1周岁内婴幼儿月龄与ABO血型抗体凝集强度消长的多中心前瞻性研究*

李志强 吕先萍 刘铁梅 刘冰 张冬霞 宫济武 马曙轩 刘莹 陈剑 黄吉娥 吕孟兴 罗冰 文军柳美秀 李兴龙 李丽玮 于建

ABO血型鉴定实施正反定型是为了验证检测结果的正确性。由于1周岁内婴幼儿机体免疫系统发育不够健全，易导致ABO血型鉴定反定型结果出现异常。国内诸多医院对1周岁尤其是6个月内婴幼儿进行ABO血型鉴定时往往只做正定型，何时应同时进行反定型检测在我国临床输血界没有明确规定。为了确保1周岁内婴幼患儿的输血安全性，著者在全国范围内进行1周岁内婴幼儿红细胞ABO血型抗体凝集强度与月龄消长相关性多中心前瞻性研究，其宗旨是为了明确国内1周岁内婴幼儿红细胞ABO血型反定型检测时间与结果强度判断界定值，为制定我国婴幼儿临床输血血型血清学检测规范提供实验数据。

对象与方法

1 研究对象 收集2019年5～10月来自于全国范围内1周岁内婴幼儿1 564例血标本，其中男922名、女642名，血型分布：A型516名、B型515例、O型533例。民族分布：汉族、回族、朝鲜族、壮族、彝族、藏族、白族、布依族、土家族、傣族、满族、侗族、苗族、维吾尔族、蒙古族等；汉族与少数民族例数比为13.6∶1。入组婴幼儿标准：无输血史，无血液系统疾病、无良恶性肿瘤、无免疫系统疾病与严重感染性疾病史，未使用抗生素、免疫抑制剂和抗肿瘤药物等药物史。按月龄分成12组。

2 研究试剂与仪器 人ABO血型反定型用红细胞试剂盒（上海血液生物医药有限责任公司，批号20195320），ABO、Rh血型定型检测卡（长春博迅生物技术有限责任公司，批号20190504）等。细胞洗涤离心机（KA-2200日本久保田株式会社）、医用离心机（TD-A 长春博研科学仪器有限责任公司）。

3 检测方法 留取静脉血标本分别应用三种方法进行ABO血型反定型检测：常温试管法、4℃试管法、微柱凝集法检测。4℃试管法ABO血型反定型：在试管加样后置入4℃冰箱内放置30 min后离心，其他检测步骤与常温试管法ABO血型反定型一致。常温试管法与微柱凝集法检测步骤严格按照《输血技术操作规程（输血科部分）》人民卫生出版社，2016年第1版实施。实验结果以凝集强度评分记录，判定原则见表1、2。

表1 试管法实验结果判读原则

4 统计学处理 应用SPSS20.0软件对数据做统计分析，计量资料以采用中位数（四分位间距）的方式进行表示，即M（P25，P75）。各血型间采用方差分析，每血型不同方法学采用配对样本秩和检验；性别、民族和地域采用方差分析；P＜0.05表示差异具有统计学意义。

表2 微柱凝集法实验结果判读原则

结 果

1 各血型反定型细胞凝集强度变化

1.1 A型婴幼儿：A型婴幼儿1～12月各月龄段反定型与B细胞反应，微柱凝集法与常温试管法比较，各月龄凝集强度分值均有统计学意义（P＜0.05）；与4℃试管法比较，除10～12月龄段外，其余各月龄段间两两比较均无统计学意义（P＞0.05）。4℃试管法与常温试管法比较，各月龄段的凝集强度分值均有统计学意义（P＜0.01），见表3。

随着A型婴幼儿月龄的增加，微柱凝集法和4℃试管法的凝集强度分值≥4分（凝集≥1+W）和≥7分（凝集≥2+W）的月龄分别出现在第6个月、第8～9个月；而常温试管法则分别出现在第8个月、第10个月，见表4。

1.2 B型婴幼儿：B型婴幼儿1～12月各月龄段反定型与A细胞反应，微柱凝集法与常温试管法比较，各月龄凝集强度分值均有统计学意义（P＜0.05）；与4℃试管法比较，除10～12月龄段外，其余各月龄段间两两比较均无统计学意义（P＞0.05）。4℃试管法与常温试管法比较，各月龄段的凝集强度分值均有统计学意义（P＜0.05），见表3。

随着B型婴幼儿月龄的增加，微柱凝集法和4℃试管法的凝集强度分值≥4分（凝集≥1+W）和≥7分（凝集≥2+W）的月龄分别出现在第1个月、第3-4个月；而常温试管法则分别出现在第1个月、第7个月，见表4。

1.3 O型婴幼儿：O型婴幼儿1～12月各月龄段反定型与A细胞和B细胞反应，微柱凝集法与常温试管法比较，各月龄凝集强度分值均有统计学意义（P＜0.01）；与4℃试管法比较，除11～12月龄外，其余各月龄段间两两比较均无统计学意义（P＞0.05）。4℃试管法与常温试管法比较，除B细胞9外，其余各月龄段的凝集强度分值均有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 各血型婴幼儿月龄与反定型细胞凝集强度 分值：[M（P25，P75）]

