潮霉素
- 杏鲍菇原生质体制备、再生及其遗传转化体系的建立
。同时，通过对潮霉素浓度筛选和转化方式的优化，建立稳定有效的杏鲍菇原生质体的遗传转化体系，以期为杏鲍菇的菌种改良和优良品种选育提供参考。1 材料与方法1.1 材料与试剂杏鲍菇菌株GIM5.344、质粒4：华南农业大学食品学院王杰教授课题组构建；溶壁酶1（≥200 U/mg）：广东省微生物研究所；溶壁酶2（≥200 U/mg）：北京索莱宝科技有限公司；纤维素酶（≥200 U/mg）、甘露醇、聚乙二醇4000、氯化钙、顺丁烯二酸、顺丁烯二酸二钠、三羟甲基氨基甲
食品研究与开发 2023年21期2023-11-10
- 潮霉素B对拟南芥种子萌发及幼苗生长的影响
570228)潮霉素B(以下简称潮霉素)作为氨基糖苷类正糖霉素族Ⅱ类抗生素[1]的代表之一,被广泛应用于生物学领域,常作为转化的选择剂[2],具有重要的应用价值和商业价值。潮霉素在20世纪50年代被发现,它主要通过靶向细菌中的30 S核糖体亚基[3]和真核细胞中的核糖体[4],从而阻碍蛋白质的合成[5],最终致使细胞逐渐褐化直至死亡[6]。潮霉素具有抑菌、杀虫功能,可作为生物学研究过程中遗传操作选择剂[7],被广泛应用于畜牧业和生物工程中。拟南芥(Arab
种子 2023年4期2023-06-19
- 海滨雀稗以hpt与bar基因为筛选标记的转化体系比较研究
和hpt基因（潮霉素磷酸转移酶，具有潮霉素抗性）的pCAMBIA1305.2和内含GUS和bar基因（膦丝菌素乙酰转移酶基因，具有草丁膦抗性）的pCAMBIA3301；转入根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）菌株AGL1中，作为农杆菌介导转化的菌液。图1 植物表达载体图谱Fig.1 Map of plant expression vector1.3 不同类型的培养基在再生体系和遗传转化体系中，使用的培养基类型及配方见表1。如图3
草业学报 2023年1期2023-02-07
- 农杆菌介导的山苍子遗传转化体系的构建
长影响较小，而潮霉素能显著杀死未转化的植物细胞组织，大幅降低假阳性的产生，这两种抗生素被广泛应用于植物的遗传转化[20-22]。然而，如抗生素浓度使用过度，会影响愈伤组织的正常生长和分化，甚至造成已转化成功愈伤组织的死亡，且不同植物对抗生素忍耐性不同[23]。因此，选择合适的抗生素浓度能显著提升遗传转化的效率。本研究以快繁的无菌组培苗为试验材料，进一步优化山苍子组培再生过程，研究头孢霉素和潮霉素对山苍子再生的影响，初步建立山苍子的遗传转化体系，为山苍子种质
林业科学研究 2022年5期2022-10-12
- 宁夏枸杞潮霉素抗性浓度筛选研究
探索适合枸杞的潮霉素筛选剂量，为枸杞基因功能的研究、遗传转化提供参考。以宁夏枸杞无菌苗叶片为外植体，设置4个潮霉素浓度梯度，研究其对诱导愈伤组织和愈伤组织诱导分化芽的影响，以选出适合枸杞转化体筛选的抗生素剂量。结果表明，随着潮霉素浓度的升高，其对枸杞诱导愈伤组织和愈伤组织诱导芽分化的抑制作用加强。潮霉素浓度越高，枸杞叶片的出愈率越低，愈伤组织的褐化率越高，且叶片逐渐变黄、白化甚至死亡。将潮霉素作为抗性选择标记时，抗性浓度以2 mg/L为最佳。关键词：宁夏枸
农学学报 2022年4期2022-07-14
- 芍药受体再生系统的建立
子叶；抗生素：潮霉素（Hygromycin）、庆大霉素（Gentamicin）、头孢霉素、羧苄霉素。1.2 选择抗生素的确定将芍药试管苗的子叶接种于培养基MS+6-BA 1.0mg/L+GA30.5mg/L。将芍药愈伤组织分成大小均匀小块，接种于培养基MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L。在以上2 种培养基中，分别添加不同浓度庆大霉素、潮霉素，观察子叶不定芽生长情况和愈伤组织分化、褐化情况，确定遗传转化选择压和最佳转化受体。1.3 抑菌抗
现代园艺 2022年7期2022-03-30
- 根癌农杆菌介导的新暗色柱节孢菌遗传转化
转化法，将含有潮霉素抗性基因（hyg）和绿色荧光蛋白基因（mGFP）的双元表达载体转化到新暗色柱节孢菌中，并在阳性转化子中检测绿色荧光蛋白的表达，旨在为进一步研究新暗色柱节孢菌的菌丝生长过程、形态特征、致病菌与火龙果之间的互作致病机制等提供技术支撑。1 材料与方法1.1 菌株和质粒新暗色柱节孢菌是本实验室从红皮红肉火龙果茎条分离鉴定并保存的。双元表达载体pG-Hyg-GFP 是以pCAMBIA1300 为骨架，插入trpC启动子、潮霉素抗性基因（hyg）和
热带生物学报 2021年4期2022-01-11
- 马铃薯品种‘并薯6号’遗传转化体系的建立
此载体上携带有潮霉素抗性基因Hyg（图1），并由本课题组保存。图1 pMDC85载体图Figure 1 pMDC85 vector1.1.3 培养基及其成分目前，关于马铃薯愈伤组织诱导及再生所用的激素主要包括生长素类（IAA、NAA 和2,4-D）、细胞分裂素类（6-BA 和 ZT）以及 GA3等[15,16]。以已发表的研究报道为基础，设计了以下的试验。本试验所用的基本培养基为MS（Murashige ＆ Skoog Medium），各种培养基的命名以及
