Astep Plus特定蛋白分析仪测定超敏C反应蛋白的性能验证

陶明俊 郎家庆 曹科 刘新刚 李飞 李嘉辉 陈运生 马东礼

【摘要】 目的：验证国赛Astep Plus特定蛋白分析仪测定超敏C反应蛋白（hs-CRP）的性能。方法：对Astep Plus特定蛋白分析仪测定hs-CRP的精密度、准确度、线性、携带污染率等性能指标进行验证。结果：批内精密度为3.64%、2.46%、2.33%，批间精密度为9.67%、4.95%，均符合厂家要求；准确度与厂家校准品的偏倚4.47%，与国际参考品的偏倚-2.72%，均符合偏倚≤5%的要求；血清模式线性范围是1.6～320 mg/L，全血模式线性范围是0.5～225 mg/L。携带污染率为0.48%，符合≤1%的要求；20份全血标本中，80%（16/20）偏倚≤12.5%，符合实验要求。结论：Astep Plus特定蛋白分析仪测定hs-CRP的各项性能指标均能达到厂家声明的性能，结果准确、稳定，符合临床质量要求，满足实验室和临床需要。

【关键词】 超敏C反应蛋白； 性能验证； 特定蛋白

【Abstract】 Objective：To verify the performance of the Guo Sai Astep Plus specific protein analyzer in the determination of high sensitivity C-reactive protein（hs-CRP）.Method：The precision，accuracy，linearity and carrying pollution rate and other performance indicators of hs-CRP were determined by Astep Plus specific protein analyzer.Result：The intra-assay precision was 3.64%，2.46%，2.33% and the inter-batch precision was 9.67% and 4.95%，which all met the requirements of the manufacturer.The bias compared with that of factory calibration and international reference was 4.47% and -2.72% respectively，which were all in accordance with the requirements of bias≤5%.The linear range was 1.6-320 mg/L in the serum mode while 0.5-225 mg/L in the whole blood mode.The carrying pollution rate was 0.48%，which meets the requirement of≤1%.Of the 20 whole blood samples，80%（16/20） bias≤12.5%，which met the requirements of the experiment.Conclusion：The performance indexes of hs-CRP by Astep Plus specific protein analyzer can achieve the performance declared by the manufacturer，the results are accurate，stable，meet the clinical quality requirements and meet the laboratory and clinical needs.

【Key words】 High sensitivity C-reactive protein； Performance verification； Specific protein

First-authors address：Shenzhen Childrens Hospital，Shenzhen 518026，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.11.032

隨着医院的发展，患儿日益增多，为适应日益增长的标本对检测结果快速、准确的要求，科室新近引进了由深圳市国赛生物技术有限公司生产的全自动Astep Plus特定蛋白分析仪，采用散射比浊法检测超敏C反应蛋白（hs-CRP）。实验室认可的专用准则-《医学实验室质量和能力认可准则》中，要求申请认可的实验室应对设备、检测系统或方法的主要分析性能进行验证[1-2]，证实其技术性能指标能否满足临床需要[3-4]。笔者查阅相关文献和结合工作实际，制定了验证方案，对Astep Plus特定蛋白分析仪的hs-CRP的分析性能进行验证，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 深圳市国赛生物技术有限公司生产的Astep Plus特定蛋白分析仪（散射比浊法）及配套试剂和校准品（批号20180413）。科室另行购买的伯乐CRP质控品（批号66342）和国际参考品ERM-DA474（欧洲标准局网站购买，批号6094）。对比仪器：深圳市国赛生物技术有限公司Nephstar plus特定蛋白分析仪（散射比浊法）及配套试剂（试剂批号0251170220）。

