高血压脑出血应激性高血糖患者miR-223 HMGB1水平对预后的判断价值

袁咏梅 赵 鑫 刘 畅 杨 宁 徐国卫△

郑州大学附属郑州中心医院 1)急诊科 2)神经内科，河南 郑州 450007

高血压脑出血(hypertensive intracerebral hemorrhage，HIH)具有发病迅速，患者致残和致死率高的临床特点，是常见的非外伤性脑实质内出血[1-2]。HIH患者神经内分泌系统紊乱，相对稳定性失衡，因而常导致患者伴有血糖应急性升高，进一步加重HIH症状，使患者出血率增加、水肿症状加重、致残和致死率升高，严重影响患者的生活质量[3-4]。HIH应激性高血糖患者并发各种感染，导致预后不佳，常出现致残、致死现象[5]。因而探究与HIH应激性高血糖患者预后相关的生物标志物以准确判断患者预后情况，提高患者生存质量意义重大。微小RNA(microRNA，miRNA)一般由21～23个核苷酸组成，参与机体的生理调控进程，研究发现miR-223与缺血性脑卒相关，在糖尿病合并缺血性脑卒患者血清中表达上调[6-7]。血清高迁移率族蛋白B1(High mobility group box-1，HMGB1)与炎症反应相关，可促进相关炎症因子分泌和表达，研究发现HMGB1在脑外伤患者血清中表达上调，其水平与脑外伤程度相关[8-9]。但是miR-223、HMGB1在HIH应激性高血糖患者血清中表达水平及与预后关系尚未可知，因此本研究通过测定HIH患者血清中miR-223、HMGB1水平为预后判断提供依据。

1 资料与方法

1．1一般资料以2017-03—2019-03于郑州大学附属郑州中心医院收治的125例HIH患者为研究对象，年龄48～74(61.09±5.14)岁，其中男69例，女56例。根据血糖水平分为HIH正常血糖组(血糖水平<150 mg/dL)65例，HIH高血糖组(血糖水平≥150 mg/dL)60例[10]。纳入标准：(1)病例资料完整；(2)首次发病且病程不超过2 d；(3)在发病3 d内测定空腹血糖；(4)所有患者及家属知晓本研究。排除标准：(1)合并糖尿病；(2)合并脑疝、脑梗死；(3)合并血液系统疾病。

1．2试剂和仪器主要试剂和仪器TRIzol试剂及反转录试剂盒均购自北京百奥莱博科技有限公司，货号分别为：QN2070-ZOG、ALH266-PTO；miR-223及内参U6引物由安徽通用生物系统有限公司合成；HMGB1 ELISA试剂盒购自上海帛龙生物科技有限公司，货号：ARG81185；Varioskan LUX型多功能酶标仪、SimpliAmpTMPCR仪均购自美国赛飞世尔科技公司。

1．3观察指标收集患者一般资料，比较患者空腹血脂、血糖水平，并进行NIHSS评分[11]，总分为35分，分数越高提示患者神经功能受损越严重。预后良好：患者经治疗后各项体征和症状恢复正常或较之前有大幅度改善，功能改善程度≥20%；预后不良：患者经治疗后症状无明显改善或加重，甚至死亡，功能改善程度<20%。

1．4样品样品采集与保存收集所有患者入院后空腹静脉血6 mL，在4 ℃条件下5 000 r/min离心10 min，离心半径15 cm，取上清置于-20 ℃冰箱中保存。

1．5qRT-PCR法测定患者血清中miR-223水平使用TRIzol试剂提取总RNA，并测定RNA浓度和纯度，逆转录得cDNA，反转录体系：2.5 mmol/L dNTP 2 μL，2 μL 10×缓冲液，0.3 μL RNA酶抑制剂，0.4 μL M-MLV，补加超纯水至20 μL。miR-223上游引物序列：5’-CAGAAAGCCCAATTCCATCT-3’；下游引物序列：5’-GGGCAAATGGATACCATACC-3’。内参U6上游引物序列：5’-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3’；下游引物序列：5’-GGAACGCTTCACGAATTTG-3’。扩增体系：1.0 μL 10×缓冲液，0.4 μL PCR引物，0.5U Tap聚合酶，0.2 μL 2×ROX Reference Dye，0.6 μL MgCl2溶液补加超纯水至8 μL。扩增条件：(95 ℃，3 min，94 ℃，30 s，60 ℃，1 min，78 ℃，30 s)×40个PCR循环，72 ℃，10 min。用2-△△CT法计算miR-223水平。

1．6ELISA测定患者血清中HMGB1水平采用ELISA测定患者血清中HMGB1水平，并按试剂盒说明书严格操作。

2 结果

2．12组一般资料比较HIH正常血糖组及HIH高血糖组在年龄、性别、胆固醇水平、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，在血糖水平、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、NIHSS评分比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组一般资料比较