中国马铃薯 2021年5期2021-12-21
- 农杆?菌介导葡萄灰葡萄孢遗传转化条件优化
BIG3C（含潮霉素抗性基因）均由本实验室保存。1.2 试验方法1.2.1 灰葡萄孢分生孢子制备 将灰葡萄孢BcSD3菌株接种于PDA培养基上，参照李廷刚等［16］报道的方法进行诱导产孢；使用灭菌水洗脱分生孢子，并用三层灭菌滤纸过滤去除菌丝等杂质；离心收集分生孢子，并调节至适宜浓度，保存备用。1.2.2 根癌农杆菌菌液制备 采用热击法将pBIG3C质粒转入根癌农杆菌EHA105菌株中；筛选阳性菌斑接种于LB液体培养基（含50μg/mL卡那霉素）中，于28℃
山东农业科学 2021年10期2021-11-15
- Fonsecaea monophora聚酮合酶基因的CRISPR-Cas9敲除载体的构建
ophora于潮霉素B浓度为0、100、200、300、400 μg/mL的PDA抗性平板上划线，25℃培养1周后，拍照观察判断是否抗性适用于筛选阳性转化子。②构建含有潮霉素抗性的pFC334-AarⅠ载体：设计引物在gRNA骨架前插入两个AarⅠ酶切位点(见表1)，pFC334质粒作为模板，分别扩增相对应的两个片段(1号和2号片段)，PCR条件：98℃ 10 s，55℃ 10 s，72℃ 1 kb/min，30 cycles。切胶回收纯化后融合成一个片段
中国真菌学杂志 2021年5期2021-11-01
- 农杆菌介导的栓皮栎体胚遗传转化初步研究
tII基因编码潮霉素磷酸转移酶，转移到植物细胞后可赋予对潮霉素的抗性，用于抗性组织的筛选[9]。在栎类树种中，Vidal等以Quercus robur的叶片诱导的体胚作为农杆菌介导的转化受体，成功实现植株再生[10]。Álvarez等建立了成龄欧洲栓皮栎（Quercus suber）的遗传转化系统，获得了43%的转化率[11]。而栓皮栎的遗传转化研究较少。本研究以栓皮栎体细胞胚胎发生为受体系统，研究影响农杆菌介导遗传转化的关键因素，为利用基因工程对栓皮栎进
西南林业大学学报 2021年5期2021-10-21
- 抗生素对刺芹侧耳菌丝生长的影响
、头孢噻肟钠、潮霉素等抗生素的敏感性是运用该技术的关键，而且选择合适的筛选标记基因以及抗生素浓度对提高转化效率都具有很大的影响。在此背景下，笔者拟在根癌农杆菌介导的刺芹侧耳的遗传转化研究中，对常用抗生素对刺芹侧耳菌丝生长的影响进行研究和探索，以期为进一步建立并优化根癌农杆菌介导的刺芹侧耳的遗传转化体系提供理论基础。现将相关试验结果报道如下。1 材料与方法1.1 供试菌株和试剂供试菌株为刺芹侧耳“国森一号”菌丝体，保藏于上海市农业科学院食用菌研究所。供试抗生
上海农业科技 2021年2期2021-04-09
- 鸡爪槭金陵丹枫组培再生体系的建立
对羧苄青霉素和潮霉素的敏感性，筛选获得羧苄青霉素的临界值为300～400mg/L，潮霉素的临界值为2.5mg/L。关键词：金陵丹枫;再生体系;羧苄青霉素;潮霉素中图分类号：S792.350.5文献标志码：A文章编号：1002-1302（2021）01-0054-05作者简介：朱璐（1987—），女，山东淄博人，博士，助理研究员，研究方向为鸡爪槭遗传育种。E-mail：luzhu@jaas.ac.cn。通信作者：李倩中，研究员，研究方向为槭树新品种选育及种质
江苏农业科学 2021年1期2021-03-15
- 根癌农杆菌介导的少孢节丛孢菌遗传转化体系研究
ma公司产品；潮霉素，Roche公司产品；其他化学试剂均为国产分析纯；LB培养基、PDA培养基、基础培养基(MM)、诱导培养基(IM)及共培养基(CM)按照常规方法制备。1.1.3 主要仪器设备 恒温摇床(ZHWY-2102C)，PCR仪(TC4000)，真菌培养箱(MJX280)，恒温培养箱(HIQ-X100)，振荡培养箱(ZHWY-2102C)，常规离心机(Beckmanmicrofuge16)，琼脂糖水平电泳仪(DYCP-31DN)，凝胶成像仪(Bi
动物医学进展 2021年2期2021-02-07
- GFP标记的4种链格孢菌对枣树的侵染研究
试剂和培养基：潮霉素B、卡那霉素、利福平、氨苄青霉素、链霉素的浓度分别为10、50、20、100、100 mg·mL-1，乙酰丁香酮（AS） 0.2 mg·mL-1；以IM 为培养基[28]，以LB 为液体培养基[29]。供试植物：枣树，栽培于河北农业大学苗圃。1.2 方 法1.2.1 4 种链格孢菌对潮霉素B 的敏感性的测定采用生长速率法分别测定供试的4 种链格孢菌对潮霉素B 的敏感性。分别将ZN01、ZN02、ZN03 和ZN-XR 这4 种链格孢菌置
经济林研究 2020年2期2020-07-01
- 小球藻的沼液驯化、抗生素敏感性分析和选择标记筛选
