杂交瘤
- 血清4型禽腺病毒广西分离株单克隆抗体的制备及鉴定
洗涤3次;加入杂交瘤细胞培养上清、阴性对照(其它对照病毒的阳性血清)、空白对照(PBS)、阳性对照(FAdV-4阳性血清)作为一抗,100 μL/孔,37 ℃孵育1 h;用PBST(含0.05%吐温的PBS)洗涤3次;加入HRP 标记的山羊抗小鼠IgG抗体作为二抗,100 μL/孔,37 ℃孵育1 h;用PBST(含0.05%吐温的PBS)洗涤3次,加入显色液显色10 min,每孔加入50 μL终止液(含2 mol/L硫酸)终止。在波长450 nm下测吸光
中国兽药杂志 2023年10期2023-10-25
- 3株鸭疫里默氏杆菌OmpA单克隆抗体的制备及特性鉴定
一。本研究通过杂交瘤技术，成功制备3株能够稳定分泌抗RA OmpA单克隆抗体的杂交瘤细胞株，为进一步研制RA快速诊断试剂盒奠定基础。1 材料和方法1.1 菌株、实验动物及细胞株 RA血清1型分离株CH3、RA血清2型分离株NJ3、RA血清10型分离株HXb2[8]，大肠杆菌血清型O78菌株E937，大肠杆菌血清型O2菌株DE719，大肠杆菌血清型O1菌株APEC01[9]，均为本实验室保存菌株。鸡白痢菌株CVCC519，禽伤寒菌株CVCC 3384，巴氏杆
中国动物传染病学报 2022年4期2022-09-23
- 副流感病毒5型SH蛋白单克隆抗体的制备
，共筛选到3株杂交瘤细胞，均可识别PIV5毒株，为外源性PIV5污染检测用免疫荧光试剂奠定了基础。1 材料与方法1.1 细胞、毒株、重组质粒、实验动物 Vero细胞、PIV5/01株，均由中国兽医药品监察所保存；pET43a-SH重组质粒，由中国兽医药品监察所构建及鉴定；8周龄Balb/c雌性小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。1.2 主要试剂 表达菌株BL21(DE3)plys购自北京全式金公司；SDS-PAGE凝胶制备试剂盒购自碧云天生物技术有
中国兽药杂志 2021年11期2021-12-31
- 一株针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体制备及鉴定
10 d后收集杂交瘤细胞上清采用间接免疫荧光方法(IFA)进行检测，具体方法如下：将处于对数生长期的Marc-145细胞消化后分散至96孔细胞培养板，长成良好单层后(24 h左右)加入PRRSV 46D，每孔100 μL，放置于37 ℃、5% CO2培养箱内继续培养。当细胞出现30%～50%病变时，加入预冷的无水乙醇4 ℃固定细胞。每孔加入50 μL杂交瘤细胞上清，37 ℃作用1 h，PBS洗3次，加入1∶100稀释的FITC标记的山羊抗小鼠IgG，37
中国兽药杂志 2021年10期2021-11-25
- 犬冠状病毒M和N蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定
]。本研究通过杂交瘤技术获得CCV M、N蛋白单抗，并对其生物学特性进行分析鉴定，为CCV诊断试剂的开发奠定基础。1 材料与方法1.1 病毒CCV株(JS1706，JS1712株)，由扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室分离、鉴定；CDV、CAV-2和CPV-2a/2b/2c毒种，由扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室分离、保存。相关病毒毒株来源、培养细胞和用途见表1。表1 病毒毒株、细胞与用途1.2 细胞A-72细胞(ATCC，CRL-1542)
中国兽医学报 2021年8期2021-09-10
- 构建物理模型击破单克隆抗体的制备过程教学难点
一次筛选得到的杂交瘤细胞不止一种、HAT培养基的筛选机理、克隆化培养和抗体检测是怎么操作的……《普通高中生物学课程标准（2017年版）》（以下简称《课程标准》）提出“教学过程要重实践”的基本理念，认为学生是学习的主体，教师要积极创设一些探究性活动，帮助学生在实践中加深对知识的理解，提升应用知识的能力……为此，笔者引导学生以橡皮泥为材料动手制作物理模型，借助模型模拟单克隆抗体的制备过程，从而将抽象的知识转变为形象的知识，加深学生的理解，为未来的应用做好准备。
中学生物学 2021年2期2021-04-30
- 解析单克隆抗体在高考中的考查方式
斯坦和科勒应用杂交瘤细胞在体外无限增殖和浆细胞产生抗体的功能，获得了只针对单一抗原决定基的抗体，即“单克隆抗体”。单抗一问世，便被誉为“免疫学中的技术革命”。1984年因为单克隆抗体的杰出贡献，两人获得了诺贝尔生理学和医学奖。在新冠肺炎世界范围内流行的背景下，关注人类生命健康，寻求对抗病毒的有效方法会在高考中有更多体现。下面以2020年全国卷Ⅰ中的相关试题为例，结合2014年全国卷中相关考点，了解高考试题的考查要点和考查形式。一、分析高考真题，梳理高考考点
考试与招生 2021年4期2021-04-16
- 与“精准医学”的一次邂逅
——从利用杂交瘤技术制备单抗说起
瘤细胞融合获得杂交瘤细胞，利用杂交瘤细胞大量制备单克隆抗体。单克隆抗体的横空出世，使精准医学在癌症的精准治疗方面，实现了质的飞跃。2 走进“精准医学”的课堂不同于放疗与化疗，抗体是癌症治疗中的完美“武器”。利用抗体与癌细胞表面抗原类物质发生特异性识别的原理，实现对癌细胞的精准定位，再结合其他化学药物将癌细胞置于死地，此举对正常细胞的伤害极大减少。2.1 创新思维开辟新方向 早在19世纪后期，科学家发现给小鼠多次注射特定抗原，会刺激小鼠产生免疫反应，从小鼠的
