中晚期胃癌患者血清lncRNAANRIL和lncRNA H19表达及与预后相关性

陈涛

胃癌是常见的一种恶性肿瘤，具有较高的发病率和病死率，不仅威胁患者生命健康，而且影响患者生存质量[1]。由于胃癌患者早期症状隐匿，大部分患者确诊时已属中晚期，从而失去了最佳根治时机，预后较差[2-3]。因此，寻求新的生物学指标来预测胃癌患者预后对指导胃癌临床治疗工作尤为关键[4]。lncRNA主要是长度超过200个核苷酸、无法编码蛋白的一类RNA，其可通过多途径在某些疾病中发挥重要调控作用（尤其是在恶性肿瘤的发生、发展过程中）。近年来研究发现，lncRNA-ANRIL和lncRNA H19在多种恶性肿瘤中异常表达[5-6]，但其在胃癌发生、发展中的具体机制尚未完全明确。本文旨在探讨中晚期胃癌患者血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19表达及与预后相关性，现将结果报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取浙江新安国际医院2017年1月至2019年1月收治的中晚期胃癌患者79例作为观察组，其中男 47 例，女 32 例；年龄 34～75（59.83±6.75）岁；BMI 18～27（23.12±1.87）kg/m2；TNM 分期：Ⅱb 期13例，Ⅲ期37例，Ⅳ期29例；淋巴结转移21例。另选取同期本院健康体检者68例作为对照组，其中男41例，女 27 例；年龄 39～74（58.97±7.86）岁；BMI 19～27（23.25±1.84）kg/m2。两组受试者基线资料比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。纳入标准：（1）经病理学或细胞学检查证实为胃癌，且TNM分期Ⅱb～Ⅳ期；（2）卡氏功能评分≥70分，预计生存3个月以上者；（3）临床资料和随访资料完整者。排除标准：（1）合并自身免疫系统疾病患者；（2）合并其他部位恶性肿瘤患者；（3）合并感染性疾病者；（4）患者存在精神或意识功能障碍；（5）合并重要脏器严重异常者。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有患者及家属均知情同意。

1.2 血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量检测 采用qRT-PCR法。应用7500实时荧光定量PCR仪（美国ABI公司）。抽取两组受试者清晨空腹外周静脉血 6 ml，离心（3 000 r/min、半径 15 cm，8 min）后吸取血清，置于-70℃保存备用，采用TRIzol试剂提取血清总RNA，取5 μl总RNA进行琼脂糖凝胶电泳并检测总RNA的纯度和完整度。按照逆转录试剂盒（美国Biomiga公司）说明书操作将其逆转录为cDNA，以GAPDH作为内参基因，检测血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19表达。取cDNA进行qRT-PCR，反应条件：95 ℃预变性 10 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min，共完成40个循环，每个样品设置3个复孔。引物序列由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列：lncRNAANRIL 上游引物：5'-TGCTCTATCCGCCAATCAGG-3'，下游引物：5'-GGGCCTCAGTGGCACATACC-3'；lncRNA H19 上游引物：5'-ACCACTCACTACCTGACTC-3'；下游引物：5'-CCGCAGGGGGTGGCCATGAA-3'；GAPDH上游引物：5'-GAGTCAACGGATTTGGTCGT-3'，下游引物：5'-TTGATTTTGGAGGG ATCTCG-3'。采用 2-ΔΔCt法计算lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量。

1.3 预后评价 所有患者通过门诊、电话方式随访，随访时间截止2021年1月10日，以患者死亡或至随访截止日为随访终点，统计平均总生存期（OS）。

1.4 统计学处理 采用SPSS 25.0统计软件。计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用两独立样本t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验。生存分析采用Kaplan-Meier法，组间生存情况比较采用log-rank检验。预后独立危险因素分析采用多因素Cox回归模型。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量比较 观察组血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量均明显高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。见表1。

表1 两组血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量比较

2.2 不同病理特征患者血清lncRNA-ANRIL相对表达量比较 不同性别、年龄、BMI和肿瘤直径患者血清lncRNA-ANRIL相对表达量比较差异均无统计学（均P＞0.05）；而不同TNM分期及是否存在淋巴结转移患者血清lncRNA-ANRIL相对表达量比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）。见表2。