、氨苄青霉素、潮霉素的敏感性，筛选小球藻基因工程选择标记的抗生素。1 实验1.1 水样、试剂与仪器按GB/T 1.1-2009方法采集石家庄民心河、邢台小黄河、衡水盐河、保定府河、邯郸沁河的夏季(6月)水样。DNA提取试剂盒、胶回收试剂盒，OMEGA BIO-TEK公司；G418、氨苄青霉素、潮霉素，索莱宝公司。自动细胞计数仪，Countstar公司；GeneAmp®9700型PCR仪；DYY-6D型电泳槽，北京六一仪器厂；UV752N型紫外可见分光光度计
化学与生物工程 2020年4期2020-05-08
- 黄梁木遗传转化受体系统对筛选物敏感性研究
物的卡那霉素和潮霉素，以及抑菌剂头孢霉素，在对筛选物较敏感的诱导不定芽分化和生根阶段，进行敏感性试验，为后续黄梁木遗传转化研究特别是为提高黄梁木耐寒、抗虫的转基因研究奠定基础。1 材料和方法1.1 试验材料、农杆菌株和试剂饱满成熟的黄梁木种子，来源于广西药用植物园本草纲目园区内一株20 a 树龄的健康植株。在超净台上将种子灭菌，转移到无激素的MS固体培养基上培养，25 d 后，切取无菌植株的子叶和胚轴作为不定芽分化诱导材料；生根诱导材料则将无菌植株茎的下部
四川农业大学学报 2020年1期2020-03-19
- 大群体转基因大麦后代快速筛选研究
摘要：以攜带有潮霉素标记基因的RNAi转基因大麦和常规大麦为材料，采用叶片涂抹法进行了潮霉素筛选浓度确定及转基因大麦T2代和回交后代的筛选和PCR检测。结果表明，3 000 mg/L潮霉素连续涂抹3次，5 d后转基因大麦涂抹区域无受害症状，生长受害率显著低于无涂抹处理。潮霉素涂抹检测结果与其PCR检验结果的符合度为96.2%，目的基因筛选准确率可达61.8%。表明所建立的活体幼苗潮霉素叶片涂抹法筛选转基因大麦快速，直观、准确，具有一定可行性。关键词：转基因
甘肃农业科技 2019年8期2019-09-10
- 超高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物肌肉组织中6种氨基糖苷类药物残留
素、壮观霉素和潮霉素B等6种氨基糖苷类药物。该方法操作简便，能大幅缩短检测周期，灵敏度高，还能有效避免七氟丁酸等离子对试剂造成的仪器污染及离子抑制等问题，为动物源性食品中氨基糖苷类药物监控提供快速、准确可靠的定性和定量技术。1 材料与方法1.1 仪器与试剂1.1.1 仪器Aglient 1290超高效液相色谱仪、配有电喷雾（ESI）离子源的AB Sciex Triple Quad TM 5500质谱仪（美国AB Sciex公司）、N-EVAP-24型全自动
饲料博览 2019年5期2019-06-01
- 拟轮枝镰孢ATMT突变体库的构建及分析
和拟轮枝镰孢对潮霉素B（hygromycin B）的敏感浓度；以含有绿色荧光蛋白基因（）、潮霉素抗性基因（）的穿梭质粒为载体，通过ATMT构建GFP标记的拟轮枝镰孢突变体库；利用潮霉素抗性筛选、的特异性引物进行PCR检测和荧光显微镜观察，检测分析T-DNA插入情况及转化子稳定性；从突变体库中随机挑选9个转化子菌株并进行分析，对其产孢量、分生孢子萌发率、致病力等进行测定。【结果】通过农杆菌抑菌试验发现当Cefo/Amp的浓度为150/150 μg·mL-1时
中国农业科学 2019年8期2019-05-08
- 齿毛菌原生质体的制备与转化
株为研究对象，潮霉素B抗性基因Hyg作筛选标记，探究影响齿毛菌原生质体制备及再生的多个重要因素，建立PEG介导的原生质体遗传转化体系，以获得稳定遗传的转化菌株.1 材料与方法1.1 材料齿毛菌Cerrenasp.HYB07菌株，由福建省海洋酶工程重点实验室保藏； pCAMBIA1302质粒，该质粒携带有潮霉素B磷酸转移酶基因(hygromycin B phosphotransferase,Hyg)和绿色荧光蛋白(green fluorescent prot
福州大学学报（自然科学版） 2019年1期2019-01-24
- 虎杖基因PcMYB1真核表达载体构建及遗传转化
n,Kan)，潮霉素(hygromycin,hyg)、PCR产物纯化试剂盒、胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒等均购于宝生物大连有限公司，所用引物和测序服务均由武汉生物工程技术服务有限公司完成。1.2 方法1.2.1PcMYB1基因植物表达载体构建以含有35S启动子的P5002质粒为模板，以含有目的基因PcMYB1的1K-5质粒为模板，设计特异引物经PCR分别扩增虎杖PcMYB1的基因片段与35S启动子片段，回收纯化后分别将其克隆至pUC19的BamHⅠ/Pst
长江大学学报(自科版) 2018年22期2018-12-03
- 灵芝转化体系的建立
6灵芝原生质体潮霉素抗性筛选对灵芝原生质体再生培养基中的潮霉素抗性浓度进行筛选，分别选取浓度值为15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80 mg/mL的潮霉素放入固体MYG培养基中，将制备好的原生质体均匀地平铺到MYG培养基中，5～7 d后观察原生质体再生结果。1.7PEG介导的灵芝原生质体转化灵芝原生质体制备参照试验前期得到的最优灵芝原生质体制备方法进行[14]。取1×106个灵芝原生质体，放入MYG 液体培养基中