生物学通报 2020年2期2020-11-09
- 抗犬细小病毒单克隆抗体的制备与鉴定
、特异性较好的杂交瘤细胞株，为犬细小病毒病的诊断、治疗及后续研究奠定了基础。1 材料与方法1.1 主要材料毒株CPV-YN由本实验室分离鉴定，pCI-NS和pCI-VP1表达质粒由本实验室构建，SP2/0骨髓瘤细胞和F81细胞由本实验室保存；DMEM培养基、完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、HAT、HT、50% PEG、山羊抗小鼠IgG-FITC和辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(IgG-HRP)均购自Sigma公司；CPV单克隆抗体购自北京金百奥生物技术有
畜牧与兽医 2020年10期2020-09-27
- 细胞表面荧光免疫吸附法在猪流行性腹泻病毒N 蛋白单克隆抗体杂交瘤筛选中的应用
和防控[3]。杂交瘤细胞的筛选技术是制备良好MAb 的关键。因此，国内外研究人员对MAb 的制备技术和工艺不断地完善和发展[4-5]。任瑞敏等采用半固体培养基，高通量筛选分泌目的MAb 的杂交瘤细胞，极大缩短其筛选的时间，但该方法存在无差别性选择，后续MAb 验证的工作量大[6]。Dippong 等通过流式细胞分选技术，挑取单个抗原特异性标记的杂交瘤细胞，提高了阳性克隆的筛选效率，但最终MAb 效价的评估还需借助ELISA 等方法完成[7]。近日Li 等开
中国预防兽医学报 2020年3期2020-07-01
- 美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白中和活性单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定
FA)筛选阳性杂交瘤细胞。将PRRSV各结构蛋白质粒分别转染293T细胞，将收获的表达PRRSV各结构蛋白的细胞作为检测抗原，参照上述IFA方法鉴定阳性杂交瘤细胞与其反应的结构蛋白。将分泌MAb的杂交瘤细胞体外连续传10代并冻存于液氮中，每代杂交瘤细胞以及冻存6个月的阳性杂交瘤细胞均采用上述IFA检测杂交瘤细胞分泌MAb的稳定性。根据文献[5]制备小鼠腹水冻存于-70℃。制备的MAb按照试剂盒说明鉴定其亚类。1.3 MAb识别的抗原表位的鉴定及序列分析 已
中国预防兽医学报 2019年6期2019-07-30
- 人突触小体相关蛋白25单克隆抗体的制备及初步鉴定
免疫小鼠，利用杂交瘤技术制备鼠单抗。经过2轮筛选获得12株阳性杂交瘤细胞株，经鉴定选择14号杂交瘤细胞株进行抗体的大量制备，纯化后获得高纯度的单克隆抗体。1 材料与方法1.1 材料6～8周龄BALB/c小鼠购自军事医学研究院实验动物中心；骨髓瘤Sp2/0细胞由本实验室保存；大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞购自北京天根生化科技有限公司；pET30a-SNAP25质粒由本实验室构建；弗氏完全、不完全佐剂，TMB显色液购自Sigma公司；DMEM购自Cell
生物技术通讯 2019年3期2019-07-16
- 赤羽病病毒N蛋白单克隆抗体的制备
分泌MAb 的杂交瘤细胞株的制备、效价及亚类的测定 在融合前24 h 制备饲养层细胞用于细胞融合，将SP2/0 细胞与效价最高的小鼠脾细胞以1:4混合，加入PEG-6000 融合后经选择性培养基HAT、HT 进行培养[6]。待杂交瘤细胞生长至板底面积1/4～1/3 或培养液变微黄色后，通过建立的间接ELISA 方法筛选阳性杂交瘤细胞株，同时将SP2/0细胞培养上清作为阴性对照。选择阳性杂交瘤细胞进行亚克隆，直到筛选出稳定分泌特异性MAb 的杂交瘤细胞株进行
中国预防兽医学报 2019年3期2019-05-21
- 猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
为免疫原,应用杂交瘤技术,获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备PEDV特异性单克隆抗体,为PEDV诊断或检测技术的进一步研发以及感染免疫机制的研究奠定基础。1 材料与方法1.1 细胞与毒株 Vero细胞和SP2/0骨髓瘤细胞,购自中国兽医药品监察所；表达PEDV N蛋白的工程菌E.Coli BL21,由河北农业大学传染病实验室制备。PEDV HBMC2012株(GenBank ID：JX163294),由河北农业大学传染病实验室分离鉴定与保存。1.2 主
中国兽医杂志 2019年1期2019-05-21
- 有限稀释法制备RecQ解旋酶单克隆抗体1C1及鉴定*＊
免疫小鼠，利用杂交瘤技术及有限稀释法制备抗RecQ解旋酶的mAb，并考察其特异性及活性。1 材料和方法1.1 材料8～10周龄雌性BALB/c小鼠，体质量18～22 g，由贵州医科大学实验动物中心提供。纯化后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶、SP2/0骨髓瘤细胞为贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心储存。胎牛血清、超级新生牛血清购自杭州四季青公司，甲基纤维素、Freund完全佐剂(Freund＇s complete adjuvant，FCA)、Freund 不
