肝衰竭患者HBV-DNA载量与炎性因子及肝纤维化指标的相关性

庞康清，马洪德，杨汝磊，庞国宏

（平顶山市第一人民医院 感染性疾病科，河南 平顶山 467000）

肝衰竭是指肝脏受到多种因素影响使肝细胞大量死亡，从而导致其功能发生严重障碍，引起凝血功能障碍、腹水、肝性脑病等，临床一般表现为极度乏力、恶心、腹胀、食欲下降等［1］。肝衰竭病情发展迅速、临床治疗难度较大、病死率较高，严重影响患者的生存质量［2］。临床长期实践表明，早期发现、诊断、治疗对改善患者预后有着积极的意义。相关研究显示，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）是引起肝衰竭的主要原因之 一［3］，机 体 外 周 血HBV-脱 氧 核 糖 核 酸（deoxyribonucleic acid,DNA）载量能够直接且高效反映病毒的复制能力［4］，但具体的作用机制尚不完全清楚。近年来有学者指出，免疫反应所引起的炎性损伤贯穿了肝衰竭的发生及发展，而炎性因子的增殖、活化以及凋亡能够有效调控该过程［5］。肝纤维化是所有肝脏损伤性疾病在愈合修复过程中所经历的一个生理病理过程，不仅能够有效反映肝衰竭的发展过程，而且还与肝衰竭的预后密切相关［6］。目前已有研究证实，HBV 复制可激发和启动肝脏组织的炎症反应，进而引起肝损伤［7-8］，因此推测HBV-DNA 载量与炎性因子和肝纤维化指标之间存在了一定的联系，但目前国内很少有关于该方面的研究，值得深入探讨。因此，本研究主要是探究肝衰竭患者HBV-DNA 载量与炎性因子及肝纤维化指标的相关性，旨在临床肝衰竭的诊治提供更多参考思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年11 月至2020 年11 月就诊于平顶山市第一人民医院的120 例肝衰竭患者作为研究对象，根据HBV-DNA 载量［9］将其分为阴性组（HBV-DNA 载量＜103copies/mL）26 例、低载量组（103copies/mL≤HBV-DNA 载量＜105copies/mL）46例、中载量组（105copies/mL≤HBV-DNA 载量≤107copies/mL）29 例和高载量组（HBV-DNA 载量＞107copies/mL）19 例。阴性组：男14 例，女12 例；年龄32～65 岁，平均（49.57±8.62）岁；病程7～78 个月，平均（38.59±9.32）个月。低载量组：男25 例，女21 例；年龄31～68 岁，平均（50.10±8.65）岁；病 程 7～76 个 月，平 均（38.63±9.24）个月。中载量组：男16 例，女13例；年龄32～67 岁，平均（49.41±8.53）岁；病程5～79 个月，平均（38.92±9.19）个月。高载量组：男10 例，女9 例；年龄31～63 岁，平均（49.27±8.81）岁；病 程 7～76 个 月，平 均（38.43±9.33）个月。四组性别、年龄、病程比较，差异无统计学意义（P＜0.05），具有可比性。

1.2 纳入和排除标准

纳入标准：①参照《肝衰竭诊疗指南》［10］中肝衰竭诊断标准，所有患者均确诊为肝衰竭；②近期未接受过相关治疗的患者；③临床资料完整的患者；④患者或其家属签订知情同意书。

排除标准：①合并其他慢性肝病，例如药物学肝损伤、病毒性肝炎、酒精性肝病等患者；②合并代谢性、自身免疫性疾病患者；③先天性肝损伤患者；④合并其他病毒感染的患者；⑤孕妇或哺乳期妇女。

1.3 检测方法

样本制备：患者被纳入研究后的第2 天清晨抽取其空腹肘静脉血9 mL，置于EP 管内，在常温下静置1 h 后，采用离心法分离出血清，等分为三份置于干燥试管内，于零下80℃保存待测。