安徽农业科学 2018年26期2018-09-19
- 斜纹夜蛾SlSCP-2真核表达载体的构建及对胆固醇的吸收
3组.1.5 潮霉素B筛选浓度确定在转染前对CHO细胞进行剂量反应分析，以确定潮霉素B的最适浓度.细胞对潮霉素B敏感性的测定分别用0，50，100，250，500，750和1000 mg/L 7个不同浓度梯度的Hygromycin B处理相同数目但密度小于25%的CHO细胞，重复3组，每隔24 h观察记录细胞生长状况，直到120 h(约第5天)，收集细胞，用台盼蓝染色法统计3组细胞的死亡率，以杀死所有细胞的潮霉素B最低浓度(500 mg/L)为筛选浓度.2
信阳师范学院学报（自然科学版） 2018年3期2018-08-10
- 小分子海洋抗菌肽鲎素Ⅰ里氏木霉表达系统构建
、氨苄青霉素和潮霉素，均购自Sigma公司；NotⅠ、SfiⅠ酶和X-gal，均购自TaKaRa公司。1.2 方法1.2.1 天然鲎素基因(Tac)序列的人工合成 从GenBank中获得鲎素Ⅰ的碱基序列，根据丝状真菌里氏木霉偏爱密码子优化其序列：在其5′端和3′端分别加上NotⅠ和SfiⅠ酶酶切位点，并补齐宿主中信号肽的部分序列，设计目的基因序列如下：5′-GGCCTTCTTGGCCACAGCTCGTGCTAAGTGGTGCTT-CCGCGTCTGCTAC
江苏农业科学 2018年14期2018-08-08
- CRISPR/Cas9技术编辑新疆甜瓜全缘叶基因
的表达载体带有潮霉素抗性基因，因此，需要对甜瓜耐受潮霉素的最大浓度进行检测，为下一步的实验打下基础。在植物的遗传转化中，抗潮霉素基因是最常用的标记基因之一，由于HPT基因(潮霉素磷酸转移酶基因)片段较小，约只有1.1 kb左右,其很容易与没有选择标记的目的片段结合并导入植物基因组[18]。其毒性机理是通过干扰植物细胞叶绿体和线粒体中的核糖体与延长因子EF-2的结合，从而对肽链的延长进行抑制。当潮霉素抗性基因转化到植株中时，它使转化后的细胞或组织具有对潮霉素
新疆农业科学 2018年2期2018-04-17
- Vasorin基因稳定敲除HepG2细胞株的建立及其生物学功能研究
/Cas9，将潮霉素B的抗性基因插入VASN基因，从而破坏了VASN的读框，使VASN蛋白的表达发生异常；然后再利用潮霉素B抗性筛选获得稳定敲除VASN的HepG2细胞株；进而，利用稳定敲除VASN的HepG2细胞株研究VASN的生物学功能和分子机制。1 材料和方法1.1 材料HepG2细胞由本室保存；表达载体pCas-guide和pSilencer2.1-U6hygro由军事医学研究院郑晓飞教授惠赠；pBackZero-T载体、平末端PCR产物加A试剂盒
生物技术通讯 2018年2期2018-04-09
- 杉木遗传转化中抗生素种类和浓度的筛选
为材料，探讨了潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对其生长的影响以及对农杆菌GV3101的抑菌效果。【结果】潮霉素浓度为40 mg/L和60 mg/L时，杉木嫩芽和茎段培养42 d存活率分别为8.78%、13.97%和7.05%、5.93%，表现出良好的效果；80 mg/L时，其生长完全被抑制。卡那霉素浓度为100 mg/L时，杉木嫩芽和茎段在80 d时存活率仍高达75.04%和80.37%。300 mg/L的抗生素抑菌剂头孢霉素能有效抑制农杆菌GV3101生长，且
四川农业大学学报 2017年2期2018-01-06
- LoxP-Cre重组技术在构建马铃薯光呼吸代谢支路中的应用
农杆菌侵染以及潮霉素筛选，获得了马铃薯转化植株。分子检测表明，转基因植株中3个目的基因在mRNA水平均能得到表达，但在蛋白水平无表达。转基因植株在表型和微型薯的发育上与野生型植株无明显区别，可能原因是由于多基因一次性转化与叶绿体定位的双重要求，增加了马铃薯遗传转化及蛋白有效表达的难度。马铃薯；多基因转化；光呼吸在C3植物中，通过构建光呼吸代谢支路以增加碳同化效率，从而提高生物量，这些支路包括Kebeish支路[1]、Maier支路[2]和Carvalho支
长江大学学报(自科版) 2017年18期2017-11-13
- 土壤中盾壳霉双标记平板计数法的建立及应用
菌转化法构建了潮霉素基因和绿色荧光蛋白基因标记的双标记盾壳霉菌株,并测定转化子的生长速度、产孢量和菌核致腐能力,初步分析了该方法计数土壤盾壳霉的有效性和可行性。结果显示,潮霉素基因和绿色荧光蛋白基因可以稳定地遗传和表达,并且部分转化子生长速度、产孢量和菌核致腐能力与出发盾壳霉菌株JN-CM没有显著差异。加入土壤中的盾壳霉转化子可以在含潮霉素(50 μg/mL)、氯霉素(100 μg/mL)和链霉素(100 μg/mL)的PDA平板培养,杂菌得到充分抑制,呈
植物保护 2017年5期2017-10-09
- 中华结缕草对潮霉素的敏感性研究