贵州医科大学学报 2019年2期2019-03-12
- 抗人FXYD6特异性多肽单克隆功能性抗体制备及生物学作用鉴定
鼠。1.2.4杂交瘤细胞融合、筛选、鉴定 取加强免疫3 d后的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤(1∶5)，应用聚乙二醇(PEG)细胞融合法进行融合，HAT培养基筛选融合细胞，有限稀释法筛选阳性克隆，即用FXYD6重组蛋白及标签蛋白通过间接ELISA法筛选针对重组FXYD6抗原有免疫反应的杂交瘤细胞株，同时去除对标签蛋白有免疫反应的杂交瘤细胞株，即得到针对分泌FXYD6胞内区或胞外区单抗的杂交瘤细胞株。抗体亚类测定试剂盒检测杂交瘤分泌抗体亚型，
重庆医学 2018年10期2018-05-10
- 支气管哮喘下调表达蛋白Annexin-1单克隆抗体的制备及其鉴定①
免疫，通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞经PEG融合，并间接用ELISA法筛选分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株，对阳性细胞株进行亚克隆并培养，然后接种于小鼠腹腔，诱导小鼠产生腹水，制备Annexin-1单克隆抗体。最后利用ELISA、Western Blot等技术鉴定所制备的单克隆抗体。结果：通过杂交瘤技术获得5株分泌抗膜联蛋白-1的杂交瘤细胞,分别命名为IA8、ID2、IE2、4E7和5G3,所产抗体,均为IgGI亚型,轻链均为k
黑龙江医药科学 2017年6期2018-01-04
- 抗羊肚菌菌丝特异性抗原单克隆抗体的制备与初步鉴定*
原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为W2F3。经传代培养和亚克隆纯化，得到稳定分泌抗羊肚菌菌丝抗原单克隆抗体的细胞株，经鉴定W2F3单克隆抗体抗体亚类为IgG1，轻链亚型为Kappa，初步确定该单抗对应的抗原具有羊肚菌属特异性。羊肚菌；特异性抗原；单克隆抗体羊肚菌 [Morchella esculenta(L.)Pers.]属子囊菌亚门 （Ascomycotina） 盘菌纲 （Pezizomycetes） 盘菌目（Pezizales） 羊肚菌科（Morche
中国食用菌 2017年6期2017-12-28
- 分泌抗山羊γ干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备与鉴定
扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备与鉴定张洪杰，桑锋锋，刘阿华，李言言，王 毅，陈德坤*(西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100)为筛选分泌山羊γ干扰素(IFN-γ)单克隆抗体的杂交瘤细胞，以原核表达的山羊rIFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠，取其脾脏细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合，以间接ELISA方法筛选分泌山羊IFN-γ单克隆抗体杂交瘤细胞，采用山羊外周血淋巴细胞产生的IFN-γ包被酶标板对IFN-γ的特异性进行鉴定，用试纸条对IFN-γ
动物医学进展 2017年12期2017-12-26
- IL-17单克隆抗体的制备与鉴定
胞株。对获得的杂交瘤细胞进行染色体组型分析，并对其分泌的IL-17单克隆抗体进行抗体特异性、抗体类别等分析。结果显示，成功获得了纯化的山羊IL-17原核表达产物；筛选到1株能特异性分泌山羊IL-17单克隆抗体的杂交瘤细胞株-B6,其分泌的单克隆抗体亚型为IgG1，抗体轻链为κ。山羊；IL-17单克隆抗体；杂交瘤细胞；酶联免疫吸附试验白细胞介素17(IL-17)是一种主要由IL-17+淋巴细胞产生的细胞因子，它通过诱导IL-6、IL-8和TNFα等细胞因子的
动物医学进展 2017年11期2017-12-15
- 伪狂犬病病毒单克隆抗体制备及特征分析
附实验筛选阳性杂交瘤细胞并制备腹水，用病毒中和实验检测单克隆抗体（腹水）对PRV的中和作用。结果：通过细胞融合，共得到11株针对PRV的杂交瘤细胞。中和实验结果显示，无论是对于PRV弱毒株Bartha-k61还是强毒株AV25，2株杂交瘤细胞产生的腹水都表现为明显的中和效应；但2株单抗的中和能力不同，其中1株杂交瘤细胞腹水的中和效价为1∶16～1∶32，另1株的效价为1∶4。交叉反应显示，11株单克隆抗体中，2株与单纯性疱疹病毒存在明显的免疫反应，1株与猴
生物技术通讯 2017年4期2017-11-06
- 鸭星状病毒单克隆抗体的制备及鉴定
F2蛋白单抗的杂交瘤细胞。取E5C1株和C10F6株进行鉴定，结果表明，2株单抗均为IgM，轻链均为κ型；细胞上清和小鼠腹水的效价分别为105和106以上；免疫印迹试验表明，2株单抗均能识别重组ORF2蛋白；特异性试验表明，E5C1株杂交瘤细胞的培养上清只与DAstV反应。鸭星状病毒 ； 单克隆抗体 ； ORF2蛋白鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis, DVH)是危害养鸭业的高度致死性传染病，其病原包括小RNA病毒科禽肝病毒属的鸭甲肝病
