HBsAg低反应性乙肝患者HBeAg表达与HBV基因型、DNA载量的关系

吕新建，石贵福，王合群

(1.驻马店市第一人民医院 消化内科，河南 驻马店 463000；2.驻马店市中心医院 感染科，河南 驻马店 463000)

抗病毒治疗是抑制乙肝病毒复制的重要措施，对修复肝损伤、提高肝功能具有重要作用。而近年研究指出，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)基因异质性不仅可影响乙肝的流行病学特点，还可影响病毒变异、疾病预后及抗病毒治疗的应答[1]。近年，随分子生物学发展，血清学、病毒学定量检测广泛应用于临床，HBV检测主要有乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B virus e antigen，HBeAg)等血清学指标与HBV DNA等病毒学指标；HBeAg、HBeAg主要反映免疫表达及抗原抗体体系，DNA载量则直接反映病毒复制[2-4]。因此，HBV基因分型及HBV DNA定量检测逐渐应用于临床诊断，关于HBV基因型与HBeAg表达、DNA载量之间的相关性研究逐渐成为关注点，但其结论尚存在争议。本研究选取152例HBsAg低反应性乙肝患者，检测、分析其HBeAg表达与HBV基因型、DNA载量的关系，以期为HBsAg低反应性乙肝的临床诊断、病情评估及抗病毒治疗提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019年4月至2021年10月驻马店市第一人民医院收治的152例HBsAg低反应性乙肝患者，HBV基因分型为B基因型43例(28.29%)，C基因型102例(67.11%)，D基因型4例(1.97%)，B/C混合基因型2例(1.32%)，C/D混合基因型2例(1.32%)。B基因型男28例，女15例，年龄22～56(39.12±8.37)岁；C基因型男63例，女39例，年龄23～61(42.25±9.23)岁；D基因型男3例，女1例，年龄分别为22、38、36、55岁；B/C混合基因型男2例，年龄分别为19、54岁；C/D混合基因型男1例，女1例，年龄分别为21、59岁。各基因型HBsAg低反应性乙肝患者性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院医学伦理委员会审批通过。

1.2 选例标准(1)纳入标准：符合《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》诊断标准[5]；首次发现HBsAg阳性；HBsAg定量<1 000 IU·L-1；年龄>18岁；既往无抗乙肝病毒治疗史，近6个月无抗纤维化药物、免疫调节剂用药史；患者及近亲属了解本研究并签署知情同意书。(2)排除标准：人类免疫缺陷病毒感染；伴有失代偿期肝硬化；存在药物性肝病、酒精性肝病、其他自身免疫性肝病；处于哺乳期、妊娠期；存在恶性肿瘤疾病；存在语言、精神障碍。

1.3 治疗方法入院后均接受系统保肝措施，给予恩替卡韦(福建广生堂药业股份有限公司，批准文号H20110172，规格：0.5 mg)抗病毒治疗，口服每日0.5 mg，连续治疗3个月。

1.4 HBV基因分型采用荧光PCR定量仪(德国罗氏诊断有限公司生产，型号Lightcycle 480)，以多对型特异性引物巢式PCR，进行扩增处理，将PCR产物分别置于琼脂糖凝胶(3%)中进行电泳，加入低相对分子质量标志物，以电泳条带长度进行基因型判定，各HBV基因分型电泳条带：A基因型68 bp、B基因型281 bp、C基因型122 bp、D基因型119 bp、E基因型167 bp、F基因型97 bp。引物由上海英骏生物公司合成。

1.5 观察指标(1)对比不同HBV基因型患者基线肝功能指标[基线丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)、白蛋白(albumin，ALB)、甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)、胆碱酯酶(cholinesterase，CHE)水平]、HBeAg转阴率及ALT复常率。(2)对比不同HBV基因型治疗前、治疗3个月后的HBsAg、HBeAg表达与DNA载量。(3)分析不同HBV基因型HBsAg与HBeAg表达、DNA载量的相关性。