)中华结缕草对潮霉素的敏感性研究刘建华1,裴福云1,宋凤鸣1,雷江丽2*(1.广东省深圳市铁汉生态环境股份有限公司,广东 深圳 518040;2.广东省深圳市中科院仙湖植物园/广东省深圳市南亚热带植物多样性重点实验室,广东 深圳 518004)研究了中华结缕草3种不同外植体对不同浓度潮霉素溶液的敏感性。结果表明:中华结缕草不同外植体对潮霉素的敏感性存在差异，其中种子经50 mg/L潮霉素处理3周后,发芽率极显著减少,只有6%;愈伤组织经20 mg/L潮霉素
江西农业学报 2017年9期2017-09-12
- 浮萍遗传转化体系的建立和优化*
入抑菌抗生素和潮霉素，再生培养基是在文献8中的再生培养基中加入抑菌抗生素和潮霉素。1.2.2浮萍转化体系的优化使用不同种类的农杆菌（农杆碱型 EHA105、胭脂碱型 GV3101和C58C1）对浮萍进行侵染，统计侵染3 d后浮萍愈伤的GUS瞬时表达率确定哪种农杆菌对浮萍的侵染效率最高。采 用 0、50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L、200 μmol/L的乙酰丁香酮侵染同一批浮萍愈伤，统计侵染3 d后浮萍愈伤组织的GUS瞬时表达率
生物学通报 2017年1期2017-04-09
- AtDES1基因在大白菜中的遗传转化
mg·L-1的潮霉素作为抗性芽和根的抗生素筛选浓度，转化效率较高，转化率为6%。[结论]抗性植株经PCR和qRT-PCR鉴定表明DES1基因已成功整合到大白菜基因组中且表达量有不同程度的提高。大白菜； 硫化氢； 转化； 转基因植株大白菜(BrassicacampestrisL.ssp.pekinensi)属于十字花科芸薹属，是北方秋冬季主要的蔬菜作物。但近年来由于环境的污染，白菜种植遭受到重金属、干旱和冷冻等多种逆境胁迫的影响，给大白菜生产造成很大损失。运
山西农业大学学报（自然科学版） 2017年3期2017-03-28
- Botryosphaeria dothidea突变体库的构建及分析
blot证明潮霉素B抗性基因整合到B.dothidea基因组中且可稳定遗传。以B.dothideasdau11-126为对照，对526株转化子的菌落形态、生长速率和致病性进行分析，筛选获得了8个变异明显且稳定的突变体，以期为B.dothidea致病基因的分离、克隆和功能鉴定奠定基础。Botryosphaeria dothidea;农杆菌介导转化（ATMT）;突变体;筛选Botryosphaeria dothidea属子囊菌门，葡萄座腔菌属，是引致林果溃疡
山东农业大学学报（自然科学版） 2017年1期2017-03-17
- 金花茶花丝愈伤组织培养及其对抗生素敏感性研究
究了卡那霉素和潮霉素对愈伤组织诱导和增殖培养的影响，为下一步开展金花茶转基因研究提供技术参考。1 材料与方法1.1 试验材料供试金花茶种植于广东省农科院环境园艺研究所山茶种质资源圃。1.2 试验方法1.2.1 外植体表面消毒 试验于2015年1月开始进行，摘取刚刚金花茶露黄、但尚未开放的幼嫩花蕾，在超净工作台上用70%乙醇分别浸泡1、3、5、10、15 min，然后用灭菌水冲洗 3次，用刀片剥掉花瓣和萼片，取出雄蕊，将花丝和花药分别接种到诱导培养基上，25
广东农业科学 2017年11期2017-03-10
- 潮霉素B预混剂的临床驱虫试验研究
318000)潮霉素B预混剂的临床驱虫试验研究费陈忠1，苏世广2，李贵玉3，许月英2，吴昊1，范超1，肖文龙1，薛飞群1*(1. 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241；2. 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所，合肥 230031； 3. 浙江海正药业有限公司，台州 318000)为了解潮霉素B预混剂临床驱除绦虫线虫的有效性和给药时间的合理性，依据兽药临床试验规范，试验选择了蠕虫自然感染皖西麻黄鸡824只，按要求随机分为3组，分别为潮霉素B预混剂治疗
中国兽药杂志 2017年1期2017-02-15
- 菟丝子生防菌“鲁保一号”生物学特性及T-DNA插入突变体库的构建
继代6次培养后潮霉素B抗性稳定，随机挑取的20个转化子均能PCR克隆出潮霉素基因，转化子是由T-DNA插入引起的，且筛选抗性能够稳定遗传。以上研究为后期筛选获得致病力稳定的遗传改良菌株，并进一步应用奠定了基础。鲁保一号；炭疽菌；生物学特性；突变体菟丝子(Cuscutachinensis)是一类恶性寄生杂草[1]，其纤细的茎蔓缠绕在植物的茎秆上，借吸根从植物体内汲取营养物质，主要危害大豆(Glycinemax)、牧草和蔬菜等作物[2-4]。“鲁保一号”是山东
草业学报 2017年1期2017-02-15
- 平菇疏水蛋白Po.hyd基因RNAi载体构建及转化
，该转化子具有潮霉素抗性，且在荧光显微镜下可检测到绿色荧光信号，Po.hyd基因的表达量为野生型的43%，干扰载体T-DNA片段以单拷贝的形式整合在转化子基因组内。糙皮侧耳；疏水蛋白；RNAi；根癌农杆菌介导疏水蛋白（hydrophobin）是表面活性最高的蛋白之一，具有可在临界面形成两性亲和蛋白膜的特殊性质，在食品生产及保藏领域具有广阔的应用前景[1-2]。2009年Cox等[3]将里氏木霉（Trichoderma reesei）的Ⅱ型疏水蛋白HFBⅡ加
