判为阳性，否则判为阴性;②读
山西医科大学学报 2010年12期2010-11-15