中国兽医杂志 2017年4期2017-06-29
- 不同氮添加对入侵植物瘤突苍耳和本地近缘植物苍耳及两者杂交种的生长影响
两者的杂交种(杂交瘤突苍耳和杂交苍耳)在植物形态、生物量及分配、植株生长和叶片光合特性等方面的差异，探讨这些差异与入侵性的关系。结果表明，氮添加显著提高了瘤突苍耳、苍耳和杂交种的茎粗、总叶面积、总生物量、根生物量、茎生物量、根生物量比和根冠比，显著降低了4种植株的叶根比；瘤突苍耳各指标随氮含量增加而变化明显，苍耳和杂交苍耳的茎生物量比和叶生物量比下降显著；瘤突苍耳的净同化速率在不同氮处理下均显著高于苍耳，但叶面积比均显著低于苍耳；杂交后代植株的相对生长速率
草业学报 2017年5期2017-05-23
- 重要危害因子单克隆抗体的制备及其食品安全快速检测技术应用
细胞融合、活性杂交瘤细胞筛选以及抗体纯化等。江南大学胥传来教授团队发展了基于理论模型来预测抗原抗体配对的新方法，创制了重金属铅、镉、汞等元素的免疫分析试剂和产品。设计出真菌毒素、抗菌剂、杀虫剂、抗生素、激素、病原微生物以及非法添加物等物质的特异性新型半抗原和完全抗原，在抗体筛选以及抗原、抗体配对过程中引入食品基质，有效提升了检测试剂的基质耐受性，获得了200余种优良抗体和配对抗原，解决了抗体和抗原在实际检测过程中耐受性差，易失效的难题，提升了快速检测结果的
食品与生物技术学报 2017年3期2017-04-07
- 抗猪PD-1单克隆抗体的制备与其生物学特性鉴定
备饲养细胞。用杂交瘤细胞融合技术融合免疫BALB/c小鼠的脾细胞和NS0细胞，融合好放置37 ℃ 5% CO2培养箱中培养。1.2.2 阳性杂交瘤细胞的筛选和克隆 融合细胞培养10 d吸取少量上清用于筛选；14 d阳性孔半量更换HT培养基，同时对阳性孔细胞转至24孔培养板扩大培养，准备克隆化，间接ELISA法筛选杂交瘤培养上清液，对筛选的特异性较强的阳性孔转至24孔培养板中扩大培养克隆化。直至所有克隆孔阳性率为100%时，定杂交瘤细胞株。1.2.3 腹水的
中国兽医杂志 2017年12期2017-02-06
- 混合培养基模式培养杂交瘤细胞表达单克隆抗体
培养基模式培养杂交瘤细胞表达单克隆抗体黄亚杰1,2，朱光凯2，刘 珊2，赵永强2，谢 波2，刘道军1(1.汕头大学 医学院，汕头 515041；2.中国科学院过程工程研究所 生化工程国家重点实验室，北京 100190)采用混合培养基模式将杂交瘤细胞进行减血清悬浮驯化培养，通过优化提高单克隆抗体的表达量，并进行抗体的分离纯化。在杂交瘤细胞悬浮培养优化过程中，最终确定的血清浓度为2%胎牛血清，培养基配比为RPM1640：SFM4CHO：OptiCHO(4.5：
生物学杂志 2016年6期2016-12-23
- 抗鸡lgMµ链单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定
链单克隆抗体的杂交瘤细胞株（1H2、1D10）。这2株杂交瘤细胞株连续传代4个月，并经液氮冻存5个月后复苏培养，仍能稳定地分泌特异性McAb。1H2、1D10腹水ELISA效价分别为1：106、1：107，亚类鉴定均为IgG1κ型。间接ELISA检测显示，这两株单抗均与鸡血清中的天然IgM发生特异性反应，可用于鸡血清中IgM的快速检测，对于各种传染病的早期诊断具有重要意义。原核表达鸡IgM µ链蛋白 单克隆抗体 鸡血中的天然IgMIgM是机体初次体液免疫应
中国畜牧兽医文摘 2016年5期2016-11-24
- 鸡新城疫病毒(NDV-XX08)单克隆抗体的制备与鉴定
,挑选效价高的杂交瘤细胞进行克隆和亚克隆,建立阳性杂交瘤细胞株,最终得到一株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,命名为4F12.采用体外细胞培养和体内诱生腹水的方法制备了其McAb.对获得的单克隆抗体采用ELISA,HI,Western-Blotting方法进行鉴定.杂交瘤细胞培养上清和腹水的ELISA效价分别为1∶160和1∶3.2X104.获得的单克隆抗体与NDV具有良好的特异性反应,与鸡胚阴性尿囊液、鸡正常组织、鸡IgG、鸡传染性囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒
中国兽医杂志 2016年2期2016-09-06
- 利用改良电融合法制备杂交瘤细胞的试验探索
良电融合法制备杂交瘤细胞的试验探索吴梦1，2，刘作华1，2，3，罗林1，丁玉春1，2，葛良鹏*1，2，3 （1.重庆市畜牧科学院，重庆 荣昌 402460；2.农业部养猪科学重点实验室，重庆 荣昌 402460；3.养猪科学重庆市市级重点实验室，重庆 荣昌 402460）摘要：目的：运用改良电融合法提高杂交瘤的融合效率，以获得更多的杂交瘤克隆。方法：将SP2/0细胞和脾细胞分别用NHS_d_PEG24_biotin孵育30min，再将脾细胞用avidin孵
四川畜牧兽医 2016年7期2016-08-03
- 伏马菌素B1单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用
1抗体的单克隆杂交瘤细胞株；采用动物体内诱生腹水方法制备出抗FB1单抗，并鉴定单抗的各种性能；初步建立FB1免疫学检测方法。结果得到1株稳定分泌抗FB1单抗的杂交瘤细胞株2E11－H3，该细胞株分泌的mAbs的效价高达1∶1.02×106，亲和力常数平均值为7.98×1010L·mol－1，亚型为IgG3。FB1mAbs的工作浓度为1∶6.0×104，与FB1发生特异性反应，间接竞争ELISA测得IC50＝43.65ng·mL－1；与FB1结构类似物FB2
