仁术健胃颗粒抗胃癌癌前病变的免疫研究

司海鹏 张心海 朱长乐 单兆伟 江苏省中医医院病理科 (南京 210029)

胃癌癌前病变指胃粘膜腺上皮肠化和异型增生,研究认为胃癌源于这些病变,胃癌是严重危害人类健康和生命的常见病、多发病,但其形成需要相当长的演变过程,因此对癌前期病变的研究,无疑对胃癌的防治具有重要的意义。根据前期临床观察,我院研制的仁术健胃颗粒,可以明显降低致癌物造成的损伤,使肿瘤生长得到不同程度的抑制。本文为了进一步探讨仁术健胃颗粒的作用机制,作了如下研究。

临床资料 选择 2005年～2007年在江苏省中医院消化科门诊及住院的患者 86例,随机分为治疗组和对照组。其中治疗组 44例,男 23例,女 21例;平均年龄 48.3± 9.2岁;腺体萎缩伴肠化中度 28例,重度 16例;病程 0.3～20年 ,平均 13.5±9.7年;伴胃溃疡 23例,异型增生 13例。对照组 42例,男 22例,女 20例;平均年龄 47.3±10.1岁;腺体萎缩伴肠化中度 26例,重度 16例;病程 0.4～21年 ,平均 12.5±10.4年;伴胃溃疡 21例,异型增生 11例。两组患者性别、年龄、病程等经统计学处理差异无显著性(P＞ 0.05)。

纳入标准 以新悉尼系统和 2000年 5月全国慢性胃炎会议(井岗山)制定的胃炎分类标准[1],凡符合西医诊断标准和中医辨证标准的中度以上慢性萎缩性胃炎(CAG)伴肠上皮化生或 /和轻、中、重度异型增生者;慢性胃溃疡、胃息肉、残胃炎,年龄在 20～75岁者方可入选。

治疗方法 治疗组给予仁术健胃颗粒(江苏省中医院药剂科提供,批号:031101)由黄芪、白术、莪术、黄芩、薏苡仁等组成,每包 10g,口服每次 1包,3次 /d冲服,3个月为 1个疗程,连服 2个疗程。对照组给予胃复春片 (批号:030408),每片 0.359g,口服 4片 /次,3次 /d,疗程同治疗组。治疗期间停服影响本研究的药物,在治疗前及停止治疗后半个月内行胃镜检。

疗效标准 组织化学染色 以 AB/PAS及AB1.0进行肠化亚型染色,计分以无,Ia+ IIa,Ia+Ib、 IIa+ Ib,Ia+IIb、IIa+ IIb分别记为 1、 2、3、4分。

免疫组化染色 试剂盒均购自福州迈新技术公司,采用 Evision二步法按试剂说明书染色。 P53阳性细胞定位于细胞核,COX-2、MDM2蛋白以细胞浆为主,随机选取 5个区域计数,每区计 100个细胞求阳性细胞平均数: ＜10为(-),＜25为(+ ),＜50为(++),＞ 50为 (+++),分别记为 1、2、3、4分。

统计学方法 采用 SPSS统计学软件,对资料进行 t检验。

治疗结果 两组治疗前后免疫病理积分改善各项比较,治疗组免疫病理中的 COX-2、P53积分与对照组相比,显著增强(P＜0.01,P＜0.05),详见表1、图1。

表1 患者免疫病理积分各项改善情况

患者治疗前后组织化学病理积分改善比较,肠化亚型治疗前病例数差异无统计学意义(P＞0.05);治疗后肠化亚型改善率,χ2=31.00,治疗组优于对照组(P ＜0.01),差异有统计学意义,见表2、图 2。

表2 患者治疗前后肠化亚型改善情况比较(例)

讨 论 现代中医研究认为,气虚、血瘀、热郁是胃癌、癌前变化的病理基础,治当标本兼顾,尤其是益气、活血、清热 ,是阻断和逆转 CAG、胃溃疡、胃癌多因素、多途径癌变的关键。胃复春片常用于治疗胃癌癌前病变、胃癌手术后辅助治疗等。我院研制的仁术健胃颗粒抗胃癌、癌前变化就是体现益气活血清热法的临床运用。如方中的黄芪、白术益气扶正,调节免疫;白术、薏苡仁同用,健脾助运之力可增,同时薏苡仁性平微凉,可减白术温燥之弊,故有扬长补短之功;莪术、白花蛇舌草、半枝莲可清热解毒、活血化瘀;黄芩、仙鹤草有清解郁热之功。

