血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白在AP患者中的变化及其意义

王长起 李凯 索胜利

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）的发病率维持在（217～383）/1万人左右[1]，在具有不良饮食习惯或者局部胆道系统疾病的人群中，AP的发病率进一步的上升。AP的发生能够导致患者多器官功能衰竭的发生，增加患者的临床预后恶化的风险[2]。生物学因子的改变能够导致胰腺导管上皮细胞的损伤，增加腺体导管的张力，促进胰消化酶对于自身组织的损伤。在胰腺导管破裂的过程中，淀粉酶的释放能够为早期诊断AP提供重要的参考，同时上升的淀粉酶还能够参与到AP患者局部胰腺组织损伤和炎症反应的扩散过程中[3]；C反应蛋白（C reactive protein，CRP）的上升能够诱导下游单核细胞或者巨噬细胞上调，促进炎症因子IL-8对于胰腺组织的浸润过程[4]；胱天蛋白酶募集域蛋白9（caspase recruitment domain protein 9，Card9）的上升能够诱导炎症信号通路的激活，参与到AP患者的病情进展过程中[5]。为了揭示血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白在AP患者中的变化及其意义，本次研究探讨了不同指标的表达特点及其与患者病情的关系，从而为临床上AP患者的诊疗提供定量化参考指标。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取南阳油田总医院2014年6月至2016年12月确诊的128例AP患者为AP组、年龄及性别相匹配的健康自愿者64例为对照组。AP组的年龄27～65岁，平均（39.9±11.5）岁，男性70例、女性58例，其中轻症AP患者96例（Ranson评分＜3分）、重症AP患者32例（Ranson评分≥3分），入院时AP患者的Ranson评分（1.59±0.72）分。对照组的年龄25～65岁，平均（41.4±14.0）岁，男性37例、女性27例。两组研究对象的年龄、性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

纳入标准：①AP患者的诊断及病情分级标准参考中华医学会制定的《急性胰腺炎诊治指南2014年版》标准[5]；②患者年龄范围19～65岁；③患者入院后接受内科治疗；④入院后24 h内完成本研究相关标本的采集，本研究获得研究对象或其家属的知情同意。排除标准：①胰腺癌；②伴有其他部位恶性肿瘤；③伴有免疫性疾病；④伴有感染性疾病；⑤长期酗酒、慢性肝肾功能疾病。

1.2 血尿淀粉酶、CRP检测方法

清晨采集空腹静脉血，1000r/min离心10min，分离采集上层血清，采集标本后检测血尿淀粉酶、CRP。采用全自动生化分析仪（美国雅培i2000）及试剂盒，检测试剂盒购自福建新大陆生物技术有限公司。

Ranson评分系统包括入院时的5项临床指标和48h的6项指标，各项分别为1分，合计11分，评分在3分及以上时即为重症胰腺炎（Severe acute pancreatitis，SAP）。

1.3 Card9蛋白的检测

清晨采集空腹静脉血5mL，加入Card9蛋白抗体，PBS液体洗涤5min。按照1∶500的比例加入羊标志的一抗5mL，4℃放置过夜，PBS缓冲液洗涤3次，每次5min，加入鼠来源的二抗（1∶1000）2 mL，室温放置2 h，PBS液体洗涤5min。加入显色底物，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在450nm处测OD值。

1.4 统计学方法

采用SPSS16.0统计软件，计量数据表述采用（±s）表示，数据统计分析采用t检验；计数资料用（%）表示，采用χ2检验；相关性分析采用Pearson线性相关分析法；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比较

入院后AP组患者的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平均显著的高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 不同病情程度的AP患者血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比较

重症AP组患者的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平均显著的高于轻症AP组患者，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.3 血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白与Ranson评分的相关性分析

128例AP患者，入院48h后Ranson评分为（2.11±0.80）分，血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平与Ranson评分均呈显著的正相关关系（P＜0.05），见表3。

表1 两组的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比较[（n，（±s）]Table1 Comparison of blood urease amylase，CRPand Card9 protein levels in two groups[（n，（±s）]

表1 两组的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比较[（n，（±s）]Table1 Comparison of blood urease amylase，CRPand Card9 protein levels in two groups[（n，（±s）]

组别AP组对照组t值P值n 128 64血淀粉酶（U/L）834.6±149.271.2±17.8 40.7360.000尿淀粉酶（U/L）2115.8±251.8 549.5±106.247.6400.000CRP（mg/L）94.0±26.9 3.2±1.2104.3570.000Card9蛋白（相对表达强度）0.92±0.210.34±0.1120.7020.000

表2 不同病情程度的AP患者血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比较[（n，（±s）]Table2 Comparison of serum amylase，CRPand Card9 protein levels in APpatients with differentdegrees of disease[n，（±s）]

