慈姑组培苗规范化生产技术规程

林志城 高美萍 江文

慈姑 （Sagittaria sagittifoliaL.） 是泽泻科（Alismataceae）慈姑属宿根性水生草本植物，原产中国。慈姑营养价值高，富含淀粉、蛋白质、多种维生素和钾、磷、锌等元素，对人体机能有调节促进作用；此外，还具有很高的药用价值，中医认为慈姑性味甘平、生津润肺、补中益气，因此慈姑不但营养价值丰富，还能够败火消炎，辅助治疗痨伤咳喘。慈姑为穗状花序，雌雄异花，且雄花雄蕊多数，结实后只能形成瘦果，采用种子繁殖自然条件下很难发芽，成苗困难且当年只结细小球茎。为此，长期以来，农民在种植生产上均采用球茎自留自繁自种，导致原有的慈姑品种种性退化，易受病虫侵害，球茎小，产量低，品质差，严重阻碍慈姑产业健康持续发展。

组培苗因其种质纯正，生长整齐健壮、管理方便、易获优质高产、可有效解决种源带病及品种退化问题，在生产上日益得到广泛应用。然而由于各生产单位慈姑组培苗的生产技术不同，生产管理不一，产品标准不规范，造成产品良莠不齐，给种植户带来损失的事件屡有发生。通过制定慈姑组培苗生产技术规程，规范慈姑组培苗生产技术、工艺及过程，可达到提高效益的目的，同时使慈姑组培苗生产技术及产品质量有标准可依，以确保供给种植户使用的组培苗品种纯正、遗传性稳定、品质优良，使种植户获得增产增收。本标准的制定，将从源头上为确保繁育的慈姑组培苗实现优质、安全和稳定可控提供技术支撑，对发展慈姑规范化大规模种植、促进广西慈姑产业持续发展具有现实的指导意义。

1 范围

本标准规定了慈姑组培苗生产的术语和定义、生产设备和化学试剂、消毒灭菌操作、培养室环境控制、生产操作、组培苗变异筛选及控制、组培苗质量要求、生产管理规章制度等技术要求。

本标准适用于广西境内慈姑组培苗的生产。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T 2306花卉种苗组培快繁技术规程

DB45/T 1655芋头组培苗生产技术规程

表1 慈姑组培苗生产常用植物生长调节剂浓度及配制方法

3 术语和定义

下列术语与定义适用于本文件。

3.1 顶芽

着生在球茎上部的芽。

3.2 外植体

球茎顶芽和匍匐茎的顶端生长点。

3.3 变异株

在组培生产过程中受到种源纯度、培养基、培养条件等因素的影响，组培材料或生产出的组培苗植株以及移栽到大田生长的植株遗传特性发生明显变化，其形态特征如叶色、叶形、球茎大小、形状、植株高矮等也显著区别于原品种植株。

4 生产设备和化学试剂

生产设备、化学试剂及灭菌操作均按NY/T 2306执行。

5 培养室环境条件的控制

5.1 温度

培养室温度应控制在 （26±2）℃，可根据培养材料所需的最适温度进行调节。广西夏季气温高，须有空调系统控温，保持室内环境稳定。

5.2 湿度

培养室保持70%～80%的相对湿度，广西春夏季空气湿度大，培养室应放置除湿机。

5.3 光照

一般培养室光照强度控制在 1 500～3 000 lx， 以每天 12～16 h为宜；须根据培养材料需光特性调节光照强度及光照时间；工厂化生产时可考虑利用自然光照以降低成本。

6 生产操作

6.1 培养基配制与保存

根据培养材料品种类型及生长发育特性，选择相应的基本培养基种类和植物生长调节剂种类、浓度、配比。慈姑组织培养常用MS基本培养基，成分参考NY/T 5022-2006《无公害食品香蕉生产技术规程》。制作培养基前需要先配制母液，应用去离子水配制；根据生产情况，可以配制成单一化合物母液或几种化合物的混合母液。植物生长调节物质的母液配制浓度为0.1～1.0 mg/mL，配制方法参见表1。母液配制好后贴上标签，注明名称、配制日期，存放4℃的冰箱中，存放时间不宜过长，一般不超过2个月，发现有不明沉淀、浑浊或变色则停止使用。

