维生素B6联合卡马西平对癫痫患儿AQP4、GFAP、水平的影响

徐薇薇, 易宗艳, 彭登发

恩施土家族苗族自治州中心医院 1.儿内科,2.外科,湖北恩施 445000

癫痫为临床常见神经系统疾病,由于儿童神经系统尚未发育成熟,因此癫痫在儿童中较为多发[1-2],其治疗多以药物干预为主,但因其反复发作导致整体疗效并不理想[3]。卡马西平是治疗癫痫常用药物,能够对兴奋性神经递质的释放进行阻断,降低对神经系统的损害,缩短癫痫的发作持续时间,但其单独使用疗效有限[4]。缺乏维生素B6的儿童易患癫痫,维生素B6对特发性婴儿痉挛,尤其是癫痫和结节性硬化症疗效显著[5-6]。水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP4)被认为与中枢神经系统癫痫、脑水肿、脑卒中等密切相关。胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)为胶质细胞所特有的结构蛋白,具有营养神经、维持胶质细胞结构完整等作用。核氨基丁酸B受体亚单位1(nuclear aminobutyric acid B receptor subunit 1,GABABR1)基因可能为癫痫的一种易感基因。因此,本文采用维生素B6联合卡马西平对癫痫患儿进行治疗,观察其治疗效果及对患儿AQP4、GFAP、GABABR1水平的影响,为临床提供参考。

1 资料和方法

1.1 研究对象

选取本院2019年2月—2020年7月治疗的癫痫患儿144例,随机均分为卡马西平组和联合组。卡马西平组男44例,女性28例,年龄(10.2±2.8)岁;病程(1.5±0.8)年,发作频率(4.5±1.1)次/月,其中原发性癫痫48例,继发性癫痫24例;强直性发作21例,复杂部分性发作31例,阵挛性发作20例。联合组男43例,女29例,年龄(10.5±3.2)岁;病程(1.3±0.7)年,发作频率(4.7±1.2)次/月,其中原发性癫痫45例,继发性癫痫27例;强直性发作23例,复杂部分性发作28例,阵挛性发作21例。两组患儿一般资料比较差异无显著性(P>0.05)。本研究获得本院伦理委员会批准,所有患儿或家属均知情同意。纳入标准:①符合国际抗癫痫联盟对小儿癫痫相关诊断标准[7],且经过脑电图及临床表现明确诊断为癫痫;②经头颅CT检查明确无脑内血管畸形、占位性病变。排除标准:①合并其他全身免疫系统疾病或感染性疾病;②一般资料不完整;③肿瘤;④严重心、肝、肾等重要脏器损伤;⑤具有精神性疾病遗传史或个人史;⑥具有本研究药物禁忌证。

1.2 治疗方法

两组均进行常规食物干预,确保研究无干扰因素。卡马西平组口服卡马西平(上海复旦复华药业,国药准字H31021366),15 mg/kg,1次/天,连续6个月。联合组在卡马西平组基础上口服维生素B6片(辰欣药业股份有限公司,国药准字H3702185),0.5～1.0片/天,根据病情调整,连续3周后停药3周,再继续给药3周,共治疗6个月。

1.3 疗效评价

对两组疗效进行评价,显效为经脑电图检测显示结果正常,癫痫症状完全消失;有效为癫痫发作得到基本缓解,发作次数减少75%以上;无效为癫痫发作未出现明显变化与改善,发作次数减少不足25%。总有效为显效加有效。观察治疗期间两组患儿癫痫发作频率、发作持续时间、不良反应情况(头晕头痛、低钠血症、嗜睡疲劳、共济失调)。

1.4 qRT-PCR检测GABABR1

治疗前后空腹抽取患者静脉血3 mL,3 000 r/min离心10 min后保存待测。提取细胞总RNA,逆转录获得cDNA,以β-actin为内参基因,采用2-ΔΔCt法计算GABABR1表达,PCR引物设计以Primer Premier 6.0软件进行,β-actin上游引物5′-AGAGCTACGAGCTGCCTGAC-3′,下游引物5′-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3′;GABABR1上游引物5′-AACAGTAACACAAACCCATCC-3′,下游引物5′-GCATGTTTGTAGAAGGTGCC-3′。

1.5 酶联免疫法检测TNF-α、IL-2及IFN-γ

碳酸盐缓冲液稀释后加入到反应孔中,行抗原处理,冷藏后次日洗涤,抛干,将待测标本放入每个孔中,同时放入阳性和阴性对照标本,保存,将液体移除后,洗涤并抛干,于每孔内加抗体,保存60 min,移除液体。洗涤后抛干,在每个孔中加低物液,放入邻苯二胺,遮光,再次放入H2SO4终止反应。酶标仪A450值处检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)及γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平[8]。

1.6 免疫组化法检测HMGB1、AQP4及GFAP

以PBS为阴性对照,以CK19>10 μg/L为阳性判断标准,细胞膜或细胞质呈棕黄色或棕褐色为CK19染色阳性信号。将组织蜡块切块,厚度4 μm,常规脱蜡、脱水,进行抗原修复,滴加细胞间黏附分子-1一抗,4 ℃置放12 h,2次PBS清洗,滴加聚合酶辅助剂,37 ℃水浴20 min;2次PBS清洗,滴加IgG多聚体。37 ℃水浴30 min,检测HMGB1、AQP4及GFAP水平。