2 结果

2.1 不同HBV基因型患者基线肝功能、HBeAg转阴率、ALT复常率对比152例HBsAg低反应性乙肝患者中由于D基因型、B/C混合基因型、C/D混合基因型共8例，例数较少，故仅将B、C基因型纳入分析比较。经统计分析，B基因型乙肝患者HBeAg转阴率较C基因型乙肝患者高(P<0.05)，B、C基因型乙肝患者基线ALB、CHE、ALT、AFP水平及ALT复常率差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同HBV基因型患者基线肝功能、HBeAg转阴率、ALT复常率对比

2.2 不同HBV基因型的HBsAg、HBeAg表达与DNA载量治疗前B、C基因型的HBsAg、HBeAg表达与DNA载量差异无统计学意义(P>0.05)；治疗3个月后B基因型HBsAg较C基因型低，HBeAg表达较C基因型高(P<0.05)；B、C基因型DNA载量差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同HBV基因型的HBsAg、HBeAg表达与DNA载量

2.3 不同HBV基因型HBsAg与HBeAg表达、DNA载量的相关性B基因型的HBsAg与HBeAg表达呈负相关(r=-0.486，P<0.05)，HBsAg与DNA载量无相关性(P>0.05)；C基因型的HBsAg与HBeAg表达呈负相关(r=-0.419，P<0.05)，HBsAg与DNA载量无相关性(P>0.05)。见表3。

表3 不同HBV基因型HBsAg与HBeAg表达、DNA载量的相关性

3 讨论

乙肝是由HBV感染所致传染性肝脏损害疾病，我国依处于乙肝中度流行区[6]。现阶段，临床免疫球蛋白的应用、乙肝疫苗的广泛普及，均可能引发HBsAg变异低反应性表达[7]。余占娟等[8]研究表示低反应性HBsAg乙肝患者主要为HBV C基因型，本研究C基因型占67.11%，与其研究相似，其次为B基因型(28.29%)，基因分型占比差异可能与标本数量、取样方法有关。目前关于HBV基因型与HBeAg、HBV DNA载量之间的关系成为临床研究重点，进一步明确其关系，对HBsAg低反应性乙肝患者诊断及病情评估具有临床指导意义。

HBsAg水平可反映乙肝病毒复杂状态及患者病情程度；HBeAg是HBV病毒的复制指标；HBV DNA可反映肝脏组织内的病毒复制转录活动的活跃程度。张小曼等[9]报道显示，检测HBsAg定量与DNA载量有利于了解HBV病毒复制情况。乙肝患者机体内HBV复制活跃，可增强乙肝患者体液免疫应答及细胞免疫，导致不同程度的肝损伤[10]。张荣芳等[11]研究指出，慢性乙肝患者治疗前及治疗初期血清HBV DNA水平与HBsAg、HBeAg相关。血清ALT、ALB、AFP、CHE是反映肝损伤的重要指标[12]。本研究显示，B基因型乙肝患者HBeAg转阴率较C基因型乙肝患者高，治疗3个月后B基因型HBsAg较C基因型低，HBeAg表达较C基因型高，提示不同基因型病毒的复制活跃程度存在一定差异，C基因型病毒致病性强，易造成患者免疫耐受；与C基因型乙肝患者相比，B基因型乙肝患者免疫应答能力较强。张玲等[13]研究表示，乙肝患者HBV-DNA载量与其肝功能有关，且有利于临床HBV复制情况的评估及治疗方案的选择。本研究中B基因型、C基因型乙肝患者基线ALB、CHE、ALT、AFP水平及ALT复常率差异无统计学意义，B、C基因型HBsAg与DNA载量无明显相关性，可能与低反应性HBsAg乙肝患者HBsAg水平有关，机体尚无明显症状、体征表现。本研究相关性分析显示，B、C基因型HBsAg与HBeAg表达均呈负相关，HBeAg表达、DNA载量及基因型联合监测，有利于临床诊断、评估低反应性HBsAg乙肝患者病情程度，避免临床对低反应性HBsAg患者的误诊、漏诊，对临床个体化调整抗病毒治疗方案具有指导意义。

综上所述，HBsAg低反应性乙肝患者HBsAg与HBeAg表达均呈负相关关系，与DNA载量相关性不明显，不同基因型间HBsAg、HBeAg表达与DNA载量差异无统计学意义，明确HBsAg与HBeAg表达的关系并及时干预，有利于临床诊断、治疗及患者预后改善。