HBV-DNA 载量：取待测样品一份，采用荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术对HBV-DNA 载量进行检测，所用仪器及配套试剂为泰普生物科学（中国）有限公司提供的TIB-8600。

炎性因子：取待测样品一份，采用酶联免疫吸 附 法（enzyme-linked immumosorbent assay,ELISA）对血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）水平进行检测，所用试剂盒由上海抚生实业有限公司提供；采用全自动荧光免疫仪（烟台艾德康生物科技有限公司，型号：ADC FIA 400）对血清超敏C 反应蛋白（hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP）水平进行检测。

肝纤维化指标：取待测样品一份，采用ELISA 对血清Ⅳ型胶原（type Ⅳcollagen,CⅣ）、透明质酸（hyaluronic acid,HA）、层黏连蛋白（laminin,LN）、Ⅲ型前胶原（precollagen type Ⅲ,PCⅢ）水平进行检测，所用试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供。

1.4 观察指标

①比较不同血清HBV-DNA 载量组血清炎性因子水平；②比较不同血清HBV-DNA 载量组血清肝纤维化指标水平；③分析肝衰竭患者HBV-DNA 载量与炎性因子及肝纤维化指标的相关性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 18.0 进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用成组t检验；多组比较采用重复测量设计的方差分析；计数资料以百分率（%）表示，比较采用χ2检验；采用Pearson 相关系数分析肝衰竭患者HBV-DNA载量与炎性因子及肝纤维化指标的相关性。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同血清HBV-DNA 载量组血清TNF-α、IL-6、hs-CRP 水平比较

不同血清HBV-DNA 载量组血清TNF-α、IL-6、hs-CRP 水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中低载量组、中载量组和高载量组血清TNF-α、IL-6、hs-CRP 水平高于阴性组，中载量组和高载量组高于低载量组，高载量组高于中载量组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同血清HBV-DNA 载量组血清TNF-α、IL-6、hs-CRP 水平比较（）

表1 不同血清HBV-DNA 载量组血清TNF-α、IL-6、hs-CRP 水平比较（）

注：†与阴性组比较，P＜0.05。

2.2 不同血清HBV-DNA 载量组血清CⅣ、HA、LN、PCⅢ水平比较

不同血清HBV-DNA 载量组血清CⅣ、HA、LN、PC Ⅲ水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中低载量组、中载量组和高载量组血清CⅣ、HA、LN、PCⅢ水平高于阴性组，中载量组和高载量组高于低载量组，高载量组高于中载量组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同血清HBV-DNA 载量组血清CⅣ、HA、LN、PCⅢ水平比较（,ng/mL）

表2 不同血清HBV-DNA 载量组血清CⅣ、HA、LN、PCⅢ水平比较（,ng/mL）

注：†与阴性组比较，P＜0.05。

2.3 肝衰竭患者HBV-DNA 载量与炎性因子及肝纤维化指标相关性的分析

肝衰竭患者HBV-DNA 载量与TNF-α、IL-6、hs-CRP、CⅣ、HA、LN、PCⅢ呈正相关，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 肝衰竭患者HBV-DNA 载量与炎性因子及肝纤维化指标相关性分析

3 讨论

肝衰竭是临床中较为常见的一种恶性疾病，病死率约为50%～90%，严重影响患者生命安全［11］。慢性HBV 感染是引发肝衰竭的最主要原因，具体发病机制虽并未明确，但有研究显示，HBV 感染后，机体炎性因子分泌增多所介导的炎症反应是引发肝衰竭的关键因素之一［12-13］。此外，肝纤维化主要是因肝细胞损伤，肝实质的炎症坏死激活了肝星状细胞，细胞外基质异常增多和沉积所导致的，与病情的发展进程紧密相关［14］。但目前很少有研究探究HBV-DNA 载量与炎性因子及肝纤维化指标的相关性。