2．22组miR-223、HMGB1水平比较与HIH正常血糖组相比HIH高血糖组血清miR-223、HMGB1水平显著升高(P<0.05)。见表2。

表2 2组miR-223、HMGB1水平比较

2．3不同预后情况的HIH应激性高血糖患者miR-223、HMGB1水平比较与预后良好组相比，预后不良组患者血清miR-223、HMGB1水平显著升高(P<0.05)。见表3。

2．4miR-223、HMGB1对HIH应激性高血糖患者预后判断价值的分析根据ROC曲线图可得知，miR-223、HMGB1判断HIH应激性高血糖患者不良预后曲线下面积分别为0.84(95%CI：0.721～0.921)、0.81(95%CI：0.687～0.899)，截断值分别为1.67、4.77 ng/mL，根据miR-223、HMGB1截断值作为阳性评判标准，则miR-223判断HIH应激性高血糖患者不良预后的灵敏度为72.73%，特异度为81.48%，准确度为76.67%；HMGB1灵敏度为84.85%，特异度为81.48%，准确度为83.33%。见图1和表4。

表3 不同预后情况的HIH应激性高血糖患者miR-223、HMGB1水平比较

图1 miR-223、HMGB1对HIH应激性高血糖患者预后判断的ROC曲线Figure 1 ROC curve of miR-223 and HMGB1 in prognosis judgment of patients with stress hyperglycemia of HIH

表4 miR-223、HMGB1对HIH应激性高血糖患者预后判断的ROC曲线结果

2．5Logistic回归分析影响HIH应激性高血糖患者预后的因素以HIH应激性高血糖患者预后结果为因变量，以患者LDL-C水平、NIHSS评分、miR-223水平、HMGB1水平作为自变量行Logistic回归分析，结果表明LDL-C水平、NIHSS评分、miR-223水平、HMGB1是影响HIH应激性高血糖患者不良预后的独立危险因素。见表5。

表5 影响HIH应激性高血糖患者预后的Logistic回归分析

3 讨论

HIH患者并发高血糖是临床上常见的现象，在应激状况下机体为保证损伤大脑供能充足，自我调控以提高血糖水平，但是较高的血糖水平会促进神经细胞凋亡，加重脑细胞损伤，增加超氧化物产物水平，加重脑水肿和血水肿症状[12-13]。因此，对HIH患者并发高血糖患者预后判断成为临床上迫在眉睫的问题。

为探究影响HIH应激性高血糖患者预后的影响因素，研究发现，HIH正常血糖组及HIH高血糖组在年龄、性别、胆固醇、甘油三酯、HDL-C水平无差异，而在血糖水平、LDL-C水平、NIHSS评分有差异，提示HIH应激性高血糖会导致LDL-C水平、NIHSS评分升高，此类患者神经功能受损严重。miRNA参与机体生理大部分调控进程，因其独特的调控机制走进了广大研究者们的视线，研究发现miR-223在急性缺血性脑卒中患者血清中水平上调，与NIHSS评分、病情严重程度呈正相关，是其发病的危险因素[14]。随后有研究发现，miR-223可能靶向调控NLRP3表达，通过caspase-1和IL-1β参与脑水肿的炎症反应[15]。本研究发现，与HIH正常血糖组相比，HIH高血糖组血清miR-223水平显著升高，说明miR-223水平与HIH患者血糖升高相关，可能参与血糖升高进程。进一步探究发现，与预后良好组相比，预后不良组患者血清miR-223水平显著升高，说明miR-223水平升高可能是导致患者预后不良的原因。ROC曲线可得知，miR-223判断HIH应激性高血糖患者不良预后曲线下面积为0.84(95%CI：0.721～0.921)，截断值为1.67，说明miR-223在一定程度上预测患者预后情况。HMGB1在HIH炎症反应和免疫调节中发挥重要作用，研究发现HMGB1在缺血性脑卒中患者血清中高表达，可引起内皮及氧化应激损伤，加重患者病情[16]。本研究发现，与高血压正常血糖组相比，高血压高血糖组血清HMGB1水平显著升高，说明HMGB1可能通过某种途径参与调控HIH患者升高进程。从预后角度分析来看，与预后良好组相比，预后不良组患者血清HMGB1水平显著升高，说明HMGB1高表达可能导致患者预后不良。ROC曲线可得知，HMGB1判断HIH应激性高血糖患者不良预后曲线下面积为0.81(95%CI：0.687～0.899)，截断值为14.77 ng/mL，提示HMGB1可判断患者预后情况，具有一定的临床应用价值。Logistic回归分析表明，LDL-C水平、NIHSS评分、miR-223水平、HMGB1是影响HIH应激性高血糖患者不良预后的独立危险因素，提示该类患者平时应定时检查和治疗，制定合理的恢复方案。

miR-223、HMGB1在HIH应激性高血糖患者血清中水平升高，具有一定的预后判断价值，是影响此类患者不良预后的独立危险因素，提示该类患者要定期检查，以免复发，但miR-223、HMGB1参与HIH应激性高血糖的调控机制还有待进一步探究。