肝癌组织中长链非编码RNA SNHG3的表达及临床意义

陈继德

重庆市璧山区人民医院检验科，重庆 402760

长链非编码RNA(LncRNA)为不编码蛋白质的RNA，其具有多种生物学功能，参与肿瘤细胞的迁移、增殖等[1]。既往研究显示，LncRNA与肝癌[2]、肺癌[3]等多种恶性肿瘤相关。有研究报道，LncRNA SNHG3在骨肉瘤[4]、食管癌[5]等肿瘤组织中表达异常。SNHG3位于染色体1p35.3上，本课题组前期利用芯片技术筛选发现，LncRNA SNHG3在肝癌组织中表达上调。因此，为进一步探讨LncRNA SNHG3与肝癌的关系，本研究对94例肝癌患者进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年1月至2021年1月于本院接受手术的原发性肝癌患者94例作为研究对象，均经病理检查证实，且术前均未行放化疗。所有患者对本研究知情，并签署知情同意书。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1标本收集 收集术后肝癌组织及癌旁组织(经病理检查证实为正常肝组织)标本，将新鲜组织标本经冷冻处理后置于-80 ℃冰箱待检。

1.2.2引物设计 委托上海生工生物工程公司合成LncRNA SNHG3及内参GAPDH引物。LncRNA SNHG3上游引物序列为5′-CACGCCACACCUUUCCGGGAGUCACAAACUGGCACUGACUGCUG-3′，下游引物序列为5′-GCAUCAACAACAU GACUCCGGUC-3′；内参GAPDH上游引物序列为5′-TGCGCCGTCAGCCATCA-3′，下游引物序列为5′-AGCACTAATCTGCTGTAGTC-3′。

1.2.3总RNA提取 根据Trizol试剂盒(日本Takara公司)说明书操作，取组织标本50 mg，超声匀浆后，经1‰ 焦碳酸二乙酯(DEPC)水处理后，提取组织标本中总RNA，测定纯度及浓度，另取1 μL RNA样品检测其完整性。

1.2.4逆转录反应 根据逆转录试剂盒(日本Takara公司)说明书操作。总反应体系(20 μL)：1 μL引物，2 μL RNA样品，1 μL逆转录酶，4 μL 5×RT 缓冲液，0.5 μL RNase抑制剂，用不含RNase的H2O补足至20 μL。反应条件：32 ℃ 10 min，42 ℃ 15 min，85 ℃ 1 min，4 ℃ 10 min。将产物置于-18 ℃保存。

1.2.5PCR扩增 采用TP950实时荧光定量PCR仪(日本Takara公司)，按照PCR试剂盒(日本Takara公司)说明书操作。总反应体系(25 μL)：2 μL稀释的cDNA，2 μL上、下游引物，12.5 μL SYBR Premix EX TaqTMⅡ，8.5 μL ddH2O水。反应条件：85 ℃ 5 min，95 ℃ 1 min，60 ℃ 2 min，42 ℃ 30 s，40个循环。

1.2.6相对表达量计算 以GAPDH为内参，采用2-ΔΔCt法计算LncRNA SNHG3的相对表达量。

2 结 果

2.1组织中LncRNA SNHG3的相对表达量 肝癌组织LncRNA SNHG3的相对表达量为(2.23±0.94)，明显高于癌旁组织(0.69±0.21)，差异有统计学意义(t=15.502，P<0.001)。

2.2不同临床特征肝癌患者LncRNA SNHG3相对表达量比较 不同美国癌症联合会(AJCC)分期、淋巴结转移情况肝癌患者肝癌组织LncRNA SNHG3相对表达量比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 不同临床特征肝癌患者LncRNA SNHG3相对表达量比较

2.3LncRNA SNHG3诊断肝癌的ROC曲线 LncRNA SNHG3诊断肝癌的曲线下面积(AUC)为0.803(95%CI：0.711～0.936，P<0.05)，诊断特异度为82.61%，灵敏度为89.77%。

3 讨 论

LncRNA为不编码蛋白质的RNA，其可在多个层面上调控基因的表达[6-7]。最近研究显示，LncRNA在肿瘤细胞迁移、侵袭等过程中发挥调控作用，LncRNA与肿瘤的关系已成为临床研究的热点[8]。既往研究显示，LncRNA参与肝癌的发生、发展过程，且与肿瘤患者预后密切相关[9]。姚敬等[10]研究指出，肝癌细胞中LncRNAFEZF1-AS1的上调表达可促进肝癌细胞的增殖，增强肝癌细胞的侵袭、迁移能力。张杨等[11]研究显示，LncRNA ST8SIA6-AS1在肝癌组织中表达上调，其可通过调节miR-142-3p促进肝癌细胞侵袭、增殖。李菠等[12]研究发现，LncRNAHOXA11-AS在肝癌组织中表达上调，其可能参与肝癌的发生、发展。本课题组前期利用芯片技术筛选发现LncRNA SNHG3在肝癌组织中表达上调。因此，推测LncRNA SNHG3可能与肝癌的发生、进展相关。

本研究结果发现，肝癌组织中LncRNA SNHG3的相对表达量明显高于癌旁组织，提示肝癌组织中LncRNA SNHG3呈高表达。郭晓锋等[13]研究显示，食管鳞状细胞癌组织中lncRNA SNHG3表达升高，且其表达水平与癌细胞分化程度、淋巴结转移、临床分期明显相关。谷建斌等[14]研究显示，LncRNA SNHG3在胃癌组织中的表达量较高，且其与胃癌的发生、进展有关。另有研究报道，LncRNA SNHG3 在前列腺癌细胞系中呈高表达，其可通过“海绵样”作用抑制miR-577水平而上调 SMURF1的表达来加速前列腺癌进展，其可能成为前列腺癌的生物标志物[15]。另外，有研究发现，LncRNA SNHG3可通过调控miR-758-3p/SRGN轴促进急性髓系白血病细胞生长[16]。由以上研究可知，LncRNA SNHG3在多种恶性肿瘤组织中表达异常，推测其可能参与肿瘤的发生、进展过程。

本研究结果显示，AJCC分期高、发生淋巴结转移的肝癌组织LncRNA SNHG3的相对表达量明显升高，提示LncRNA SNHG3的表达与肝癌的发生及转移有关，其可能在肝癌中发挥促癌作用。既往研究显示，LncRNA SNHG3的高表达与肝内胆管癌患者预后明显相关，LncRNA SNHG3是预测肝内胆管癌患者预后的独立生物标志物[17]。另有研究发现，LncRNA SNHG3可通过调节miR-384/HDGF轴加速胶质瘤进展，敲低SNHG3可诱导细胞凋亡，抑制肿瘤的增殖和侵袭[18]。本研究中ROC曲线分析结果显示，LncRNA SNHG3诊断肝癌的AUC为0.803(95%CI：0.711～0.936，P<0.05)，诊断特异度为82.61%，灵敏度为89.77%。本研究结果提示LncRNA SNHG3诊断肝癌的特异度、灵敏度较高，其在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用，可能成为肝癌临床诊断标志物。据此推测LncRNA SNHG3在肿瘤组织中发挥促癌作用。

综上所述，肝癌组织中LncRNA SNHG3呈高表达，其可能与肝癌的发生、发展有关。