喻茂文等［15］研究表明，随着HBV-DNA 载量的增加，IL-6 水平不断升高；王柳青等［16］研究结果显示，经有效治疗患者HBV-DNA 载量和TNF-α、IL-6、hs-CRP 水平均降低，且治疗效果越好，降低越显著；在本研究中，低载量组、中载量组和高载量组血清TNF-α、IL-6、hs-CRP 水平较阴性组高，而中载量组和高载量组又高于低载量组，高载量组高于中载量组；与喻茂文等、王柳青等研究结果基本相符，表明随着肝衰竭患者HBV-DNA 载量的升高，TNF-α、IL-6、hs-CRP 炎性因子水平也逐渐升高。同时本研究还发现，HBV-DNA 载量与TNF-α、IL-6、hs-CRP 呈正相关，与雷晓燕等［17］研究结果基本符合。HBV-DNA 载量能够有效反映HBV 复制的活跃程度，HBV 在体内复制可使机体的免疫应答机制被激活，进而对肝细胞造成间接损伤，且HBV-DNA 载量越高，损伤越严重［18］。临床长期研究表明，肝病的发生与炎性活动、病毒变异、遗传、年龄等存在一定的相关性，而肝细胞的病变又与免疫系统状态相关，炎性因子能够有效调控机体的免疫系统，TNF-α、IL-6、hs-CRP 作为炎症反应常见的炎性指标，参与了肝细胞损害的介导过程，对成纤维细胞的分裂增殖以及纤维蛋白的沉着产生刺激作用［19］。巨噬细胞广泛存在于肝脏中，肝细胞一旦被损害，即会大量释放TNF-α、IL-6 等炎性因子，使机体发生级联反应，TNF-α 能够诱导肝星状细胞的增殖和胶原的合成，进而促进转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）、血小板衍生生长因子（platelet derived growth factor,PDGF）等细胞因子的释放，加强正反馈作用［20］；IL-6 则是受TNF-α 刺激所产生，能够使中性粒细胞活化、聚集加快，进而引起肾小管坏死、肝纤维化、凝血功能异常，加重组织损伤程度［21］。hs-CRP 是一种重要的急性时相蛋白，主要在肝脏内合成，在正常人体内，其浓度较低，几乎检测不到，但当机体发生感染时，hs-CRP 浓度迅速升高，其能够通过诱导中性粒细胞与巨噬细胞的趋化作用推动炎症反应的进程［22］。因此，HBV-DNA 载量越高，机体病毒复制能力越强，血清TNF-α、IL-6、hs-CRP 炎性因子水平越高，肝损伤程度越严重。

刘娇等［23］研究显示，随着HBV-DNA 载量的升高，CⅣ、HA、LN、PCⅢ逐渐升高；罗艳［24］研究结果表明，HBV-DNA 载量越高，肝纤维化的四项指标越高，且HBV-DNA 载量与LN、PCⅢ呈正相关；在本研究中，与阴性组比较，低载量组、中载量组和高载量组血清CⅣ、HA、LN、PCⅢ水平异常升高，而中载量组和高载量组又较低载量组高，高载量组较中载量组高，且与HBV-DNA 载量呈正相关，与刘娇等、罗艳研究结果完全相符，因此HBV-DNA 载量与肝纤维化指标密切相关。肝纤维化是肝病发展为肝硬化的重要路径，而CⅣ、HA、LN、PCⅢ是肝纤维化的四项指标，通过其水平变化情况，能够判断机体肝纤维化情况。CⅣ是组织基底膜的主要构成成分之一，能够较好的反映出基质胶原的更新变化情况；HA 是组成肝细胞外的间质内蛋白多糖成分，当肝脏受到损伤时，会引起HA 水平的改变，引发标志肝脏的急慢性损伤；LN 可及时反映出基质胶原的更新率，可与CⅣ综合反映机体肝纤维化的状态；PCⅢ是判断肝纤维化的早期合成以及程度的重要指标［25］。因此，HBV-DNA 载量越高，肝纤维化越严重，促进了肝衰竭的发生与发展。

综上所述，肝衰竭患者HBV-DNA 载量与炎性因子及肝纤维化指标紧密相关，利于肝衰竭的临床诊断、治疗、病情及预后的评估等。