O型婴幼儿月龄第1个月时，微柱凝集法、4℃试管法反定型A、B细胞凝集强度分值均≥7分（凝集≥2+W）；常温试管法反定型分值均≥4分（凝集≥1+W），分值≥7分（凝集≥2+W）分别出现在第1、2～9个月，见表4。值得一提的是，O型婴幼儿出生时反定型A、B细胞凝集强度分值相对与其他血型均偏高（均≥7分），但随着月龄逐渐增加，其凝集强度分值均出现下降趋势，平均降低1～3分不等，随后凝集强度分值重新逐渐恢复至原水平甚至更高值。

表4 各血型婴幼儿月龄与反定型细胞凝集强度评分（单位：月龄）

2 各血型反定型细胞凝集强度比较 微柱凝集法、4℃试管法和常温试管法1～3月龄时O型婴幼儿反定型凝集强度分值分别比A型和B型反定型凝集强度分值高，两两比较有统计学意义（P＜0.05）。随着月龄至4～6月龄时O型反定型凝集强度分值降到最低，7～12月龄又逐渐增高，与A型和B型反定型凝集强度分值两两比较无统计学意义（P＞0.05）。

另外，微柱凝集法、4℃试管法和常温试管法1～8月龄A型婴幼儿反定型凝集强度分值均比B型和O型反定型凝集强度分值低，两两比较有统计学意义（P＜0.05）；随着月龄增加至12月龄，分值差异明显减少，两两比较无统计学意义（P＞0.05），表4。

3 各血型反定型细胞凝集强度与性别、民族和地域相关性 微柱凝集法、常温试管法和4℃试管法A、B、O型婴幼儿反定型细胞凝集强度在男女性别间、汉族与少数民族间分别相互比较无统计学意义（P＞0.05）；而在南方与北方区域分布（以秦岭-淮河为界）分别相互比较有统计学意义（P＜0.05），见表5。

表5 各血型反定型细胞凝集强度与性别、民族和地域相关性 分值：[M（P25，P75）]

讨 论

由于1周岁内婴幼儿造血器官和免疫系统发育均不够完善，极易出现各种疾病，在疾病的治疗过程中常依赖输血治疗；又由于机体免疫系统发育不健全也可影响ABO血型抗体产生，极易引起ABO血型鉴定反定型结果出现异常，从而导致ABO血型鉴定正反定型不符。因此，通常1周岁内婴幼儿输血前红细胞ABO血型鉴定仅依赖正定型结果，因而存在一定输血风险。对于1周岁内婴幼儿来说，何时进行红细胞ABO血型正反定型同时检测国外文献报道结果不一，美国血库学会规定＞6个月婴幼儿应进行ABO血型正反定型检测；英国血液学标准委员会则规定＞4个月内婴幼儿应进行ABO血型正反定型检测。而国内对其没有统一明确规定，由各医院自行决定。为了确保1周岁内婴幼患儿的输血安全性，必须明确国内1周岁内婴幼儿红细胞ABO血型反定型检测时间与结果强度判断界定值。另外，由于我国仍处于发展中国家之列，地域辽阔，医疗资源的分配还不够平衡，宜有适合我国各地进行ABO血型反定型检测的方法学和其相适应的判读规则。

本文研究表明应用微柱凝集法和4℃试管法进行ABO血型反定型检测时，其凝集强度评分≥4分（凝集≥1+W），月龄不小于6个月；其凝集强度评分≥7分（凝集≥2+W），月龄不小于9个月。应用常温试管法进行ABO血型反定型检测时，其凝集强度评分≥4分（凝集≥1+W），月龄不小于8个月；其凝集强度评分≥7分（凝集≥2+W），月龄不小于10个月。著者认为医疗条件较差与民众生活欠富裕地区，可应用试剂成本较低的4℃试管法进行ABO血型反定型检测，其结果判读效果与微柱凝集法基本一致。

本文研究表明婴幼儿随着月龄增加，各型反定型细胞凝集强度变化曲线均呈“汤勺式图形”。另外，1月龄时O型婴幼儿反定型凝集强度分值分别比B型和A型分值高，随着月龄增加至4～6月龄时分值降到最低，至后逐渐增高。著者认为可能是1月龄O型婴幼儿机体产生的血型相关抗A和抗B抗体受母亲的影响比A型、B型婴幼儿要强。值得一提的是A、B、O型婴幼儿反定型细胞凝集强度在南方与北方区域分布（以秦岭-淮河为界）存在一定差异，其原因有待于进一步研究。

总之，明确国内1周岁内婴幼儿红细胞ABO血型反定型检测时间与结果强度判断界定值，可确保1周岁内婴幼儿的输血安全性；也可为制定我国婴幼儿临床输血血型血清学检测规范提供实验数据。

致谢：长春博迅生物技术有限责任公司冯立岗、冯俊奎，上海血液生物医药有限责任公司顾桂玲、王玲玲，奥森多医疗器械贸易（中国）有限公司陈凯、韩莎莎等支持。

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