畜牧兽医学报 2016年5期2016-07-16
- 单增李斯特菌单克隆抗体的研制及特性分析
/c小鼠，运用杂交瘤技术进行细胞融合，制备得到抗单增李斯特菌的单克隆抗体，并对其进行免疫学特性分析。结果表明，成功筛选4株能稳定分泌抗单增李斯特菌的单克隆杂交瘤细胞株，腹水抗体效价为1∶102 400～1∶409 600，免疫球蛋白亚型为IgG1、Ig2a、Ig2b，亲和力常数在1×107～1×1010L/mol；经测定分析出最佳配对抗体；并与绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌及大肠杆菌、沙门氏菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等菌属无明显交叉反应；进行双抗体
食品与生物技术学报 2016年2期2016-05-23
- 抗山羊痘病毒P32蛋白杂交瘤细胞的构建及其单克隆抗体的制备
病毒P32蛋白杂交瘤细胞的构建及其单克隆抗体的制备陈伯祥1，杨 明1，贺泂杰2，李 杰1（1.甘肃省畜牧兽医研究所，甘肃平凉 744000；2.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州 730050）本研究旨在以纯化的山羊痘病毒P32蛋白为免疫原，构建杂交瘤细胞株，制备P32蛋白单克隆抗体。用纯化的P32蛋白免疫BALB/C小鼠后，按常规方法进行细胞融合，构建抗山羊痘病毒P32蛋白的杂交瘤细胞，制备P32蛋白单克隆抗体，获得4株能识别重组蛋白且特异性强
中国动物检疫 2015年12期2015-11-03
- 关于“单克隆抗体”中相关问题的探讨
选择培养基筛选杂交瘤细胞？在小鼠B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合悬浮液中，放置了多个骨髓瘤细胞与多个多种B淋巴细胞，由于动物细胞融合是一个随机的过程，所以经融合后细胞将以多种形式出现。如果只考虑两两融合的情况，会有融合的骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞、B淋巴细胞—B淋巴细胞、B淋巴细胞—骨髓瘤细胞以及未融合成功的单个骨髓瘤细胞、单个的B淋巴细胞。那么如何从众多的细胞中筛选出杂交瘤细胞呢？从众多类型的细胞中筛选出杂交瘤细胞，普遍采用的HAT选择性培养基，也就是在普通的
中学生物学 2015年11期2015-09-10
- 流产嗜性衣原体MIP蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定
。1.2.3 杂交瘤细胞的筛选及杂交瘤细胞株的建立用纯化的MIP蛋白作为包被抗原，以融合细胞的上清液为一抗，间接ELISA检测筛选分泌抗MIP蛋白抗体的阳性克隆。将初步筛选得到的疑似阳性细胞克隆株，用HT培养基有限稀释后，再进行3次亚克隆，用同样的方法筛选，至阳性率达到100%，将所得的细胞株扩大培养，建株保存，培养上清即含有大量单克隆抗体。1.2.4 抗MIP蛋白单克隆抗体的特性鉴定1.2.4.1 间接ELISA方法检测抗体效价 以纯化的重组MIP蛋白包
中国兽药杂志 2015年3期2015-05-29
- 山羊痘病毒ORF122 蛋白杂交瘤细胞的构建及其单克隆抗体的制备
RF122蛋白杂交瘤细胞，制备单克隆抗体，为进一步建立山羊痘的检测方法奠定工作基础。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 毒株与菌株山羊痘毒株(GTPV-S-1)、羊口疮病毒株、鸽新城疫病毒株、鸡减蛋综合症病毒株、S.enteritidis和E.coli由甘肃省畜牧兽医研究所保存；山羊痘病毒ORF122蛋白抗原由本课题组提供。1.1.2 细胞株和实验动物SP2/0细，购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心；BALB/C小鼠（18—20g、6—8周龄、
中兽医学杂志 2015年10期2015-04-20
- 伪狂犬病毒单克隆抗体的制备和鉴定
V单克隆抗体的杂交瘤细胞株，为建立特异性强、敏感性高、简便、快速的抗原捕获ELISA诊断方法提供了条件。1 材料与方法1.1 毒株、细胞、实验动物和其他试剂 骨髓瘤细胞、PRV、猪睾丸细胞(ST)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)均为武汉中博生物股份有限公司保存;8周左右的雌性BALB/c购自武汉生物制品研究所。DMEM培养基(Hyclone公司)、次黄嘌呤氨基蝶呤胸腺嘧啶(HAT，Sigma公司)、次
中国兽药杂志 2014年3期2014-11-29
- Corning® hybrigro SF™培养基对提高杂交瘤细胞培养密度和抗体产量的研究
™培养基对提高杂交瘤细胞培养密度和抗体产量的研究Hilary Sherman，Mark E. Rothenberg200040 上海，康宁生命科学亚洲技术中心近几年，抗体作为生物类治疗药物的需求显著增长。因此，提高抗体生产效率并且降低生产成本愈发必要。而康宁 hybrigro SF™培养基的开发，正是致力于在不使用昂贵血清的情况下仍能够高效培养杂交瘤细胞，提高抗体产量。我们使用两种不同的杂交瘤细胞株，并通过与两种商业化生产的无血清培养基以及一种被广泛使用的
