淮安市婴幼儿食品肠杆菌检测及耐药性研究

杭 婧，宋呈文，金 华

（1.淮安市食品药品检验所，江苏 淮安 223300；2.淮阴工学院生命科学与食品工程学院，江苏 淮安 223300）

肠杆菌科细菌是一大群形态、生化反应结果互相接近的革兰氏阴性杆菌。这类细菌多数有周身鞭毛、有动力，生化反应中能够发酵葡萄糖，能够还原硝酸盐，氧化酶试验阴性（邻单胞菌属除外），触媒试验阳性（痢疾志贺菌除外），需要氧气生长，部分在厌氧环境下仍可生长良好，对周围环境营养要求普遍偏低，在普通营养平板上生长良好，在自然界中多种场所均可以生存。绝大部分肠杆菌科细菌寄居在活体生物的肠道内，也可存在于水、土壤或腐败的物质上，多数为条件致病菌，少数为致病菌。与人类感染有关的细菌有肠杆菌属、克雷伯菌属、克罗诺杆菌属、沙门菌属和志贺菌属等[1]。婴幼儿一般指0～36 个月龄的孩子[2]，身体机能尚未发育完善，对外界及疾病抵抗力弱。所以检测婴幼儿食品中的肠杆菌具有重要意义。本文在市场随机购买74 批婴幼儿食品样品，对其中检出的肠杆菌科细菌进行生化鉴定并进行耐药性分析，以了解淮安市婴幼儿食品卫生情况和菌群的耐药情况，为淮安市市场婴幼儿食品监管提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 样品

在淮安市市售婴幼儿食品中随机购买样品，抽样地点主要在超市、大型连锁母婴用品店、个体户母婴店等，共采集74 批婴幼儿食品样品。样品类型主要包括婴幼儿奶粉、婴幼儿饼干、溶豆、婴幼儿肉松、营养米粉、营养米乳、婴幼儿小面条等。产品品牌包括中国、法国、韩国、日本等，上述购买的试验样品均为包装食品且均在保质期内。

1.2 培养基与试剂

缓冲蛋白胨水BPW（批号：1115875）、胰蛋白胨大豆培养基（批号：1114302）、阪崎肠杆菌显色平板（批号：CRM006B）、大肠菌群大肠杆菌显色培养基平板（批号：M0216Y）、氯化钠（AR，批号：20210926）、血琼脂平板（批号：M1864Y），均购于广东环凯公司；革兰氏阴性细菌鉴定板（批号：2242024）、革兰氏阴性细菌鉴定/药敏板（批号：448505）、药敏接种培养液（批号：2174615）、接种培养液（批号：2203381）、药敏指示剂（批号：2178523），均购于美国BD 公司。

1.3 仪器设备

洁净工作台（BCM-1600A，苏州安泰空气技术有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（101-3，上海跃进有限公司）；SPX-350 型生化培养箱；高压蒸汽灭菌锅（MLS-3781L-PC 型，松下）；均质器（BagMixer 400CC，法国interscience）；全自动微生物鉴定药敏分析仪（PhoenixTM M50，美国BD）；生物显微镜（OLYMPUS，日本Olympus）；生物安全柜（BSC-1304IIA2，苏州安泰空气技术有限公司）；电子天平（PL6001，梅特勒公司）。

1.4 实验方法

1.4.1 肠杆菌的分离和鉴定

因肠杆菌科无统一的方法检测标准，故参照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016）[3]进行肠杆菌鉴定试验。在生物安全柜内无菌操作，称取试验样品至缓冲蛋白胨水稀释培养液中，经36 ℃培养24 h 后划线于阪崎肠杆菌显色平板、大肠菌群大肠杆菌培养基显色平板分离单菌落，菌落经纯化后用接种环挑取单菌落至细菌鉴定培养液，用比浊仪把菌悬液浓度调整至0.5 麦氏单位菌液浓度后倒入阴性鉴定板条，盖上板条塞，及时放入细菌鉴定仪进行鉴定，最终鉴定可信值在90%以上为可信结果。

1.4.2 肠杆菌药物耐药试验

采用美国临床实验室标准化协会的微量肉汤稀释法对本文检出的肠杆菌进行耐药试验，主要检测样品中检出的肠杆菌对19 种药物的最小抑菌浓度，依据临床和实验室抗菌药物敏感性测试标准CLSIM100-S30-2020[4]进行结果判读。

2 结果与分析

2.1 肠杆菌定性检测情况

74 批婴幼儿食品中肠杆菌科菌种检出4 批次，检出率为5.4%。淮安市婴幼儿食品中检出肠杆菌的样品信息以及淮安市婴幼儿食品中肠杆菌生化反应结果分别见表1 和表2。

表1 淮安市婴幼儿食品中检出肠杆菌的样品信息表

表2 淮安市婴幼儿食品中肠杆菌生化反应表

2.2 肠杆菌耐药试验检测结果

阿米卡星、庆大霉素、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林-他佐巴坦钠、黏菌素、氯霉素、复方新诺明、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、四环素敏感率100%，对头孢唑林、氨苄青霉素、氨苄青霉素-舒巴坦、阿莫西林克拉维酸盐敏感率分别为50.0%、75.0%、50.0%、75.0%。淮安市婴幼儿食品肠杆菌最小抑菌浓度检测结果见表3。

表3 淮安市婴幼儿食品肠杆菌最小抑菌浓度检测结果表

3 结论与讨论

本文检出3 株菌种均属于肠杆菌科，阪崎肠杆菌原属于肠杆菌属，后来单独分离出来为克罗诺杆菌属。肺炎克雷伯杆菌和阴沟肠杆菌是人体肠道中的正常菌群，属于条件致病菌，在身体机能下降时可发生某种疾病。阪崎肠杆菌（克罗诺杆菌属）是婴幼儿疾病的重要病原菌之一，可引起婴幼儿脑部炎症、肠炎、神经系统病变等。此菌一旦入侵婴幼儿脑部和肠段，致死率可高达50%[5-6]。

目前最新的《食品安全国家标准 预包装食品中致病菌限量》（GB 29921—2021）只对0～6 月龄婴儿配方食品和特殊医学用途婴儿配方食品明确要求检测阪崎肠杆菌。本文检出携带肠杆菌的样品均是适合6 月龄以上婴幼儿食用，且主要集中在婴幼儿谷物食品以及婴幼儿小面条食品两大类。所以除了对6 月龄以下的婴幼儿食品有具体标准限度值外，对6 月龄以上的稍大婴儿及幼儿食品也应该引起相关部门的重视。

本文从19 种药物的耐药情况结果可以看出淮安市婴幼儿食品中肠杆菌的耐药情况确实存在。4 株检出的肠杆菌中有3 株存在耐药或中介的情况，甚至其中有一株阴沟肠杆菌是多重耐药菌株，同时对4 种药物耐药。肠杆菌科耐药机制主要是由于细菌产生染色体或质粒介导的β-内酰胺酶所引起的[7]。国外对于肠杆菌科细菌耐药的严重性也有相关报道[8]。

本次所有检出肠杆菌的样品均为国内厂家和品牌，其中还有人们日常生活中耳熟能详的所谓的“优质母婴品牌”，由此可见“优质品牌”也并非为“优质品质”。这需要消费者在购买婴幼儿食品时更正此类消费观念，更需要市场加强监管。