XRCC1 TYMS MTHFR基因多态性与结肠癌术后辅助化疗疗效的关系

赵 帅， 陈 静， 闫海洋， 郭 英， 孙静娜， 耿玉兰， 刘佳佳

(河北医科大学第一医院检验中心， 河北 石家庄 050031)

结肠癌作为临床上一类发病率较高的恶性肿瘤疾病，严重威胁着患者的生命健康[1]。因此，安全有效治疗方法对提高或改善结肠癌患者生存期和生活质量至关重要。由MOSAIC所构建的FOLFOX4方案被认为是当前用在Ⅱ、Ⅲ期结肠癌术后的有效辅助化疗方案之一，且以6个周期的治疗为主。然而结肠癌对化疗产生耐药性的风险较高，通过利用有效的预测疗效的分子标记物进行相关研究具有重要意义[2]。本文通过对XRCC1、TYMS、MTHFR基因多态性进行分析，探讨其与结肠癌术后辅助化疗疗效的关系，一方面打破了单一基因多态性研究的局限性，另一方面确保了基因导向性较强的结肠癌个体化药物治疗更加精确，为疗效评估及预后判断提供可靠依据。现结果报告如下：

1 资料与方法

1.1一般资料:回顾性分析我院自2018年5月至2020年1月收治的手术治疗结束后接受6个周期FOLFOX4辅助化疗患者104例的临床资料，其中男54例，女50例，年龄46～71岁，平均(59.25±3.14)岁，TNM分期：Ⅱ期32例，Ⅲ期72例，病变部位：近端结肠61例，远端结肠43例，肠壁浸润深度：黏膜8例，肌层22例，浆膜45例，浆膜外29例，淋巴结转移情况：无淋巴结转移39例，有淋巴结转移65例。纳入标准：全部患者均在我院行临床症状、体征以及病理学检查后确诊，符合《中国结直肠癌诊疗规范(2017年版)》[3]中诊断标准；具有能够测量的实体病灶；进入研究前尚未接受过姑息性治疗或者距本次疾病复发时间在6个月以上；KPS评分≥60分；预计生存期≥3个月；均本次实验知情权同意书。排除标准：仍然有生育计划、或者正在哺乳的女性；对本次辅助化疗药物存在既往过敏史者；存在中枢或者外周神经系统功能障碍者；合并肠梗阻或者肠功能不全者；合并既往良恶性肿瘤性史者；合并其他重要脏器功能障碍或者损伤者；尚未完成个周期的FOLFOX4辅助化疗患者；临床资料缺失者。

1.2方法:全部患者均接受了6个周期FOLFOX4辅助化疗，每个周期的化疗药物组成情况如下：叶酸钙(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H32022390)，静脉滴注，2h，注射剂量200mg/m2，D1、2；氟尿嘧啶(北京紫竹药业有限公司，国药准字H11020069)，静脉推注，注射剂量400mg/m2，D1、2；氟尿嘧啶，持续静脉滴注2h，注射剂量600mg/m2；奥沙利铂(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H20050962)，静脉滴注，注射剂量85mg/m2，D1与亚叶酸钙同时滴入。以连续治疗2周为1个周期，排除无法耐受的毒性反应，或者以及出现疾病进展，全部患者均完成了6个周期治疗。

1.3疗效评价标准:治疗后判断随访2年无病生存率并将其作为疗效评价标准。全部患者的肿瘤组织标本均提取了DNA，并对XRCC1、TYMS、MTHFR基因型进行检测，该检测方法所涉及的荧光染色原为杂交测序试剂由北京华夏时代基因科技发展公司提供。采用TL998A型荧光染色原位杂交测序检验系统对基因型进行检测，在检测时需要直接读取血液白细胞当中的目标单核苷酸多态位点[4]。具体操作方法：抽取全部患者2mL的静脉血，并将其放置在EDTA抗凝管当中，上下颠倒混匀之后，再取100μL之前配置好的NH4Cl预处理液，并将其放置在离心管当中，进行离心处理，离心速度为每分钟3000转，共离心5min。将多余液体吸出之后，向其中加入1mL的生理盐水以此彻底的重悬白细胞，之后在室温环境下再次进行离心处理，离心速度为每分钟3000转，共离心5min。将残余下来的液体吸干净之后，向着富集有白细胞的离心管理中加入100μL的PHARM-GENE 01 SNP 分析保存液，使用移液器对其反复吹待混匀之后，直至无团块状，在室内温度下安静放置20至30min[5]。各自选取1μL之后，在经过上述流程处理后的白细胞样本，分别加入到XRCC1、TYMS、MTHFR PHARM-GENE 200 SNP 分析样品处理，在震荡摇匀之后，在进行短暂离心处理[6]。将待检测的样品放置在相应的位置上，之后放置在实时荧光检测仪当中，选择不同基因型之后在进行检测。