中国医药生物技术 2014年4期2014-10-31
- 不同载体蛋白偶联制备促红细胞生成素二聚体单克隆抗体的选择优化
备技术筛选获得杂交瘤细胞；ELISA法鉴定杂交瘤细胞的特性；分析比较不同载体蛋白构建单克隆抗体的差异与效果。结果共筛选获得了5株杂交瘤细胞，5株杂交瘤细胞均能分泌EPO dimer抗体。经过进一步的特异性鉴定、亚型鉴定以及效价鉴定后，有4株杂交瘤细胞被挑选进行大量抗体制备，为后期临床基础实验提供材料。4株杂交瘤分别为克隆S-18-2，其亚型为IgG2b，κ；克隆S-369-7，其亚型为IgG1，κ；克隆S-410-3，其亚型为IgG1，κ；克隆S-514-
中国生化药物杂志 2014年8期2014-09-14
- 癌胚抗原磷脂酰肌醇蛋白聚糖3单克隆抗体的制备及应用*
3单克隆抗体的杂交瘤细胞株，间接免疫荧光检测肝癌细胞中GPC3表达。结果成功构建了GPC3原核表达载体，在大肠杆菌中的诱导表达重组GPC3蛋白。应用单克隆抗体杂交瘤技术成功制备1株稳定分泌抗GPC3单克隆抗体的杂交瘤细胞株，通过Western blot鉴定具有高度的特异性，间接免疫荧光实验显示单克隆抗体能与HepG2细胞内GPC3特异性结合。结论成功制备出特异性抗人GPC3单克隆抗体。磷脂酰肌醇蛋白聚糖类；抗体,单克隆；重组融合蛋白质类；杂交瘤；细胞系；癌
天津医药 2014年3期2014-08-08
- 孕马尿中雌酮硫酸钠单克隆抗体的研制*
A)方法;再以杂交瘤抗体技术获得抗ESS单克隆抗体细胞株。结果ESS抗原5次以初次免疫200 μg,加强免疫100 μg的免疫剂量多点注射小鼠背部皮下免疫为小鼠最佳免疫方法;确定10 μg·L-1为抗原包被浓度,1∶2 000的一抗血清稀释倍数;细胞融合率达90.2%,ELISA法筛选阳性率为4.4%,并筛选得到两株特异性较好的细胞株2C8和8A7。结论该研究筛选建立了ESS小鼠免疫方法及灵敏度高、特异性好的间接ELISA筛选体系,可用于ESS单克隆抗体的
医药导报 2014年8期2014-05-13
- 抗新型隐球菌荚膜相关蛋白CAP10单克隆抗体的制备及鉴定
效价。1.4 杂交瘤细胞的融合及筛选参考文献[10]的方法进行杂交瘤细胞融合与筛选。简言之，无菌条件下取免疫小鼠脾脏，制备脾细胞悬液，用PEG-1500按常规方法与Sp2/0骨髓瘤细胞融合，用含HAT的1640完全培养基置37℃ 5%CO2的培养箱中；第4 d换液，7～10 d后以ELISA方法检测培养上清有无抗体产生，筛选阳性孔；进一步采用有限稀释法对阳性克隆进行连续3次的亚克隆，每次亚克隆采用含HT的1640培养基培养7～10 d，筛选出稳定、高水平表
生物技术通讯 2014年2期2014-05-04
- 细胞支原体污染清除方法比较及清除后的应用
体感染。结论 杂交瘤细胞清除支原体感染后，制备所得抗体应用于相应平台可见，清除剂法对细胞损伤较大，抗体相应功能下降；而实体瘤法教温和，抗体相应功能保持较完好。支原体；杂交瘤细胞；抗体支原体是一种大小仅为0.2～0.3 μm，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22～0.45 μm）的原核生物。在细胞培养过程中，支原体感染发生率达到30%～60%，因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题[1]。当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染是很普遍的问题，做好支原
中国医药指南 2014年30期2014-04-21
- 大菱鲆免疫球蛋白M(IgM)单克隆抗体的制备与特性鉴定
技术生产融合的杂交瘤细胞，筛选分泌大菱鲆IgM的单克隆抗体杂交瘤细胞，制备并生产大菱鲆IgM单克隆抗体。2 材料与方法2.1 免疫原制备纯化的大菱鲆血清IgM由本实验室制备并保存[7]。将纯化的大菱鲆IgM分别与等体积的弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂（Pierce，USA）混匀乳化后免疫小鼠。2.2 免疫动物选用6周龄BALB/C雌性小鼠进行免疫，免疫程序见表1。表1 免疫程序Table 1 The immunization schedule2.3 饲养细胞
中国工程科学 2014年9期2014-01-02
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备和鉴定
的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，为PRRSV的临床快速诊断商品化试剂的研发奠定基础。1 材料与方法1.1 毒株、细胞、实验动物和其他试剂 骨髓瘤细胞、PRRSV、猴肾细胞(Marc-145)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)均为武汉中博生物股份有限公司保存;8周左右的雌性BALB/c购自武汉生物制品研究所;DMEM培养基(Hyclone公司)、次黄嘌呤氨基蝶呤胸腺嘧啶与次黄嘌呤胸腺嘧啶(HT，Sigma公司)、辣根过氧化
中国兽药杂志 2013年12期2013-11-23
- 鸭肠炎病毒VP5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
