1例抗-E合并抗-Dia标本的鉴定*

赵晓明 朱驰 于思远 吴文娟 杨冀

血型鉴定、抗体筛选、交叉配血是输血前必做的三大常规项目。而在抗体筛选和鉴定环节，由于细胞谱的缺陷或方法学的原因常常会导致某些抗体的漏检。Dia抗原是Diego血型系统中最重要的抗原之一，在不同人种中的出现频率差异很大，在蒙古族人种中的阳性率明显高于白种人和黑人，在亚洲人群中的出现概率较低[1，2]。本文对某医院送检至上海市血液中心参比实验室的一份疑难标本进行了分析研究，探讨较弱不规则抗体的鉴定方法，明确患者血清中存在的不规则抗体的特异性，以指导精准配血。

材料与方法

1 临床资料 标本来自某患者，女，41岁，汉族，孕2产2，入院时的主诉为“经期延长伴经量增多9年，盆腔包块9年”。2019年8月B超诊断左侧囊块，卵巢来源可能，以“卵巢囊肿，子宫憩室”收治入院。患者既往有一次输血史，无药物过敏史。体格检查情况如下：入院体温36.5℃，脉搏75次/分，呼吸20次/分，血压109/75 mmHg，眼睑膜苍白，左附件扪及一直径约5 cm包块，无压痛。肿瘤标志物检查未见明显异常，血常规示血红蛋白77 g/L，拟手术治疗。

医院输血科对患者标本进行了常规的输血前检测，包括ABO和RhD血型鉴定，抗体筛选，结果显示凝胶卡法鉴定血型为O型Rh阳性，抗体筛选呈弱阳性。因血红蛋白偏低，手术前备悬浮红细胞2 U。为明确抗体特异性，将血样送至上海市血液中心参比室做进一步的血清学检测。

2 试剂 抗-A、抗-B（批号：20171227）、抗-D（IgM）（批号：20181810）、抗-c（批号：20183101）、抗-C（批号：20183001）、抗-e（批号：20183301）、抗-E（批号：20183201）、多特异性抗球蛋白试剂（批号：20185001）、单特异性抗-IgG试剂（批号：20185102）、单特异性抗-C3d试剂（批号：20185201）、凝聚胺试剂（批号：20197502）、筛选细胞（批号：20197034）、谱细胞（批号：20190808），以上试剂均来源于上海血液生物医药有限公司；进口谱细胞（批号：731911，731915，731917，匈牙利，REAGENS）；IgG致敏细胞（批号：20190625，自制）；抗-IgG单抗卡（批号：IGC055F，奥森多）；抗-Dia（批号：32810-A2，英国，Lorne）。

3 方法

3.1 血型鉴定采用试管法鉴定ABO正反定型、Rh血型。

3.2 直接抗人球蛋白试验采用试管法检测。

3.3 不规则抗体筛选及鉴定采用盐水试管法、抗人球蛋白法、柱凝集法、聚乙烯二醇（polyethylene glycol，PEG）增强法鉴定。抗体鉴定采用谱细胞与患者血清进行反应，根据谱细胞的反应格局，确定抗体的特异性；然后检测患者的红细胞抗原表型进行验证。盐水试管法、抗人球蛋白法、柱凝集法均按照《全国临床检验操作规程》进行操作。PEG增强法的简易操作流程为：在小试管中依次加入2滴患者血清、1滴谱细胞和4滴PEG，置于37℃水浴箱中孵育15 min后，用生理盐水洗涤红细胞3次后扣干，滴加1滴生理盐水悬浮红细胞，取30 μL红细胞悬液加入抗人球蛋白卡中，离心观察结果（此为卡式法），剩余的红细胞悬液在试管内加1滴抗人球蛋白试剂，摇匀后离心观察结果（此为试管法）。

3.4 效价测定采用经典抗人球蛋白法、凝聚胺法、PEG增强法等测定。将患者的抗血清用生理盐水进行倍比稀释，保证每个试管内的液体充分混匀，然后滴加相应的红细胞悬液进行反应，肉眼观察试验结果，以出现±凝集强度的首管稀释度的倒数作为抗体效价。

3.5 交叉配血采用盐水法、凝聚胺法、柱凝集法三种方法配血。按照《全国临床检验操作规程》进行操作。

结 果

1 血型鉴定患者血型为O型，CCDee，Di（a-）。

2 直接抗人球蛋白试验多特异性抗人球蛋白、单特异性抗IgG、单特异性抗C3均为阴性。

3 抗体筛选试验盐水法、聚凝胺法均为阴性。

4 抗体鉴定结果

4.1 患者血清与国产谱细胞反应，盐水法、聚凝胺法、抗人球蛋白法均未出现凝集反应；用PEG增强后经典抗人球蛋白法出现疑似抗-Dia的格局，而柱凝集法出现抗-E的反应格局，且符合剂量效应，反应格局见表1。

