舒肝调气丸中7种成分含量测定

毕秋左，钱洲，王月德

曲靖市食品药品检验检测中心，云南 曲靖 655000

肝藏血，主疏泄，心藏神。心血充盈，有助于肝气疏泄，情志调畅。肝气疏泄有度，则心情畅快，利于心神内守。若肝郁气滞，有可能会引起抑郁、乳腺增生、卵巢囊肿等身体病变［1-3］。舒肝调气丸具有舒气开郁，健胃消食功效。用于两胁胀满，胸中烦闷，呕吐恶心，气逆不顺，倒饱嘈杂，消化不良，大便燥结。处方由香附、厚朴、枳实、龙胆、青皮、陈皮、牡丹皮等21 味药材组成，其中厚朴主要含有酚性化合物、生物碱及挥发油等多种化学成分。厚朴酚、和厚朴酚等酚性化合物是其最主要的活性物质,其对消化、神经、心血管与呼吸系统等均具有明显的药理活性及抗炎、抗肿瘤作用等［4］。枳实、青皮、陈皮均属芸香科植物，其中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷具有下气开痞、燥湿化痰、消痞除满之功效［5-7］。龙胆中的龙胆苦苷具有抗炎、抗癌、利胆的作用［8-11］。牡丹皮作为常用中药，丹皮酚为主要有效成分，具有保肝、护肾、清热等药理作用［12］。舒肝调气丸收录于中成药部颁标准第八册WS3-B-1650-93，标准中无含量测定项目，且舒肝调气丸含量测定的相关文献报道较少，本文采用多指标成分超高效液相色谱（UPLC）梯度洗脱法，首次对舒肝调气丸中龙胆、厚朴、枳实、青皮、陈皮、牡丹皮等药材中的7 个指标成分进行定量测定，即建立UPLC 法同时测定龙胆苦苷、厚朴酚、和厚朴酚、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、丹皮酚的含量，报告如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260 型液相色谱仪，包括二元泵，DAD检测器，自动进样器。电子天平：MS205DU 型（精度为十万分之一）。KQ-300DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

龙胆苦苷对照品（批号：110770-201918，纯度97.1%）；丹皮酚对照品（批号：110708-201908，纯度99.8%）；柚皮苷对照品（批号：110722-201714，纯度93.4%）；橙皮苷对照品（批号：110721-201818，纯度96.2%）；新橙皮苷对照品（批号：111857-201703，纯度99.2%）；和厚朴酚对照品（批号：110730-201614，纯度 99.3%）；厚朴酚对照品（批号：110729-201714，纯度100%）均购自中国食品药品检定研究院。舒肝调气丸（天津中新药业集团股份有限公司，规格：5 g/袋，批号分别为0980201、080204、0980210）。水为超纯水，甲醇为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：依利特Hypersil ODS2 柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相:甲醇（A）-水（B），梯度洗脱（0～3 min，20%A；3～10 min，20%→25%A；1 0～4 0 min，2 5% → 3 5%A ；4 0～4 5 min，35% →63%A；45～60 min，63%A；60～61 min，63%A；61～63 min，20%A）；流速:1.0 mL/min；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液精密称取各对照品适量，置25 mL 量瓶中，加甲醇配制成含龙胆苦苷123.12 μg/mL、丹皮酚34.40 μg/mL、柚皮苷294.40 μg/mL、橙皮苷616.06 μg/mL、新橙皮苷645.99 μg/mL、和厚朴酚225.21 μg/mL、厚朴酚209.60 μg/mL 的混合对照品储备溶液。精密量取3.5 mL，置25 mL量瓶中，加50%甲醇稀释制成含龙胆苦苷17.24 μg/mL、丹皮酚4.82 μg/mL、柚皮苷41.22 μg/mL、橙皮苷86.25 μg/mL、新橙皮苷90.44 μg/mL、和厚朴酚31.53 μg/mL、厚朴酚29.34 μg/mL 的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液取舒肝调气丸，研细，混匀，称取样品约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，称定重量，超声（300 W，50 kHz）处理45 min，放冷，用50% 甲醇补足减失的重量，摇匀，经0.45 μm 的微孔滤膜滤过，备用。

2.2.3 阴性样品溶液按照舒肝调气丸中的处方比例及制备工艺，制备不含龙胆、牡丹皮、枳实、白芍、青皮、陈皮、厚朴及厚朴花的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性样品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验分别取“2.2”项下各溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定。结果龙胆苦苷、丹皮酚、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的理论板数及分离度均较好（理论板数＞10 000，分离度＞1.5），阴性样品对供试品检测无干扰。混合对照品、供试品及阴性样品色谱图如图1。

图1 UPLC色谱图：A.对照品；B.样品；C.阴性样品

2.3.2 线性关系考察精密量取“2.2.1”项下混合对照品储备溶液0.4、0.8、1.5、3.0、4.0 mL，分别置10 mL 量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定。结果见表1。

表1 7种成分的线性关系

2.3.3 精密度试验取“2.2.1”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6 次，记录峰面积。结果龙胆苦苷、丹皮酚、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚峰面积RSD 分别为 0.83%，1.52%，1.31%，1.66%，0.79%，0.84%，1.68%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验取同一供试品溶液（批号：0980201），分别于室温下放置0，4，8，12，16，20，24 h 后按“2.1”项下色谱条件测定。结果龙胆苦苷、丹皮酚、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚面积无明显变化，RSD 分别为0.92%，1.33%，1.41%，1.52%，0.88%，1.06%，1.68%（n=7），表明供试品溶液中7 个成分在室温条下放置24 h 稳定。

2.3.5 重复性试验取同一批供试品（批号：0980201）6 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定。结果龙胆苦苷、丹皮酚、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚平均含量分别为2.253 1、0.520 4、4.796 5、12.169 8、11.352 7、3.468 2、3.556 1 mg/g，RSD 分别为0.65%，1.05%，1.04%，1.15%，0.61%，0.76%，1.23%（n=6），表明本法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验取已知含量的供试品（批号：0980201）6 份，每份约0.1 g，分别精密加入“2.2.1”项下混合对照品储备溶液2.0 mL，按“2.2.2”项下方法制备加样回收样品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算加样回收率。结果见表2。

表2 加样回收率实验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取3 批样品，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，在“2.2”项色谱条件下测定，计算样品含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果（mg/g，n=3）

3 讨论

3.1 样品提取条件及流动相的选择

结合参考文献［13-17］，以超声提取为基础，依次考察了甲醇、70%甲醇、50%甲醇为提取溶剂，提取时间30 min，45 min，60 min，结果显示以甲醇为溶剂时，龙胆苦苷峰形不好，70%甲醇和50%甲醇提取效果无明显差别，且提取时间为45 min 时各组分提取较完全，回收率较好。以甲醇-水作为流动相梯度洗脱，发现各成分峰分离度好，基线噪音小，且配制简单方便。因此本实验选择用50%甲醇超声提取45 min，并用甲醇-水作为流动相。

3.2 检测波长的选择

采用DAD 检测器在190～400 nm 波长段分别扫描7 个活性成分的对照品溶液和供试品溶液，结果表明 7 个成分最大吸收波长均不同，在270 nm 处供试品溶液中7 个成分均有较好吸收，故本实验选择270 nm 作为检测波长，保证各成分的灵敏度和精密度达到最佳效果。

4 小结

根据三批样品含量测定结果的差异性可得，建立舒肝调气丸中龙胆苦苷、丹皮酚、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚7 个成分同时测定的方法，采用UPLC 法分析操作简便，准确可靠，重复性好，为舒肝调气丸多成分质量控制提供参考依据。