重要危害因子单克隆抗体的制备及其食品安全快速检测技术应用

重要危害因子单克隆抗体的制备及其食品安全快速检测技术应用

食品潜在污染物种类繁多，发展简便、快速、高灵敏、低成本的检测方法是保障食品安全的根本途径。基于单克隆抗体的各类免疫分析技术是现代食品安全快速检测技术发展的主要方向之一。因此，高活性单克隆抗体的制备及其应用自然为众多研究者所关注。

单克隆抗体的制备过程涉及到很多技术环节，包括抗原制备、免疫剂量设计、细胞融合、活性杂交瘤细胞筛选以及抗体纯化等。江南大学胥传来教授团队发展了基于理论模型来预测抗原抗体配对的新方法，创制了重金属铅、镉、汞等元素的免疫分析试剂和产品。设计出真菌毒素、抗菌剂、杀虫剂、抗生素、激素、病原微生物以及非法添加物等物质的特异性新型半抗原和完全抗原，在抗体筛选以及抗原、抗体配对过程中引入食品基质，有效提升了检测试剂的基质耐受性，获得了200余种优良抗体和配对抗原，解决了抗体和抗原在实际检测过程中耐受性差，易失效的难题，提升了快速检测结果的可靠性和稳定性，相关检测试剂和产品在行业内获得广泛应用。如中国专利CN201610538905.3提供的抗氢化可的松特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株CGMCC No.12022可以分泌产生对氢化可的松具有较好的特异性和较高的灵敏度，可以用于制备氢化可的松的免疫检测试剂盒以及胶体金试纸条。CN201610480745.1公开了一株重金属铬单克隆抗体杂交瘤细胞株C2及其应用。该发明通过铬完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化后，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，经过间接竞争ELISA筛选和三次亚克隆，得到重金属铬单克隆抗体杂交瘤细胞株C2。此细胞株分泌的单克隆抗体可识别重金属三价铬离子，特异性好和灵敏度高，可以用于食品安全中重金属铬的残留检测。CN201610480743.2公开了一株砷单克隆抗体杂交瘤细胞株FG1及其应用。该发明获得的抗砷离子单克隆抗体细胞株FG1，对砷有较好的检测灵敏度和特异性。该细胞株FG1分泌的抗体稳定性好：杂交瘤细胞冻存于液氮中至少保存5年，纯化的抗体在-20℃冰箱中至少可存放2年；抗体特异性高：与其他金属离子暂未发现交叉反应。CN201610396856.4公开了基于沙门氏菌核心多糖单克隆抗体SQX6D8的检测食品中沙门氏菌属的胶体金试纸条的制备方法，其以高碘酸钠法合成的鼠伤寒沙门氏菌脂多糖（LPS）与牛血清白蛋白（BSA）的偶联物作为胶体金试纸条测试线（T线）的包被原，以沙门氏菌核心多糖单克隆抗体SQX6D8作为金标抗体。CN201610372606.7公开了一株抗呋喃它酮代谢物AMOZ的单克隆抗体杂交瘤细胞株YH4及其应用，该发明杂交瘤细胞株YH4，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12017。抗呋喃它酮代谢物AMOZ单克隆抗体，它由所述杂交瘤细胞株YH4分泌产生。此细胞株YH4分泌的单克隆抗体，对呋喃它酮代谢物AMOZ具有较好的特异性，有较好的检测灵敏度和亲和力，可用于食品安全中抗呋喃它酮代谢物AMOZ的特异性检测。CN201610324645.X公开了一株抗雌三醇特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株NaN2及其应用。该发明的抗雌三醇特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株NaN2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 12016。CN201610056165.X公开了一株特异性抗丙烯酰胺单克隆抗体杂交瘤细胞株2F6及其应用。该发明将原药丙烯酰胺与对巯基苯甲酸采用化学衍生加成制备半抗原，半抗原与BSA偶联制备免疫原，半抗原与OVA偶联制备包被原。对小鼠进行免疫后得到一株特异性抗丙烯酰胺单克隆抗体杂交瘤细胞株2F6。此细胞株2F6分泌的单克隆抗体，仅特异性针对衍生化丙烯酰胺，与丙烯酰胺本身、对巯基苯甲酸交叉率分别为2.19%、3.87%。获得的抗丙烯酰胺单克隆抗体细胞株，有较好的检测灵敏度和亲和力，可以达到特异性检测丙烯酰胺的目的。CN201610056172.X公开了一株特异性抗头孢喹肟单克隆抗体杂交瘤细胞株2D4及其应用。CN201610039900.6公开了一种基于单克隆抗体的检测食品中李斯特菌属的双抗体夹心ELISA法。该发明用原核表达的单增李斯特菌P60蛋白免疫8周龄BALB/c小鼠，经免疫、融合、多重筛选得到15株李斯特菌属特异性单克隆抗体，分别标记辣根过氧化物酶HRP，并以单增李斯特菌CMCC54003为目标物进行两两配对。经筛选不同配对的交叉反应，以2G7为包被抗体、2H8-HRP为酶标抗体建立夹心ELISA方法对包括单增李斯特菌在内的李斯特菌属均有交叉反应。对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、大肠杆菌O157、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌没有交叉反应。

单克隆抗体技术虽然在食品安全检测领域有广泛的应用，但是在如何开发高活性单克隆抗体方面还有很多技术问题有待于解决,需要研究者针对每个关键环节进行深入研究。

（江南大学图书馆 张群）