血清1-磷酸鞘氨醇与冠状动脉斑块负荷的相关性研究

动脉粥样硬化是心血管疾病重要的病理生理学基础，研究证明动脉粥样硬化发生与高密度脂蛋白(HDL)水平呈负相关。人血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)水平为200～1 000 nmol/L，其中65%～80%结合在HDL中，参与HDL的抗氧化、抗血栓和抗炎等效应，HDL-S1P水平已成为冠状动脉疾病发生率和死亡率的重要预测因素[1-2]。本课题组前期研究证实，在人脐静脉内皮细胞中，HDL通过激活鞘氨醇激酶-2使细胞核内S1P水平增加，从而促使前列环素-2释放，发挥抑制血栓形成及扩张血管的作用[3]。

Sattler等[4]的研究将患者分为3组：心肌梗死组、稳定型心绞痛组和健康受试组。结果显示稳定型心绞痛组血清S1P水平低于健康受试组，心肌梗死组、稳定型心绞痛组HDL-S1P水平低于健康受试组，而non-HDL-S1P水平高于健康受试组，提示冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者由于HDL-S1P的减少，HDL的抗动脉粥样硬化作用减弱。也有研究发现，冠心病患者血清S1P水平较健康受试组显著升高，单变量分析认为S1P是冠心病患者强效预测因子[5]，但该研究并没有检测HDL-S1P和non-HDL-S1P的变化，也没有对冠状动脉斑块负荷进行研究。

血管内超声虚拟组织成像技术(VH-IVUS)能准确显示冠状动脉斑块性质，对斑块的组织成分进行模拟显像，从而对斑块进行更准确的定性及定量分析[6]。利用VH-IVUS的粥样硬化斑块分析技术可以明确冠心病患者的粥样硬化病变情况，为临床研究提供可靠依据。目前尚没有研究结果显示冠心病患者冠状动脉血管斑块情况与血清S1P的关系，本研究通过VH-IVUS技术了解冠状动脉的血管情况，阐明冠状动脉血管斑块与血清S1P的关系，以期为动脉粥样硬化血管内超声研究提供新的实验数据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2014年1月至2015年12月于我院行冠状动脉造影和VH-IVUS检查的患者，结合临床特征和冠状动脉造影结果将患者分为急性冠脉综合征组(n=15)和稳定性心绞痛组(n=15)。心肌梗死的诊断标准参照2012全球心肌梗死统一定义中对自发性心肌梗死的描述。排除标准：(1)有心肌病或存在严重威胁生命的疾病；(2)有腺苷、阿司匹林及氯吡格雷使用禁忌。所有入选患者经我院医学伦理委员会同意并签订知情同意书。

1.2 VH-IVUS测定

采用Boston公司iLab超声诊断仪及Atlantis SR Pro冠状动脉超声成像导管，血管内超声探头为2.9 F，频率40 MHz。排除超声导管保护鞘内的空气，在导管通过靶血管前先注射硝酸甘油200 μg防止冠状动脉痉挛，经0.014英寸(0.3556 mm)的引导丝将Atlantis SR Pro超声导管送至靶病变部位的远端，随后以0.05 mm/s的速度自动回撤以获得冠状动脉内超声影像。测定血管面积(EEM面积)、管腔面积、斑块面积及斑块负荷。采用美国心脏病学会(ACC)制定的血管内超声测定技术标准进行IVUS的测定[7]。采用Boston Scientific公司iReview软件分析超声数字化图像。根据机器内校准标记进行绝对值的校正。所有血管段定量测定均选择最狭窄血管横截面，于心脏舒张末期进行分析。

1.3 血清S1P水平测定

冠状动脉造影时取动脉鞘血20 mL，于肝素钠抗凝剂试管中混匀后-80℃保存，高效液相色谱法测定血清、HDL和non-HDL中S1P水平[8]。

1.4 统计学分析

采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验；冠状动脉斑块负荷采用多元回归分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般临床资料比较

急性冠脉综合征组与稳定性心绞痛组年龄、性别及冠心病危险因素的差异无统计学意义。急性冠脉综合征组低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)明显高于稳定性心绞痛组，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显低于稳定性心绞痛组(P均< 0.05)，见表1。