筛选培养液。待杂交瘤细胞长至孔底部的1/3～1/2时，于换液后3～4d取细胞培养上清100μL，用建立的ELISA检测方法进行检测，以免疫小鼠血清为阳性对照、未免疫小鼠血清及SP2/0上清为阴性对照。将ELISA检测阳性孔的细胞进行亚克隆，采用有限稀释法进行。亚克隆3～4次，直至所有克隆化细胞孔检测阳性率为100%。1.5 单克隆抗体腹水的制备 给经产BALB/c小鼠腹腔注射液体石蜡，0.5mL/只。1周后，腹腔注射杂交瘤细胞悬液（1～2×106个/mL）
中国兽医杂志 2013年1期2013-11-22
- β2糖蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定①
2 细胞融合和杂交瘤细胞的克隆化 SP2/0细胞于融合前扩大培养，挑选对数生长期的细胞用于融合。小鼠摘眼球取血，留血清作阳性对照，小鼠处死后取脾细胞，将脾细胞与SP2/0细胞以4∶1混合于融合管，离心，去上清，沉淀于37℃水浴中滴加1 ml 50%PEG1450，60秒内均匀加完，立即于90秒内滴加30 ml无血清RPMI1640培养基终止反应，37℃水浴中静置10分钟，离心去上清，融合细胞用HAT培养基稀释后铺入加有饲养细胞的96孔板，置于37℃、5%C
中国免疫学杂志 2013年6期2013-09-12
- 抗KDR单克隆抗体的制备＊
作用，我们采用杂交瘤技术制备能稳定分泌抗KDR单克隆抗体（Monoclonal Antibody，mAb）的杂交瘤细胞，以期获得能抑制VEGFA生物学效应的抗KDR mAb。1 材料与方法1.1 材料8～10周龄、18～20g雌性清洁级BALB／c小鼠6只，购自四川大学实验动物中心，合格证号：SYXK（川）2009－045。小鼠骨髓瘤细胞SP2／0－Ag14、谷胱甘肽转硫酶蛋白（Glutathione S－transferases，GST）、GST－KDR
四川生理科学杂志 2013年1期2013-07-16
- 小鼠抗食蟹猴IgG单克隆抗体的制备
000融合制备杂交瘤细胞，利用间接ELISA、Western blot等方法进行筛选、鉴定。结果 得到5株阳性杂交瘤，分别命名为2B6、2B7、2D9、3B2、5E4，并且5株杂交瘤分泌的抗体均与恒河猴的 IgG或血清发生交叉反应，而与其他物种如东北虎、犬等动物的IgG或血清无交叉反应。结论 5株杂交瘤产生的单克隆抗体(McAb)具有较好免疫活性，且能长期、稳定地分泌抗体。此项研究工作为后续研究食蟹猴、恒河猴传染病血清学诊断方法奠定基础。食蟹猴;IgG;单
中国比较医学杂志 2012年5期2012-12-01
- 重组溶血素蛋白用于单增李斯特菌快速检测的效果
LISA法进行杂交瘤细胞的筛选培养 脾细胞和骨髓瘤细胞经PEG处理后形成多种细胞的混合体，只有脾细胞与骨髓细胞形成的杂交瘤细胞才有意义。杂交瘤细胞在HAT选择培养液中可以生长繁殖。前几天用HAT培养液培养融合细胞，第8天后每天半量换HAT培养液，维持10 d后换一般培养液。当细胞铺满管底1/5时，开始检测特异性抗体，用ELISA筛选出阳性克隆。筛选方法：将每孔100 μl细胞培养液加入到细菌表面抗原包被好的酶标板上，同时以免疫小鼠血清为阳性对照(1∶1 0
中国老年学杂志 2012年15期2012-11-20
- 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)单克隆抗体的制备及鉴定①
道，本文拟应用杂交瘤技术制备鼠抗rLZ-8的单克隆抗体，为rLZ-8药效学的深入研究奠定基础。1 材料与方法1.1 主要药品和试剂 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)，本室提供;DMDM 细胞培养液、HAT(次黄嘌呤、甲氨蝶呤、胸腺嘧啶核苷)，Gibco公司，美国;羊抗兔辣根过氧化物IgG(IgG-HRP)、弗氏完全佐剂(CFA)、弗式不完全佐剂、PEG4000、OPD(邻苯二胺)、抗体亚类鉴定试剂盒，Sigma公司，美国;牛血清白蛋白(BSA)，Roch
中国免疫学杂志 2012年1期2012-07-30
- 阪崎肠杆菌单克隆抗体的制备与特性鉴定①
道。本研究利用杂交瘤技术制备出能稳定分泌抗ES的单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)的细胞株，为今后阪崎肠杆菌快速检测试剂盒的研制奠定研究基础。1 材料与方法1.1材料 6周龄雌性BALB/c小鼠，体重18～20克，广东省医学实验动物中心;小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)，中国武汉典型培养物保藏中心;阪崎肠杆菌，广东环凯微生物科技有限公司;PEG1000、HAT、HT、TMB为 Sigma公司产品;DMEM、胎牛血清为Gibco公司产品
中国免疫学杂志 2012年9期2012-01-23
- H5N1亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了针对其HA蛋白的单克隆抗体(MAb)，对快速检测具有该抗原类型的AIV有着重要的应用价值[7]。1 材料和方法1.1 实验材料 AIV H5N1GD261分离株、骨髓瘤SP2/0细胞由本实验室保存；4周龄～6周龄及6周龄～10周龄清洁级BALB/c雌鼠购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心；弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、HAT选择培养基、HT培养基和PEG(MW1500)融合试剂、秋水仙素、灭活剂β-丙内酯、筛选剂8-