食品科学 2016年11期2016-11-12
- 不同抗生素对金发草愈伤组织生长分化的影响
类(卡那霉素、潮霉素、头孢噻呋钠和氨苄青霉素)和浓度对金发草愈伤组织生长分化的影响，来确定适用于金发草遗传转化体系中的抗性筛选剂和抑菌剂。结果表明：(1)金发草愈伤组织对卡那霉素很敏感，且其分化率随着卡那霉素浓度的增加显著减少(P=0.01)。当卡那霉素浓度为10 mg·L-1时，金发草愈伤组织的生长分化受到明显抑制，且有大量的白化苗形成，但分化率仍有36.56%；当卡那霉素浓度为15 mg·L-1时，金发草愈伤组织的分化率为11.94%，只有很少部分的愈
广西植物 2016年10期2016-11-11
- dGFP-GUS基因标记新疆棉花黄萎病原菌的研究
【方法】以带有潮霉素抗性筛选基因的PUCCATPH载体以及pCAMBIA1304载体作为骨架，构建trpc启动子驱动的GFP-GUS基因的新疆棉花黄萎病菌表达载体1304-P-ORF，导入农杆菌GV3101和AGL-1中。通过农杆菌介导(ATMT)法分别转入新疆棉花黄萎病原菌VD-1和VD-278中，对表达效果进行检测。【结果】筛选的潮霉素B浓度为30 μg/mL，农杆菌AGL-1对黄萎病菌的转化效率比GV3101高40%。T0代经含有潮霉素B的PDA培养
新疆农业科学 2016年1期2016-04-13
- PEG-CaCl2介导牛樟芝遗传转化体系的构建
l2浓度。利用潮霉素抗性、绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein，GFP)标记和PCR扩增验证拟转化子。结果表明：新鲜的牛樟芝菌丝体在10 mg/mL溶壁酶溶液中，30℃条件下酶解4 h，原生质体的获得率为3.55×105个/mL；菌丝体和原生质体在潮霉素B浓度分别为60 μg/mL和40 μg/mL时不能生长，最终确定筛选拟转化子的潮霉素B浓度为60 μg/mL；浓度为20%～40%的PEG均可介导牛樟芝原生质体转化，且40%的
贵州农业科学 2016年4期2016-03-01
- 慢病毒介导稳定表达miR-183的人卵巢癌skov3细胞系
，经嘌呤霉素、潮霉素B筛选后获得稳转细胞系，最后用RT-PCR法检测miR-183在转录水平的表达。结果分离培养出稳定高表达和低表达 mirR-183的单克隆细胞株。结论实验成功建立了稳定表达miR-183的 skov3细胞系，为研究miR-183的生物学功能提供了有效的细胞模型。关键词：慢病毒；skov3细胞； miR-183；卵巢瘤作者单位：河南科技大学第一附属医院，河南洛阳 471003卵巢癌是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一，由于其发病十分隐匿，大多数
食管疾病 2015年4期2016-01-20
- 羽衣甘蓝下胚轴农杆菌介导遗传转化体系的优化
化和生根过程中潮霉素B筛选压力，最后对抗性植株进行了潮霉素B筛选基因的PCR检测。结果表明，在MS + 6-BA 5.0 mg/L+AgNO39.0 mg/L培养基中不定芽分化率最高，为84.17%；农杆菌侵染浓度OD600值为0.5、侵染5 min时利于遗传转化，分化率为69.17%；不定芽分化和生根过程中潮霉素B筛选压力分别为4.0 mg/L和30.0 mg/L；潮霉素B筛选基因的PCR鉴定结果，在预期的602 bp处出现了条带，初步证明潮霉素B筛选基
生物技术通报 2015年6期2015-10-27
- RNA干扰技术对犬小孢子菌PQ-LRP基因沉默的研究
克隆位点,引入潮霉素抗性基因,先后构建PUC-PLULT、PCB309-PLULT载体。应用实时PCR方法检测PCB309-PLULT载体对犬小孢子菌PQ-LRP基因表达的干扰作用。结果构建了中间载体PUC-PLUT、PUC-PLULT,并通过PCR、基因测序进行鉴定。成功构建了长为8 825 bp的干扰载体PCB309-PLULT,并通过酶切测定为该目的载体;筛选出犬小孢子菌转化子的潮霉素最佳浓度为300 mg/L;用实时定量PCR方法对犬小孢子菌PQ-
中华皮肤科杂志 2014年8期2014-12-18
- 不同浓度卡那霉素、潮霉素对楸树试管苗生长的影响
隆[7-8]。潮霉素是一种常用的抗性筛选药物，其抗性基因表达产物是一种蛋白激酶，通过磷酸化潮霉素使其丧失活性。由于在真核和原核生物中潮霉素筛选假阳性率低，重复性好，现在通过潮霉素对转基因生物进行筛选已被广泛应用[9-12]。卡那霉素和潮霉素是目前遗传转化体系广泛应用的2 种抗生素。我们进行了卡那霉素和潮霉素对楸树无性系试管苗生长的影响研究，以确定抗生素对楸树茎段分化和生根的敏感质量浓度，建立有效的遗传转化体系，为楸树特性良种的选育与转化提供重要理论和实践指
生物技术通讯 2014年6期2014-11-29
- 籼稻R996转Pi9基因纯系的筛选及稻瘟病抗性鉴定