表2 不同病理特征患者血清lncRNA-ANRIL相对表达量比较

2.3 不同病理特征患者lncRNA H19相对表达量比较 不同性别、年龄、BMI和肿瘤直径患者血清lncRNA H19相对表达量比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；而不同TNM分期和是否存在淋巴结转移患者血清lncRNA H19相对表达量比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）。见表3。

表3 不同病理特征患者血清lncRNA H19相对表达量比较

2.4 患者预后与lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量相关性 以中晚期胃癌患者血清lncRNAANRIL相对表达量中位数2.75为界，将患者分为lncRNA-ANRIL＞2.75与≤2.75两组（分别为43和36例），其OS分别为19和32个月，≤2.75患者总体生存情况明显优于＞2.75患者（P＜0.05）。见图1。

图1 不同lncRNA-ANRIL相对表达量中晚期胃癌患者生存曲线比较

以中晚期胃癌患者血清lncRNA H19相对表达量中位数1.83为界，将患者分为lncRNA H19＞1.83与≤1.83分别为45和34例，其OS分别为21和31个月，≤1.83患者总体生存情况明显优于＞1.83患者（P＜0.05）。见图 2。

图2 不同lncRNA H19相对表达量中晚期胃癌患者生存曲线比较

2.5 中晚期胃癌患者影响预后独立危险因素分析经Cox回归模型分析，TNM分期、淋巴结转移、lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量为影响预后独立危险因素（均P＜0.05）。见表4。

表4 中晚期胃癌患者影响预后独立危险因素分析

3 讨论

胃癌是多基因变化积累的结果，其具体发病机制尚未完全明确[7]。通常情况下，胃癌在发病初期无较明显的表现特征，一经检查确诊，多数患者病情程度均较为严重[8-9]。我国胃癌发病率较高，而早期胃癌检出率仅为10%左右[10]。目前，由于胃癌缺少针对性、敏感的筛查及早期诊断标准，故而研究关于胃癌的关键性分析靶点以及调控机制非常重要，以期能从根本上达到防治胃癌的目的[11]。

lncRNA是特殊的一种RNA分子，是重要的基因表达调控因子。在多种生物学过程中，lncRNA发挥重要的作用，且近年来成为恶性肿瘤研究的热点。同时，在肿瘤细胞中lncRNA异常可作为促癌基因或者抑癌基因，从而参与到肿瘤细胞增殖、分化、侵袭及凋亡等过程中。外周血中lncRNA-ANRIL主要定位于细胞核内，研究报道显示，lncRNA-ANRIL在多种恶性肿瘤中异常表达[12]。有学者研究发现，lncRNA-ANRIL在骨肉瘤组织中异常表达，且呈高表达，而抑制lncRNA-ANRIL能够有效抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭能力[13]。此外，研究报道显示，lncRNA-ANRIL在胰腺癌组织中呈高表达，且lncRNA-ANRIL过表达可促进胰腺癌细胞迁移和侵袭能力[14]。H19是被发现的首个与肿瘤相关的lncRNA，其可在转录和表观遗传水平上调控细胞增殖、分化和凋亡[15]。H19在胚胎组织中高表达，通常在成年组织中不表达，但在肿瘤中异常表达。lncRNA H19具有抑癌和促癌的双重作用。林映汐等[16]研究结果表明，乳腺癌患者血浆lncRNA H19高表达，且明显高于乳腺良性病变及健康体检者，认为其可能成为诊断和治疗乳腺癌的潜在的一个生物学标志物。本研究发现，观察组血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量均明显高于对照组，由此可见中晚期胃癌患者血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量异常升高；TNM分期和淋巴结转移血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量比较差异均有统计学意义，由此可见中晚期胃癌患者TNM分期和淋巴结转移与血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19密切相关；lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相对表达量均为影响预后独立危险因素，由此可见中晚期胃癌患者lncRNAANRIL和lncRNA H19相对表达量与预后密切相关。

综上所述，中晚期胃癌患者血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19呈高表达，且与预后密切相关。但本研究存在一些不足：样本量小且随访时间短，还需增加样本量和延长随访时间进行深入研究，来提供可靠的临床参考价值。