1.7 言语智力、操作智力的评估

应用中国版韦氏儿童智力表对患儿智力情况进行测量[9],分别为言语测试与操作测试,其中言语测试主要包含常识、理解、背数等,操作主要包括积木、拼图、排列等,结果以年龄进行效正,得出言语智力及操作智力。分数越高,改善效果越好。

1.8 统计学处理

2 结 果

2.1 两组发作频率、发作持续时间及GABABR1的比较

与卡马西平组比较,联合组发作频率、发作持续时间降低,GABABR1水平升高(P<0.05;表1)。

表1 两组癫痫患儿发作频率、发作持续时间及GABABR1水平的比较(n=72)

2.2 两组言语智力、操作智力的比较

治疗前两组患儿言语智力、操作智力比较差异无显著性(P>0.05);治疗后与卡马西平组比较,联合组言语智力、操作智力均较高(P<0.05;图1)。

图1 两组癫痫患儿言语智力、操作智力的比较a为P<0.05,与卡马西平组治疗后比较。

2.3 两组TNF-α、IL-2、IFN-γ、HMGB1、AQP4及GFAP的比较

与同组治疗前比较,两组患儿TNF-α、IL-2、IFN-γ、HMGB1、AQP4及GFAP水平均降低(P<0.05);且联合组上述指标水平降低更显著(P<0.05;表2)。

表2 两组癫痫患儿TNF-α、IL-2、IFN-γ、HMGB1、AQP4及GFAP的比较

2.4 两组治疗总有效率和不良情况的比较

与卡马西平组比较,联合组治疗总有效率较高(P<0.05;表3)。卡马西平组和联合组头晕头痛、低钠血症、嗜睡疲劳、共济失调分别为4、3、3、2例和1、0、2、1例,联合组不良反应总发生率低于卡马西平组(5.56%比16.67%,P<0.05)。

表3 两组癫痫患儿治疗总有效率的比较(n=72) 例(%)

3 讨 论

癫痫是儿科常见疾病,寻求其更加安全且有效的方案对治疗小儿癫痫具有重要的意义。卡马西平是临床常见的治疗癫痫药物,可降低癫痫对神经细胞的影响以及对神经系统的损害[10]。维生素B6能够提高神经兴奋阈值,从而降低癫痫发作次数、缩短癫痫持续时间,提升癫痫治疗效果[11]。

GABA是中枢神经系统中较为重要的抑制性神经递质,在丘脑、基底神经、海马以及小脑等部位广泛分布[12]。维生素B6水平较低可导致GABA水平低下,从而增加癫痫发生风险[13]。本文研究结果说明,维生素B6联合卡马西平对癫痫患儿进行治疗,能够显著改善患儿症状,降低神经元抑制所导致的影响。

儿童时期为脑部发育关键时期,癫痫反复发作能够影响患儿言语及认知发展。相关研究显示,未经药物干预的癫痫患儿,在青年时期就会表现出智力及语言表达能力减退[14]。本文研究结果说明,维生素B6联合卡马西平对癫痫患儿进行治疗,能够提升患儿认知能力,改善患儿行为意识。

TNF-α、IL-2及IFN-γ水平能反映癫痫患儿的炎症反应情况。相比正常人群,癫痫患者炎症因子水平异常,癫痫的发展与体内炎症因子水平呈正相关[15]。在神经元受损后TNF-α、IL-2及IFN-γ释放,进一步导致癫痫病情加重。TNF-α为代表性炎症因子,其水平增加能够促进其他炎症因子如IL-2及IFN-γ的释放。本文研究结果显示,维生素B6联合卡马西平对癫痫患儿进行治疗,患儿TNF-α、IL-2及IFN-γ水平均较低,说明二者联合能够改善癫痫患儿炎症反应。

研究显示,AQP4在脑梗塞、脑肿瘤及视神经脊髓炎等中枢神经系统疾病的发生、发展中具有重要作用[16]。HMGB1能够调节神经细胞分化及细胞迁移,当脑细胞出现损伤时HMGB1释放,进一步加重神经组织的损伤[17]。GFAP为星形胶质细胞特有的中间纤维蛋白,能够对钾离子空间产生缓冲作用,并参与轴信号跨突传递,对血脑屏障的形成进行诱导,同时对神经损伤起到修复作用,当中枢神经系统发生损伤时,星形胶质细胞大量增殖,GFAP含量也随之增加[18]。本文研究结果说明,维生素B6联合卡马西平对癫痫患儿进行治疗,能够改善患儿病情,降低神经系统损伤。

综上所述,应用维生素B6联合卡马西平对癫痫患儿进行治疗,能够显著改善患儿症状,降低神经元抑制功能出现的影响,提升患儿认知能力,改善患儿行为意识与病情,降低炎症反应与神经系统损伤。