因植株后代进行潮霉素抗性、GUS染色和PCR检测分析，鉴定出Pi9基因阳性转化子；经稻瘟病抗性鉴定，从T1代符合孟德尔分离比(1∶2∶1)的分离群体中，成功筛选出转Pi9基因的籼稻R996纯系。籼稻R996；Pi9基因；转基因植株；稻瘟病抗性1 材料和方法1.1 材 料R996转 Pi9基因植株；含 Pi9基因植株75–1–127；稻瘟病菌生理小种110–2。1.2 方 法1.2.1 潮霉素抗性筛选选择 T1代符合孟德尔分离比(1∶2∶1)的转基因植株，经
湖南农业大学学报（自然科学版） 2014年6期2014-08-31
- 根癌农杆菌介导的虎杖茎尖转化研究
8 mg/L 潮霉素的培养基上诱导不定芽。利用该体系从 300 块茎尖外植体中共转化获得 15株抗性再生植株，经 PCR 和 Southern 杂交检测，有 6 株虎杖的基因组中已整合进了目的基因。虎杖 茎尖 根癌农杆菌 遗传转化虎杖（Polygonum cuspidatumSieb. et Zucc.）是蓼科多年生草本植物，根或根茎入药。虎杖根中含有大量具有治疗效用的次级代谢物，如白藜芦醇、虎杖苷、蒽醌类等。其中白藜芦醇具有抗肿瘤、抗衰老、保护心血管系统
生物技术通报 2014年2期2014-04-08
- 根癌农杆菌介导的赭曲霉遗传转化体系的建立
为受体菌株，以潮霉素B基因作为筛选标记，成功建立了根癌农杆菌介导的赭曲霉遗传转化体系并对其转化效率的主要影响因素，如农杆菌浓度、孢子浓度、共培养时间和温度等进行了分析。在最佳条件下，转化效率可以达到57个转化子/108个分生孢子。随机挑选的8个阳性转化子10代连续培养结果表明所获得的转化子能稳定遗传。该遗传转化体系的建立为赭曲霉菌株的定向遗传改造提供了重要的操作平台。赭曲霉 根癌农杆菌 转化体系赭曲霉（Aspergillus ochraceus），属于壳霉
生物技术通报 2014年6期2014-03-17
- 向日葵下胚轴遗传转化影响因素的研究
计1.2.1 潮霉素适宜筛选浓度试验将3个向日葵品种的下胚轴作为外植体，接种到含潮霉素分别为0、5、10、15、20mg／L的诱导培养基上培养，每一梯度每一品种接种外植体数10，各4次重复。2～3周后调查下胚轴的分化情况。1.2.2 影响农杆菌转化因素试验实验中设置共培养时间、侵染时间、农杆菌菌液浓度和干燥时间4个因子试验，共培养时间设置5个处理 （1、2、3、4、5d）；侵染时间设5个梯度 （1、5、10、15、20min）；农杆菌菌液浓度A600值分别
河北北方学院学报（自然科学版） 2013年1期2013-10-22
- 根癌农杆菌介导甘蔗遗传转化Bt（cry1Ab）基因
y1Ab，携带潮霉素磷酸转移酶基因（Hpt），以玉米的Ubi-1为启动子。1.1.3 试剂 卡那霉素（Kan）、利福平（Rif）、羧苄青霉素（Car）、乙酰丁香酮（AS）和潮霉素（Hyg）均为Sigma公司产品，Taq DNA聚合酶、dNTP为上海生工产品，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及其它试剂为国产分析纯。1.1.4 培养基 甘蔗植株再生及遗传转化各个阶段的最佳培养基，见表1。表1 甘蔗再生体系建立及遗传转化培养基的组成1.2 方法1.2.1 胚性愈伤的诱导
生物技术通报 2013年2期2013-09-13
- 甘蓝枯萎病菌REMI转化体系的建立
将线性化的含有潮霉素抗性基因的pUCATPH质粒转化甘蓝枯萎病菌A6菌株的原生质体，摸索获得转化子最适的潮霉素筛选浓度以及不同限制性内切酶和酶量对转化效率的影响；利用PCR（polymerase chain reaction）技术对潮霉素抗性转化子进行验证。结果表明转化子的最适潮霉素筛选浓度为50μg／mL；转化效率较高的限制性内切酶为HindⅢ，并且转化效率最高时的酶量为20U。利用该转化体系构建了含1 050个转化子的甘蓝枯萎病菌转化子库，对转化子进行
植物保护 2013年3期2013-08-27
- PEG介导的玉米弯孢叶斑病菌遗传转化
化供体，它具有潮霉素抗性基因（HyB）标记和氨苄青霉素抗性基因（Amp）标记，有HindⅢ等多种限制酶的单酶切位点。1.2 培养基及缓冲液1.2.1 菌丝培养基马铃薯200g，葡萄糖20g，酵母膏15g。1.2.2 原生质固体再生培养基NaNO32g，K2HPO41g，KCl 52g，MgSO4·7H2O 0.05g，FeSO4·7H2O 10mg，蔗糖20g，琼脂18g。1.2.3 酶解缓冲液pH 5.6柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液配制的0.7mol／L K
植物保护 2012年6期2012-09-28
- 稳定表达荧光素酶的nm23-H1表达缺失人肺腺癌细胞株的构建及其体内外活性检测
细胞株中，利用潮霉素B筛选出能稳定表达荧光素酶的细胞株A549/nm23-H1-shRNA-luc。借助活体成像技术，对构建的细胞株进行体内外生物发光检测，为后续转移相关的动物试验的研究奠定好基础。1 材料与方法1.1 材料 nm23-H1表达缺失的人肺腺癌细胞株A549（A549/nm23-H1-shRNA）由本实验室构建；细胞培养基是RPMI-1640（GIBCO）并添加10%的小牛血清（NCS, GIBCO）；质粒表达载体（PGL4.50）购自Pro
