茶寄生与梨寄生中黄酮化合物的分析

回瑞华,侯冬岩,李铁纯,刁全平

(鞍山师范学院 化学与生命科学学院,辽宁 鞍山 114007)

槲寄生属(Viscum)植物系桑寄生科(Lorantheceae)半寄生常绿灌木，常寄生于梨、榆、杨、山楂、桑、茶、山毛茛、芸香、蔷薇科等植物上，我国大部分地区均有分布[1-3].由于特殊的寄生特性，可吸收寄主的内涵物，其化学成分与寄主密切相关，同时也有其本身的独特活性成分.槲寄生富含三萜类、甾醇类、黄酮类等化合物，其所含丰富的化学成分具有广泛的药理活性，具有祛风湿、补肝肾、强筋骨、养血、安胎、降血压等作用，近年来，在传统药用基础上不断发现其新疗效和新应用，如抗肿瘤、抗癌等作用[4,5].茶寄生是一种寄生在树龄较高的古乔木茶树上的寄生物，形状像小珊瑚，因寄生枝杆节状带毫，故此被称为“螃蟹脚”.梨寄生是寄生在梨树上的寄生物.国内外对槲寄生的研究发展较快，报道较多，而关于茶寄生和梨寄生的研究少见报道.本文对茶寄生和梨寄生中黄酮化合物进行分析，为茶寄生和梨寄生的开发利用提供科学依据.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

实验所用仪器与试剂见表1.

表1 实验所用仪器与试剂

1.2 样品及样品处理

茶寄生样品：取自福建.

梨寄生样品：取自辽宁鞍山.

分别将两种样品清洗洁净后放入烘箱中，于60 ℃干燥4 h，粉碎后过0.425 mm筛，装入干净的密封袋中备用.

1.3 标准溶液及实验溶液的配制

标准溶液配制：以槲皮素作测定样品中黄酮化合物含量的标准物质，精确称取0.020 g.

槲皮素标准品，加乙醇使其溶解稀释，置于50 mL的容量瓶中定容至刻度，得到浓度为400 μg/mL标准品储备液，摇匀，备用.

1%三氯化铝溶液配制：准确称取1.756 7 g的AlCl3·6H2O,加水溶解并稀释，置于100 mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，备用.

1.4 黄酮化合物吸收曲线的绘制及测定波长的确定

准确吸取1.3标准储备液0.5 mL，置于10 mL容量瓶中，加1%的三氯化铝溶液，充分混合并定容至刻度，室温下静置10 min，在波长200～800 nm范围内扫描，绘制出其吸收曲线，如图1.

图1 标准溶液的吸收光谱图

分别称取经1.2处理的样品10.00 g置于250 mL锥形瓶中，用95%的乙醇在20 ℃下，超声波提取25 min，料液比1∶15.抽滤，滤渣重复提取1次，合并滤液，除去溶剂，得浸膏在60 ℃烘箱中干燥至恒重得样品浸膏[6,7].将浸膏用95%乙醇定容至50 mL容量瓶中，摇匀.取其1 mL溶液置10 mL容量瓶中，用1%的三氯化铝溶液定容，摇匀，室温放置10 min，以相应试剂为空白，在200～800 nm范围内扫描，绘制出其吸收曲线，如图2和图3.

图2 茶寄生样品的吸收光谱

由图1～3可知，标准溶液的吸收光谱图和样品的吸收光谱图图形相同，均在270 nm和420 nm有较强吸收.但峰形不对称，这样会给含量测定带来影响.采用三波长光谱法可有效地消除吸收峰不对称给定量分析造成的影响并校正基线倾斜，用作图法确定出3个测定波长分别为λ1=250 nm、λ2=270 nm、λ3=295 nm[8-14].

图3 梨寄生样品的吸收光谱

2 结果与结论

2.1 标准曲线的绘制

分别取0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20 mL的1.3槲皮素标准储备液，置于10 mL容量瓶中，用1%的三氯化铝溶液定容，室温放置10 min，以相应试剂为空白，用三波长光谱法测得相应的ΔA值，绘制成标准曲线，得回归方程：ΔA=17.118C+0.020，相关系数r=0.999 8，说明标准溶液在0.008～0.048 mg/mL范围内，ΔA与浓度C呈良好线性关系，可按标准曲线法进行定量分析.标准溶液浓度与吸光度的关系如表2所示.

表2 标准溶液浓度与吸光度的关系

2.2 样品稳定性实验

用1.4的方法配制样品溶液进行稳定性实验，结果表明：样品放置120 min，测得其吸光度值基本不变，说明样品稳定性较好.

2.3 方法精密度实验

按1.4的方法配制样品溶液，在测定波长下测定ΔA，得到标准偏差和变异系数，结果列于表3.

表3 方法精密度 (μg/mL)

2.4 方法回收率实验

按1.4的方法配制3 个不同浓度样品溶液，按标准加入法加入等量的1.4标准储备液，在测定波长下测定ΔA，得到回收率，结果见表4.

表4 方法回收率 (μg/mL)

由表4可知，实验方法回收率为97.5%～101.9%.

按照1.4的方法处理茶寄生和梨寄生样品，在三波长下分别测定其ΔA值3次，黄酮化合物的含量结果为：茶寄生黄酮化合物含量13.7 mg/g，梨寄生黄酮化合物含量8.05 mg/g.

2.5 结论

本实验采用超声提取茶寄生和梨寄生黄酮化合物，用三波长光谱法测定黄酮化合物的含量.方法的回收率为97.5%～101.9%，变异系数小于0.054%，方法的准确度与精密度均较高.由于ΔA值与黄酮的浓度成正比，在所选择的3个波长处，其相应的吸收光谱曲线上3点在一条直线上，有效地消除吸收峰不对称和基线漂移给定量分析造成的影响，因此三波长光谱法为测定茶寄生和梨寄生的黄酮化合物含量提供了更准确的方法.