胃黏膜萎缩肠化的分型一般分为不完全性小肠化生(Ⅱ a)、完全性小肠化生(Ia)、完全性大肠化生(Ib)和不完全性大肠化生(IIb)四种亚型,学术界认为 IIb发生胃癌的危险性较大,本文观察到治疗后肠化亚型改善率治疗组明显优于对照组。前期观察[2]治疗组对病理中炎症程度、萎缩、活动度的积分改善均优于对照组;而对 HP感染、异型增生的积分,与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),可见中药仁术健胃颗粒改善临床症状是一大优势。野生型 P53是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因,50%以上的人类肿瘤都可以检测到其突变,突变型 P53获得增殖转化和致瘤潜能。 MDM2是 P53蛋白的负调控因子,当 P53水平增高时,激活 MDM2基因转录并表达,形成 P53-P90蛋白复合物,升高的 MDM2表达过强可封闭 P53介导的反式激活作用,使 P53功能丧失,导致基因的不稳定及细胞增生,参与肿瘤形成。有关MDM2与 P53的相关性有不同报道[3],两组患者经过药物治疗后,MDM2、P53表达较治疗前减少,可能是药物抑制 P53的表达,减少其突变后而引起的生物学作用;同时又活化了野生型 P53,调控胃癌细胞的过度生长、增殖,促进肿瘤细胞凋亡,最终达到抑制 MDM2癌基因的活化和 P53抑癌基因的失活,从而维持 P53基因的稳定性,这与文献的报道[4]相一致。环氧合酶(COX)是前列腺素(PGs)合成初始步骤中的关键限速酶,有二种同工酶,即 COX-1和 COX-2。 COX-1在体内发挥“看家”作用,促使 PGs的合成,以维护自身稳定和调节正常组织细胞的生理活动。COX-2在细胞静息时并不表达,但在细胞受到炎性介质、癌基因产物等因素刺激时在细胞内迅速产生,促进肿瘤血管的形成;改变肿瘤细胞的表型,增加细胞的侵袭力,促进转移[5]。同样治疗前患者 COX-2表达增高,与赵[6]发现在胃癌和癌前病变中 COX-2表达明显高于正常组研究一致,经药物治疗后 COX-2的表达明显下降,患者的症状减轻,胃镜、病理好转,甚至痊愈。说明仁术健胃颗粒能抑制 P53、MDM2等刺激下的 COX-2的异常表达,抑制其催化细胞释放前列腺素 PGE2的活性,减少胃癌血管生成,从而抑制胃癌细胞的增殖作用。现代药理研究结果表明,本品中黄芪、白术、黄芩等可诱生 IL-2、IFN的产生,促进癌前细胞发生凋亡,而黄芪还可刺激机体分泌肾上腺皮质激素,提高机体激素分泌水平,诱导凋亡的发生。

本研究通过免疫组织化学观察胃癌癌前病变患者治疗前后 COX-2、P53、MDM2的表达,发现治疗组COX-2、P53蛋白的表达下降明显优于对照组。但对MDM2表达的下调作用不明显,可能是由于体内存在除野生型 P53以外的刺激 MDM2表达的途径。综上所述,治疗组所用仁术健胃颗粒治疗胃癌癌前病变有效,可能是通过抑制癌基因的活化和抑癌基因的失活;抑制 COX-2对胃癌前细胞的促增殖作用,即仁术健胃颗粒调控了 P53、COX-2和 MDM2相互作用的基因网络。但是胃癌的发生是多阶段、多基因调控的过程,这个网络在胃癌癌前变化向胃癌发展的过程中起着关键的调控作用,必然还有更复杂的分子生物学因素,有待进一步探索。

[1] 贝政平.内科疾病诊断标准 [M].北京:科学技术出版社,2001:258.

[2] 司海鹏,张心海,许红英,等.仁术健胃颗粒抗胃癌癌前病变的病理及免疫研究 [J].福建中医药,2007,38(4):6-7.

[3] 李红伟,纪祥瑞,赵 洁 ,等.P53、P27及 mdm2在胃肠道间质瘤中的表达 [J].滨州医学院学报,2009,32(1):18-21.

[4] 陈艺丹,杨玉珍,宋 娟.Cyclin G1、Mdm2和 P53在胃癌组织中的表达及相关性研究[J].胃肠病学和肝病学杂志,2007,16(2):127-129.

[6] 赵景山.幽门螺杆菌感染与环氧合酶-2表达的关系[J].中国老年学杂志,2008,28(14):1428-1429.