电感耦合等离子体质谱法测定吸入用七氟烷中元素杂质

陈珍珍，裴昆，程奇珍，常亮

1.江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029；2.江西省药品检查员中心，江西省疫苗检查中心，江西 南昌 330029

吸入用七氟烷是一种卤代吸入性全身麻醉剂，挥发性液体，汽化后使用，属于国家基本药物目录品种，主要用于成人和儿科患者的全身麻醉的诱导和维持，院内手术及门诊手术均适用［1-4］。为保证药品的安全，国家药品监督管理局明确要求从2018年1 月起所有新药和仿制药需进行元素杂质的风险评估。有些元素杂质不仅会对药品的疗效、稳定性产生不好的影响［5-7］，还可能由于潜在毒性引发药物毒副作用。由于元素杂质不能为患者提供任何治疗效果，所以从药物安全性角度考虑，有必要对吸入用七氟烷中元素杂质进行分析考察。

本研究采用有较高灵敏性和准确性的电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法［8-13］建立测定吸入用七氟烷中钒（V）、铬（Cr）、钴（Co）、镍（Ni）、铜（Cu）、砷（As）、硒（Se）、银（Ag）、镉（Cd）、钡（Ba）、铊（Tl）、铅（Pb）12种重金属元素含量的方法，为其质量控制和安全性评价提供参考，并将其应用于6 批次吸入用七氟烷的元素检测。

1 材料

1.1 仪器

Synergguv millipore 超纯水制水机（密理博中国有限公司），安捷伦7700 ICP-MS 电感耦合等离子体质谱仪。

1.2 试剂与对照品

硝酸，来源：fluka，批号：BCBP0680V；混合（包含钒、铬、钴、镍、铜、砷、硒、银、镉、钡、铊、铅等元素）对照标准溶液，浓度均为10 μg/mL，购自安捷伦科技有限公司；内标对照品溶液：ICP-MS内标（含Bi、Ge、In、Rh、Sc 等内标元素）溶液，浓度为100 μg/mL，购自安捷伦科技股份有限公司。

1.3 样品信息

本次试验样品由3 家企业提供，共6 批次。A 企业三批（规格120 mL），批号18040431、18110431、18122231，编号Y1～Y3；B 企业两批（规格100 mL），批号65180610、65180609，编号Y4～Y5；C 企业一批（规格250 mL），批号C038180701，编号Y6。

2 方法与结果

2.1 试验条件

ICP-MS 仪器参数：射频功率：1.53 KW；碰撞气：高纯氦气；载气：高纯氩气；载气流量：1.05 L/min；冷却温度：4 ℃；等离子气流量：15 L/min；采样锥孔径：1.0 mm；四级杆真空度：3.02×10-4Pa；数据采集重复次数：3 次；出口温度：41.5 ℃；入口温度：33.8 ℃。

测定法：测定时选取的同位素为51V、53Cr、59Co、60Ni、63Cu、75As、82Se、107Ag、111Cd、137Ba、205Tl、208Pb，其中51V、53Cr 以45Sc 作为内标，59Co、60Ni、63Cu、75As、82Se、以72Ge 作为内标，107Ag 以103Rh 作为内标，111Cd、37Ba 以115In 作为内标,205Tl、208Pb 以209Bi 作为内标。以测量值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。在同样的分析条件下进行空白试验和空白校正。

2.2 溶液制备

2.2.1 混合内标溶液精密量取1 mL 内标溶液置100 mL 量瓶中，用2%硝酸稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1 μg/mL 的混合内标溶液。

2.2.2 供试品溶液精密量取吸入用七氟烷10 mL 置塑料离心管中，80 ℃水浴上挥干，再精密加入2%硝酸溶液10 mL，超声15 min，摇匀，即得。

2.2.3 空白溶液除不加样品外，按“2.2.2”项下方法制备空白溶液。

2.3 线性关系

精密量取混合对照标准溶液（浓度均为10 μg/mL）适量，用2%硝酸稀释制成各元素杂质浓度为0、1、4、8、10、20、40、60、80、100、200、400 ng/mL混合对照品溶液。取混合对照品溶液和混合内标溶液按“2.1”项下试验条件进行测定，对照品溶液线性关系试验结果详见表1。

2.4 检测限考察

取“2.2.3”项下空白溶液，连续测定11 次，计算仪器响应值的标准偏差，以测定标准偏差的3 倍为各待测元素的检测限，见表1。

表1 线性关系与检测限

2.5 精密度考察

取“2.3”项下浓度80 ng/mL 的混合对照品溶液，连续进样测定6 次，记录测定结果。结果各元 素V、Cr、Co、Ni、Cu、As、Se、Ag、Cd、Ba、Tl、Pb 测定结果的RSD 分别为1.00%、1.18%、0.71%、0.66%、1.02%、0.99%、2.69%、0.81%、0.43%、1.05%、0.40%、0.52%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.6 重复性考察

精密量取样品6 份（编号Y1）各10 mL，置塑料离心管中，分别精密加入混合对照标准溶液（浓度均为10 μg/mL）100 μL，置80 ℃水浴上挥干，再精密加入2%硝酸溶液10 mL，超声15 min，摇匀，作为重现性试验溶液；进样测定，记录测定结果。结果样品中各元素V、Cr、Co、Ni、Cu、As、Se、Ag、Cd、Ba、Tl、Pb 测定结果的RSD 分别为1.17%、2.54%、1.05%、0.79%、1.32%、0.77%、3.56%、2.12%、1.01%、0.99%、0.87%、0.87%（n=6），表明本方法重复性好。

2.7 加样回收率试验

精密量取样品9 份（编号Y1）各10 mL，置塑料离心管中，分别精密加入混合对照标准溶液（浓度均为10 μg/mL）60、60、60、100、100、100、200、200、200 μL，置80 ℃水浴上挥干，再精密加入2%硝酸溶液10 mL，超声15 min，摇匀，做为12种元素回收试验溶液，进样测定；12种元素平均回收试验结果详见表2。

表2 回收试验结果（n=9）

2.8 样品中元素杂质的测定

取6 批次市售吸入用七氟烷，按“2.2”项下方法处理，进样测定，计算样品元素杂质的含量，三家企业的6 批次结果见表3。

表3 样品测定结果（ng/mL）

3 讨论

本次研究对三家企业市售6 批吸入用七氟烷进行测定，参照ICH Q3D 元素杂质指南对制剂潜在元素杂质限度规定［14］，分析结果显示各元素杂质均符合限度要求，表明本品在使用时重金属安全风险较低。元素杂质的分类、限度及吸入用七氟烷样品中元素杂质含量范围详见表4。

表4 元素杂质的分类、限度及样品中元素杂质含量范围

吸入用七氟烷是挥发性液体，沸点较低，若采用微波消解法作为样品前处理容易引起爆炸。由于样品中元素杂质含量均为微量，为提高检测准确度和安全性，故采用水浴挥干再酸溶解的前处理方式。ICP-MS 是一种将ICP 技术和质谱结合在一起的分析仪器，具有灵敏度高、速度快、样品量小的优点，可以同时完成几十个元素的定量测定。本文采用ICP-MS 法测定吸入用七氟烷中12种元素杂质，经方法学评价显示此方法干扰少，准确性好、灵敏度高，可适用于吸入用七氟烷中12种元素杂质的检测分析。