中国预防兽医学报 2011年6期2011-05-21
- 猪细小病毒单克隆抗体的制备和鉴定
V的单克隆抗体杂交瘤细胞株，为猪细小病毒病的临床快速诊断商品化试剂研发奠定基础。1 材料和方法1.1 毒种、细胞和实验动物PPV、猪肾细胞（PK-15）和 SP2/0细胞（Sp2/0-Ag14）均购自美国标准菌种保藏中心（American Type Culture Collection，ATCC）。猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒I型（PCV-1）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）、乙脑病毒（JEV
中国比较医学杂志 2011年9期2011-02-12
- 抗鹿源牛病毒性腹泻-粘膜病病毒特异性单克隆抗体的制备与鉴定
定分泌MAb的杂交瘤细胞株2A3和4B12。通过间接ELISA检测，MAb效价为：上清液及腹水分别为 1∶512、1∶640和 1∶1 2800、1∶16 000；MAb的亚类鉴定结果表明，2株杂交瘤细胞分泌的抗体亚类均为IgGl亚类；经ELISA测定，2A3和4B12与BVDV C24V株、HCV、BDV、PRV均不发生交叉反应，但与BVDV CCSYD株发生交叉反应；IFA试验结果显示，4B12和2A3与接种BVDV N71株病毒液的细胞反应产生较强的
中国预防兽医学报 2010年8期2010-09-10
- 流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
4 细胞融合、杂交瘤细胞的筛选及纯化 细胞融合过程按文献报道的方法[6]进行。以纯化的E蛋白作为包被抗原,用间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆株。将经初步筛选得到的可疑阳性细胞克隆株用有限稀释法再进行3～5次单克隆,同时用间接ELISA方法进行检测,直至所有克隆化细胞孔检测阳性率为100%时,即可确定已获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆经扩大培养冻存于液氮中。1.5 单克隆抗体腹水的制备 取成年的BALB/c小鼠,于腹腔内预先注入0.5mL的弗氏
中国兽医杂志 2010年1期2010-08-08
- 诺氟沙星单克隆抗体的制备及其特性鉴定
LX MAb的杂交瘤细胞株，为免疫学检测方法的建立和拥有自主知识产权检测产品的开发奠定基础。1 材料和方法1.1 试剂与溶液 盐酸诺氟沙星为中国兽医药品监察所产品；BSA和OVA为Pierce产品；完全佐剂(Freund's complete adjuvant,FCA)、不完全佐剂(Freund's incomplete adjuvant,FIA)、细胞培养基RPMI-1640、选择培养基HAT、HT和PEG-1500为GIBCO产品；新生牛血清为杭州四季
中国预防兽医学报 2010年9期2010-08-06
- 猪细小病毒核衣壳VP2蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定
抗和分泌抗体的杂交瘤细胞株进行鉴定,为该病及其病原的基础性或应用性研究提供重要的研究工具。1 材料与方法1.1 实验动物 清洁级8～10周龄BALB/c小鼠,购自黑龙江省医科大学第二临床医院实验动物中心。1.2 免疫原 表达猪细小病毒VP2蛋白重组干酪乳杆菌pPG-1-VP2-E290/L.casei393,由本实验室构建[3]表达的VP2蛋白经SDS-PAGE电泳,切胶纯化,PBS稀释成所需浓度。1.3 细胞系 SP2/0骨髓瘤细胞、ST传代细胞,购自武
中国兽医杂志 2010年5期2010-06-01
- 抗鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定
]。本研究应用杂交瘤技术获得分泌抗IBV N蛋白MAb的杂交瘤细胞株，为建立鸡传染性支气管炎(IB)检测方法及相关研究提供依据。1 材料和方法1.1 主要材料 IBV tl/CH/LDT3/03[3]、IBV分离株CK/CH/LDL/97Ⅰ、IBN、M41、CK/CH/LSD/05Ⅰ、CK/CH/LHN/00Ⅰ和CK/CH/LAH/08Ⅱ的N蛋白、BL21(DE3)和SP2/0细胞均由本实验室保存；雌性BALB/c小鼠由哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供；p
中国预防兽医学报 2010年9期2010-05-21
- 杂交瘤研究中染色体分析的方法及其意义
，易文，褚嘉祐杂交瘤研究中染色体分析的方法及其意义林克勤，易文，褚嘉祐【摘要】目的探讨细胞同步化染色体高分辨技术检测杂交瘤细胞染色体的可行性。方法选择小鼠骨髓瘤 SP-2/O 细胞株、人淋巴母细胞CKM-8 细胞株、人骨髓瘤 KM 细胞株、抗小鼠胰腺癌鼠-鼠杂交瘤细胞株，体外培养 24 ～ 48 h。对 4 种细胞株分别进行同步化处理，加入 5-氟脱氧尿嘧啶核苷和尿嘧啶培养16 ～ 18 h 后，加入 5-溴脱氧尿嘧啶核苷，并在收集细胞前加入秋水酰胺；收集
中国医药生物技术 2010年5期2010-04-06