中国肺癌杂志 2012年3期2012-09-10
- 转基因及常规水稻穗期对潮霉素的敏感性
314016)潮霉素B是一种氨基糖苷类抗生素，可破坏细胞中核糖体的功能。水稻中潮霉素通过单键细胞叶绿体和线粒体中的核糖体与延长因子EF-2的结合位点，从而抑制肽链的延长，破坏细胞功能，使敏感组织褐化死亡而呈现毒性症状。潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)导入水稻后，使细胞具有了潮霉素磷酸转移酶(HPT)活性，从而可忍耐较高浓度的潮霉素毒性，因此，在水稻转基因育种中，hpt基因已成为最有效的选择基因之一。先期通过农杆菌介导法转育的Bt克螟稻都携带潮霉素抗性基因Hy
浙江农业科学 2012年3期2012-07-31
- 导入抗逆基因的转双抗虫基因741杨的获得1)
因，筛选标记为潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)。1.2 外植体不定芽再生体系的优化选取生长良好、健壮的继代培养试管苗，用解剖刀剪取叶片，在叶片一侧垂直主脉剪1个伤口，然后将其接种于附加不同质量浓度 6－BA(0.1、0.5、1.0、1.5 mg/L)和 IBA(0.05、0.10、0.20 mg/L)的 MS 培养基中，接种时叶正面朝上放置，下表皮与培养基接触。每种培养基接种40个叶片(4个培养皿，每个培养皿接种10块片)，培养温度(25±2)℃，光照强度2
东北林业大学学报 2012年1期2012-06-13
- 玉米弯孢叶斑病菌ATMT转化条件优化及转GFP单孢的获得
［9］，并含有潮霉素B(HyB)和卡那霉素(kan)抗性，由 Marina Franceschetti(john inner Center，UK)惠赠。1．2 主要试剂潮霉素B、头孢噻肟钠、卡那霉素、乙酰丁香酮、MES购自北京鼎国生物技术有限责任公司;其他所用试剂均购于北京万鑫化业商贸中心。1．3 方法1．3．1 头孢噻肟钠对农杆菌抑菌浓度的测定 将农杆菌接种于LB液体培养基中，37℃摇培至OD600约为0．6后，取100 μL分别涂于含有头孢噻肟钠 (0
河北科技师范学院学报 2011年3期2011-10-10
- 一株玉米弯孢叶斑病菌生长缓慢型突变株获得及T-DNA右翼序列分析
μg·mL-1潮霉素的5 mL LB液体培养基中，28℃下震荡培养至对数生长期，得到OD660=0.6的农杆菌菌液；然后取农杆菌菌液250μL，加到新鲜的5 mL LB液体培养基中，28℃下振荡培养过夜至对数生长期，然后在液体IM培养基上诱导培养6 h，将农杆菌菌液浓度调至OD660=0.2备用。取诱导后的农杆菌菌液与萌发分生孢子悬浮液等体积混合，涂布于IM（10 mM glucose）固体培养基的玻璃纸上，在黑暗条件下培养数小时，然后将IM固体培养基上的
黑龙江八一农垦大学学报 2011年3期2011-03-13
- 潮霉素A的生物合成研究进展
253023)潮霉素A是一种天然的抗生素，1953年第一次从吸水链霉菌NRRL 2388的发酵产物中被分离得到［1］，由5-脱氢-α-L-岩藻糖、(E-3-(3，4-二羟苯基)-2-甲基丙烯酸和2L-2-氨基-2-脱氧-4，5-O-亚甲基肌醇3个结构单元组成。早期的研究显示，潮霉素A具有广泛的生物学活性，如抗菌活性［2］(G+、G－)、抗红细胞凝聚活性和抗密螺旋体活性［3］及免疫抑制活性［4］等。进一步的研究表明，潮霉素A抗菌作用机理为其通过与核糖体50S
微生物学杂志 2011年2期2011-01-11
- 农杆菌介导的甜瓜蔓枯病菌遗传转化体系的建立
。本研究以携带潮霉素 B磷酸转移酶基因(hph) 的pBIG2RHPH2作为转化载体，根癌农杆菌C58C1作为转化介体，转化甜瓜蔓枯病菌的强致病菌株DB11。研究发现，甜瓜蔓枯病菌的最优转化体系为：甜瓜蔓枯病菌的分生孢子悬浮液浓度为1×106个孢子/mL，农杆菌悬浮液OD600为0.15，共培养时间48 h，诱导培养基中添加200 µg/mL乙酰丁香酮，选择培养基添加100 µg/mL潮霉素B、200 µg/mL头孢噻肟钠、200 µg/mL氨苄青霉素和2
生物工程学报 2010年6期2010-10-11
- 甘蔗遗传转化中不同阶段潮霉素抗性筛选
因，其选择试剂潮霉素B（Hygromycin B，简称Hyg）与卡那霉素一样，是一种氨基糖苷类抗生素（Gritz and Davis，1983），它来源于链球菌（Streptomyces hygroscopicus），Linda等（1983）从大肠杆菌中克隆出hpt，转化到大肠杆菌和酵母菌中，得到了潮霉素抗性转化子[7]。从1989年开始hpt基因成为主要的筛选标记基因，其编码的潮霉素磷酸转移酶可将磷酸基团共价地加到Hyg的第4位上，通过酶促磷酸化作用而使
中国糖料 2010年2期2010-09-10