表2 不同病情程度的AP患者血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平比较[（n，（±s）]Table2 Comparison of serum amylase，CRPand Card9 protein levels in APpatients with differentdegrees of disease[n，（±s）]

组别轻症AP组重症AP组t值P值n 96 32血淀粉酶（U/L）767.2±120.71044.2±142.8-10.7200.000尿淀粉酶（U/L）1839.5±239.62559.2±220.4-14.9980.000CRP（mg/L）81.5±21.4120.3±25.0-8.5090.000Card9蛋白（相对表达强度）0.75±0.18 1.15±0.20-10.5850.000

表3 血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白与Ranson评分的相关性分析Table3 correlation analysisbetween serum and urine amylase，CRP，Card9 protein and Ranson score

3 讨论

过度饮酒、胆道系统疾病及遗传易感因素等，均可以促进急性胰腺炎的发生发展，特别是在家族史的患者中，胰腺炎的发病率更高，可较普通人群上升3～4倍。胰腺炎特别是重症胰腺炎的远期生存指标较差，五年生存率不足35%，病死率可达15%以上[6]。通过早期进行诊断，可以提高胰腺炎的病情缓解率，降低病死率，并改善远期临床预后指标。临床上主要采用影像学检查的方式进行筛查，但影像学检查难以在基层医院广泛普及，且检查费用相对较高、检查时间较长，临床应用具有一定的局限性。血清学指标检测具有方便、经济、短期内可反复测量的优点，在消化系统疾病的筛查中发挥了重要的作用。

CRP作为炎症反应蛋白家族成员，其能够在促进氧化应激损伤或者加剧细胞膜的不稳定性等方面发挥了重要作用，CRP蛋白还能够通过影响细胞膜上钙离子通道的开放，进一步加剧胰腺组织的缺血再灌注损伤[7-8]；血尿淀粉酶的改变能够评估患者体内胰腺导管破裂损伤过程中自身消化酶的释放情况，血尿淀粉酶的上升能够在发病早期即可出现显著的改变，同时在评估病情的进展风险方面能够发挥一定的作用[9-10]；Card9蛋白的表达能够诱导体内的炎症信号通路的激活，提高NF-KB的激活程度，增加MAPK信号通路激活过程中炎症因子的合成和释放[11-12]。基础领域相关的研究还显示，Card9蛋白能够影响诱导巨噬细胞的激活，促进下游炎症性细胞对于胰腺组织的浸润。目前临床上多数研究探讨了CRP或者血尿淀粉酶在AP患者中的高表达情况，认为血尿淀粉酶或者CRP的上升与AP患者的病情密切相关，但对于Card9蛋白的分析研究较少。

本次研究分析了AP患者血清中相关生物学指标的表达，发现血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白均明显的上升，高于正常对照人群血清学指标，提示了血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白均可能影响到AP的病情发生和进展过程，荟萃国内外相关文献，笔者认为血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白的上升主要与下列几个方面的因素有关[13-14]：①血尿淀粉酶的上升主要考虑与胰腺导管的破坏导致的自身消化酶的释放有关；②CRP的上升主要由于自身组织损伤过程中诱导的炎症因子的富集过程有关，消化酶对于自身胰腺组织的破坏和分解作用，能够诱导单核细胞的激活，提高CRP的合成和释放的速度；③Card9蛋白是重要的炎症信号通路因子，其对于MAPK信号通路的激活，能够诱导钙离子负载效应，增加胰腺上皮细胞膜完整性的破坏，并能够诱导线粒体的损伤。王海等[12]研究者发现在AP中，CRP的上升幅度可超过28%，特别是在合并有自身基础性疾病的AP患者，CRP的上升更为明显，远期的多器官功能衰竭或者病死率均可进一步的上升。在不同病情的AP患者中，病情较重的AP患者中，血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白均可进一步的上升，提示了不同指标与AP患者的病情密切相关，这主要由于在腹膜损伤、胰腺组织破坏和继发性的炎症瀑布反应过程中，机体应激状态下的肾上腺髓质系统可显著的激活，巨噬细胞或者间质细胞释放CRP、Card9蛋白的速度可显著的上升。但部分学者并未发现Card9蛋白的表达与AP患者的病情程度具有线性的关系，这可能与Card9蛋白的检测时机或者AP病情的评估标准的不一有关。AP的病情严重成分评分（Ranson评分）是评估患者预后的重要体系，相关关系分析可见，血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平与Ranson评分均呈显著的正相关关系，提示了血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白与AP的病情具有一定的相关性。

本次研究的创新性在于探讨了Card9蛋白的表达与AP患者的临床病理特征的关系。综上所述，AP患者血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平升高显著，并且与病情的严重程度具有一定的相关性。