2 结 果

XRCC1、TYMS、MTHFR基因型分布中分别以G/A基因型、2R/3R基因型、T/C基因型为主，明显高于其他基因类型，差异有统计学意义(P<0.05)，详见表1； XRCC1基因型分布为G/A者，其随访2年内复发率明显高于G/G基因型、A/A基因型，差异有统计学意义(P<0.05)，详见表2；行COX模型单因素分析结果显示，TNM分期、肠壁浸润、XRCC1与结肠癌术后FOLFOX4辅助化疗具有相关性(P<0.05)，详见表3；将COX模型单因素分析结果有明显差异的单因素纳入到多因素模型中，XRCC1基因多态性与结肠癌术后行FOLFOX4辅助化疗后2年内无病生存率造成直接影响(P<0.05)，详见表4。

表1 XRCC1 TYMS MTHFR基因型分布

表2 XRCC1 TYMS MTHFR基因突变与复发的关系

表3 结肠癌术后FOLFOX4辅助化疗相关因素COX模型单因素分析

表4 结肠癌术后FOLFOX4辅助化疗相关因素的COX模型多因素分析

3 讨 论

结肠癌作为临床上一类较为常见的恶性肿瘤疾病，时刻威胁着患者的生命安全。因此，采取积极有效的方法对其治疗至关重要[7]。在当前临床工作中，多主张对患者的遗传背景进行分析，根据其基因型选择有效的治疗方案。结合既往报道发现，细胞膜转运过度蛋白表达、DNA相关修复、解毒等被认为是导致恶性肿瘤性疾病化疗耐药的重要机制，其发生发展与抑癌基因、原癌基因的抑制以及激活过程具有密切的相关性[8]。

在近年来的研究中，也开始有越来越多的能够预测结肠癌生存及复发的分子标记物进入到了临床研究工作中，较为常见的包括了XRCC1、TYMS、MTHFR等，不过在实际临床工作中，由于相关研究较为复杂，多推崇进行多个疗效标志物的分析及判断，更具有较高的临床意义，旨在更好的帮助结肠癌患者获得个性化的治疗并获得可靠的疗效及预后[9]。MTHFR被认为是叶酸代谢的一类关键酶，其作用机制在于能够促使5，10-亚甲基四氢叶酸还原成为5-甲基四氢叶酸，并由此产生一个甲基基团。甲基基团被认为是dMTP合成过程当中的一个必须的过程及原料，且与5-氟脲类药物在患者体内的代谢存在明显的相关性[10]。由此可以认为，MTHFR与5-氟尿嘧啶化疗疗效具有密切的相关性，由此在本次研究中，未能显示出MTHFR基因多态性与结肠癌术后行FOLFOX4辅助化疗后疗效的相关性。XRCC1作为哺乳动物DNA修复系统当中的一个重要的基因，其作用机制在于可帮助修复单链DNA与碱基之间的切除途径以达到修复损伤DNA的目的，在稳定个体遗传性方面存在较高的作用。有临床资料显示，XRCC1基因多态性与肿瘤的发生发展以及复发风险之间也具有着密切的相关性[11]。在本次研究中，经过COX单因素及多因素分析可见，XRCC1基因多态性与结肠癌术后行FOLFOX4辅助化疗后2年内的复发具有明确的相关性。而TYMS作为一种可在DNA合成、复制以及修复当中起到关键性的基因，有临床资料显示，TYMS基因型在人群当中表现出了明显的多态性，且这种多态性多跟随着基因的多态性及位点发生相应的变化。另外，在研究中我们发现，TYMS基因多态性可对患者化疗药物敏感性、毒性反应甚至是远期生存率带来直接的影响。在本次研究中，尚未发现TYMS基因多态性与与结肠癌术后行FOLFOX4辅助化疗效果的关系。综合本次结果也从侧面证实了XRCC1基因多态性在预测疗效上的可靠作用优势。

综上所述，XRCC1基因多态性与结肠癌术后行FOLFOX4辅助化疗后2年内无病生存率造成直接影响，二者具有直接相关性，通过对XRCC1基因多态性进行检测可作为预测Ⅱ、Ⅲ期结肠癌术后行FOLFOX4辅助化疗疗效的可靠指标。