表1 患者血清与国产谱细胞反应结果（批次：20190808）

4.2 选择一套进口谱细胞用PEG增强法与患者血清反应，2、4、9号细胞出现凝集，反应格局见表2。结果表明患者血清中存在抗-E抗体。但此套谱细胞中不含有Dia抗原，故另选两套不同批次的均含有Dia抗原的进口谱细胞与患者血清反应，用PEG增强后，加入抗IgG单抗微柱卡中，与7号细胞（Dia抗原阳性）均呈现4+的凝集。结果表明患者血清中还存在抗-Dia。

表2 患者血清与进口谱细胞反应结果（批次：731915）

5 抗体效价测定如表5所示，不同检测方法的抗-Dia效价有所差别。抗-E的效价用经典抗人球蛋白法检测结果＜1，PEG（卡）检测结果为1。

表5 抗-Dia效价

6 交叉配血结果 选择Dia阴性、Ec抗原阴性的悬浮红细胞配血，盐水、凝聚胺、柱凝集三种介质中均无凝集无溶血。患者输注后未见输血不良反应。

表3 患者血清与进口谱细胞反应结果（批次：731911）

表4 患者血清与进口谱细胞反应结果（批次：731917）

讨 论

Dia抗原属于Diego血型系统，几乎为蒙古血统人种特有。至今，在Diego血型系统中，有22个抗原已被发现，其中Dia与Dib，Wra和Wrb最为重要。抗-Dia一般都是通过免疫刺激产生的，研究表明抗-Dia可以引起严重的输血反应和新生儿溶血症[3-6]。本例患者有输血史及妊娠史，我们推测其抗-Dia可能是因为妊娠了Dia阳性的孩子或者输了Dia阳性的血液诱导产生。

该患者因抗筛阳性而送检，但参比室抗体筛选结果为阴性，与医院检测结果不符，可能是谱的缺陷或方法学的原因导致抗体的漏检。首先考虑是否有抗-Dia和/或抗-Mur，国产谱细胞的3号和10号分别含有Dia、Mur抗原，盐水与抗-IgG单抗卡，反应均为阴性。而用PEG增强后，3号细胞呈现3+的强凝集，因此怀疑有抗-Dia。而两套匈牙利的进口谱细胞中Di（a+）的细胞刚好E（-），反应呈阳性结果，进一步证实了抗-Dia的存在。

E抗原在人群中的分布较广泛，阴性率在50%左右，且E抗原在Rh血型系统中仅次于D抗原。Rh抗体中，除了天然产生的抗-E和抗-C之外，多由外界的免疫刺激产生，为IgG类型的抗体[7-12]。本例患者Rh血型为CCDee，无c和E抗原，若输注了含有c和E抗原的红细胞，机体会产生免疫性的抗-c和抗-E抗体，再次输血，常常会干扰输血相容性检测的实验结果。抗-E抗体是Rh血型系统中检出率最高的血型不规则抗体，也可和其他血型不规则混合存在[13-15]。

该患者抗-E很弱，容易漏检，但是输血时输入E阳性血的概率为50%，患者又有输血史和妊娠史，所以很容易发生输血反应。PEG是一种水溶性的线性聚合物，它可以降低抗体分子与水分子间的空间排斥力，使抗原和抗体更紧密接触，增加红细胞和抗体间的分子碰撞机会，从而促进抗原-抗体的结合反应，可以提高有临床意义的抗体的检出能力。

综上所述，Dia虽为低频抗原，但可以引起严重的输血反应和新生儿溶血症，试验操作中应注意使用不同的含有Dia抗原的抗体鉴定试剂盒进行试验；一些亲和力较低的抗体可能常规的试验方法无法检测出，应使用PEG增强等方法检测以避免有临床意义的抗体的漏检。临床输血工作者应重视对抗体筛查和鉴定的检测，尤其是对有输血史或/和妊娠史的患者，如检出抗体，应选择相应抗原阴性的配血相合的红细胞予以输注，以提高临床输血的安全、有效性。（本试验为笔者在上海市血液中心参比实验室进修期间完成，对沈伟、向东及血液中心各位老师的帮助与指导表示衷心的感谢！）

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突