根据要配制的培养基的量，分别量（称）取母液、蒸馏水、固化剂和蔗糖等，混合、搅拌加蒸馏水溶解，充分搅拌后，用0.1 mol/L的 HCl或 0.1 mol/L的NaOH 调节pH 值至 5.6±0.2，后用蒸馏水定容。加热溶解后趁热按每瓶（袋）33～40 mL 的量分装至250 mL的培养瓶或100 mm×120 mm聚丙烯培养袋中并封好瓶（袋装消毒盒）盖，经 121℃20 min高压蒸汽消毒，于室温凝固，注明培养基编号及消毒日期，存放3～5 d，选择无菌污染的培养基接种。

6.2 外植体采集与处理

宜选择生长健壮、无病虫害、具有优良品种性状的球茎顶芽作为外植体。

①顶芽外植体 将采集的球茎顶芽或匍匐茎用自来水冲洗2～3遍，剪取所需幼芽茎段（2～3 cm），略晾干。在超净台上，将预处理的慈姑球茎顶芽截取直径 3～5 mm、长 10～20 mm 茎尖段放入烧杯中，用75%酒精处理轻摇 1～2 min，倒出酒精，用无菌水冲洗外植体2～3遍；再用2%次氯酸钠浸泡 10～15 min，然后用无菌水冲洗3～5遍后沥干，封存于经灭菌的培养瓶内供接种用。

②匍匐茎茎尖外植体 在超净台上，将预处理的慈姑匍匐茎截取直径 3～5 mm、长 5～10 mm茎尖段放入烧杯中，倒入75%酒精，轻轻摇晃10～30 s，倒出酒精，用无菌水冲洗外植体3～5遍；再用2%次氯酸钠浸泡8～10 min，然后用无菌水冲洗3～5遍后沥干封存于经灭菌的培养瓶内供接种用。

慈姑组培继代苗

6.3 接种和增殖培养

取经消毒处理的外植体，在无菌垫纸上切取0.3～0.5 mm的茎尖组织。

初代培养（萌发培养）：将切取的外植体，接种在1/2 MS+6-BA 0.5～1.0 mg/L+NAA 0.01～0.05 mg/L+蔗糖30 g/L的萌发培养基上，温度为（26±2）℃，光照1 000～2 000 lx， 每日光照 16 h，7～10 d后，选择无污染且已萌发的外植体再进行分化培养。

继代培养：将初代培养所得丛生芽分切成带有2～3个芽点的小块转接MS+6-BA 2.0～3.5 mg/L+NAA 0.1～0.5 mg/L+蔗糖30 g/L的继代培养基上，温度为（26±2）℃，光照 1 500～3 000 lx，每日光照12 h。根据培养材料的发育及长势，适当调整继代培养基中植物生长调节剂的用量和比例，使增殖系数控制在2.0～5.0。宜以28 d为一个继代周期。

6.4 组培苗的生根培养和炼苗

选择继代培养材料中叶色正常、生长健壮的继代苗，接种在生根培养基上进行生根培养。将分化苗接种在MS+6-BA 0.5～1.0 mg/L+NAA 0.5～1.0 mg/L+蔗糖30 g/L的培养基上生根。放置在温度（26±2）℃，光强 2 000 lx的光照培养室内，培养10～15 d，苗高5～8 cm，茎粗壮，根系发达，即可转移到炼苗大棚培养。慈姑组培苗在光照培养室内培养后，必须转移在常温自然散射光较强的炼苗大棚，炼苗15～30 d后可种植。

7 慈姑组培苗变异筛选及控制

增殖系数控制在2.0～5.0。继代材料不应选用老化的芽或植株；继代次数控制在8代以内。培养基组培继代增殖和生根培养的培养基中，植物激素的浓度应控制为 6-BA≤3.5 mg/L，NAA≤2.5 mg/L。组培苗生产过程中及时淘汰变异株，如失绿、叶片畸形扭曲、分蘖叶片细弱呈丛生状、匍匐茎明显过长、植株矮小、生根数少等的植株。

8 慈姑组培苗质量标准

慈姑组培苗种源来自品种纯正、遗传性状稳定、优质高产的无污染母本园或母株。宜选用通过省级以上的农作物品种委员会审定的品种。慈姑生根组培苗无污染，植株生长形态正常无变异。合格慈姑组培苗的质量要求见表2。

表2 慈姑组培苗分级指标

9 生产记录及档案建立

应建立生产记录档案，生产记录应包括：母液及培养基配制、培养基高压蒸汽灭菌、员工接种、组培材料继代和生根入出库、品种材料生产档案和产品销售情况。

慈姑组培生根苗