表1 两组一般临床资料比较

注：与稳定性心绞痛组相比，(1)P<0.05

2.2 两组冠状动脉病变部位IVUS测定结果比较

急性冠脉综合征组与稳定性心绞痛组EEM面积无明显差异。急性冠脉综合征组管腔面积明显小于稳定性心绞痛组，斑块面积、斑块负荷明显大于稳定性心绞痛组(P均<0.01)。见表2。

表2 两组冠状动脉病变部位IVUS测定结果比较

注：与稳定性心绞痛组相比，(1)P<0.05

2.3 两组血清S1P、HDL-S1P和non-HDL-S1P水平比较

急性冠脉综合征组血清S1P和non-HDL-S1P水平均明显高于稳定性心绞痛组(P均<0.01)；而HDL-S1P水平则明显低于稳定性心绞痛组(P<0.01)。见表3。

表3 两组血清S1P、HDL-S1P、non-HDL-S1P水平比较

注：与稳定性心绞痛组相比，(1)P<0.01

2.4 冠状动脉斑块与S1P、HDL-S1P和non-HDL-S1P的多元回归分析

以冠状动脉斑块负荷为因变量，以S1P、HDL-S1P和non-HDL-S1P为自变量进行多元逐步回归分析，结果显示S1P、non-HDL-S1P与冠状动脉斑块负荷有显著独立相关关系。见表4。

表4 冠状动脉斑块的多元逐步回归分析

3 讨论

血清HDL-S1P水平与动脉粥样硬化呈负相关，除了有逆向转运胆固醇的作用外，HDL还具有多种生物学功能。在所有脂蛋白中，HDL中的S1P水平最高。HDL-S1P在与S1P受体结合后，发挥保护内皮、改善心肌缺血再灌注损伤、抑制黏附分子表达等作用[9-11]。鼠心肌细胞实验证实，将S1P和FTY720(一种类似鞘氨醇的药物)加入到氯化钴诱导的缺血缺氧心肌细胞后，可减少乳酸脱氢酶活性，保护心肌细胞。FTY720还可显著提高p21-激活激酶1(PAK1)和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平，诱导一氧化氮释放，从而对缺血缺氧的心肌细胞起到保护作用[12]。HDL-S1P水平决定了HDL的部分生物学功能，本研究中急性冠脉综合征组HDL-S1P水平较稳定性心绞痛组明显降低，同时，炎性反应可改变HDL构成并氧化修饰HDL[13]，导致HDL功能受损，从而影响了HDL的抗炎、抗血栓作用。因此，HDL-S1P水平减少与冠状动脉疾病严重程度密切相关[14]。

临床上利用VH-IVUS的粥样硬化斑块分析技术，可明确冠心病患者的粥样硬化病变情况，为临床研究提供可靠依据。PROSPECT研究是首个利用VH-IVUS技术对3支冠状动脉病变特征进行检测的全球多中心、前瞻性研究。该研究结果显示，VH-IVUS诊断的高危TCFA斑块、冠状动脉斑块负荷>70%和血管窗<4 mm2，是3年内患者再次出现冠状动脉事件的3个最重要的危险因素[15]。本研究结果显示，急性冠脉综合征组斑块负荷明显高于稳定性心绞痛组，且负荷>70%，提示冠状动脉事件与斑块负荷密切相关。

进一步分析斑块负荷与S1P、HDL-S1P和non-HDL-S1P水平的相关性，多元回归分析结果显示S1P、non-HDL-S1P与冠状动脉斑块负荷有显著独立相关关系，说明急性冠脉综合征患者斑块负荷重，血小板激活，分泌了更多的S1P至血液中，而炎性反应改变了HDL的构成并对HDL进行了氧化修饰，从而导致HDL-S1P水平降低[13]。同时non-LDL结合了更多的S1P，而被氧化修饰的HDL可进一步诱发炎性反应，导致冠状动脉事件发生。S1P、non-HDL-S1P与冠状动脉斑块负荷显著相关，与冠心病严重程度一致，可预测冠心病斑块负荷严重程度。检测血清S1P、non-HDL-S1P水平可为冠心病的发生、危险分层、预后评估及治疗决策提供重要的临床依据。

综上所述，S1P、non-HDL-S1P水平可预测冠心病斑块的负荷情况，而HDL-S1P水平减少与冠状动脉疾病严重程度密切相关，干预HDL-S1P水平为冠心病防治提供了新的方向。