1.2 标本来源 新鲜静脉血标本均来自深圳市儿童医院门、急诊患者。

1.3 质量控制 实验前对各仪器进行了维护、校准，实验期间室内质控均在控。实验仪器空白值均合格。

1.4 实验方法

1.4.1 精密度 （1）批内精密度：取高值、中值、低值3份浓度的新鲜全血样本，每份样本连续重复测定10次，计算均值、标准差和变异系数（CV），判断是否小于厂家规定（CV≤5%）的性能标准。（2）批间精密度：取中值、低值2个浓度的伯乐质控血清，每天检测1次，连续测定20 d，计算均值、标准差和CV，判断是否小于厂家规定（CV≤10%）的性能标准。

1.4.2 准确度 （1）校准品验证：采用厂家提供1个浓度校准品（靶值160 mg/L），连续检测5次，计算均值和偏倚，判断是否小于厂家规定（偏倚≤5%）的性能标准。（2）参考品验证：采用国际参考品（靶值41.2 mg/L），连续检测5次，计算均值和偏倚，判断是否小于国际参考品规定（偏倚≤5%）的性能标准。

1.4.3 线性范围 （1）血清线性范围：取1份高值血清标准品（靶值为320 mg/L），将标准品与稀释液按比例由低到高稀释成6个浓度梯度，每个浓度重复测定3次，取平均值。将实测值与理论值作比较，计算y=bx+a，验证线性范围。（2）全血线性范围：取1份高值全血样本H（尽量接近范围上限），1份低值全血样本L（检测值约0.5 mg/L）。将高值和低值标本按0∶1、1︰15、1∶7、1∶3、1∶1、1∶0的比例进行混合，制备成6个浓度梯度的样品，每个浓度标本重复测定3次，取平均值。将实测值与理论值作比较，计算y=bx+a，验证线性范围。血清及全血线性范围结果判断：斜率b值为1±0.05，相关系数R≥0.975（或R2≥0.95）即线性符合要求。

1.4.4 携带污染率 取高值、低值全血标本各1份依次测高值3次（H1、H2、H3）、低值3次（L1、L2、L3），计算携带污染率，携带污染率=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%。携带污染率<1%为可接受。

1.4.5 仪器间比较 选20份不同浓度的全血标本，分别在Nephstar plus和Astep Plus仪器各检测1次，以Nephstar plus仪器检测结果为参考结果，以Astep Plus检测结果为比对结果进行偏倚统计，至少80%标本偏倚应≤12.5%。

2 结果

2.1 精密度 3份不同浓度全血标本的批内精密度分别为3.64%、2.46%、2.33%；2份质控血清的批间精密度分别为9.67%、4.95%，均符合廠家要求，见表1、2。

2.2 准确度 校准品5次检测结果分别为160.7、168.14、171.74、172.09、163.11 mg/L，计算得出偏倚4.47%；参考品结果39.14、40.18、41.47、39.65、39.95 mg/L，计算得出偏倚-2.72%。校准品和参考品均符合偏倚应≤5%的要求。

2.3 线性范围 计算相关回归方程，均符合线性要求，得出血清模式线性范围是1.6～320 mg/L，全血模式线性范围是0.5～225 mg/L，血清和全血模式线性检测数据见表3、4，验证结果见图1、2。

2.4 携带污染率 实验结果为H1 95.08 mg/L、H2 97.06 mg/L、H3 93.33 mg/L，L1 2.29 mg/L、L2 1.9 mg/L、L3 1.85 mg/L，根据实验结果计算得出携带污染率为0.48%，符合携带污染率≤1%的要求。

2.5 仪器间比较 经比对，20份全血标本中偏倚≤12.5%有16份，计算得出80%的标本偏倚≤12.5%，符合实验要求，见表5。

3 讨论

感染性疾病是一种临床上常见的儿科疾病，具有多发性，其发病主要与细菌、病毒及支原体等有关[5]。C反应蛋白是一种由肿瘤坏死因子、白细胞介素等炎性因子调节，并由肝细胞合成的非特异性急性时相反应蛋白，hs-CRP是根据测定方法更敏感而命名。既往研究显示，当组织受到损伤、炎症或感染时，C反应蛋白可以在数小时内急剧上升，并在2～3 d达峰值，待病情改善时逐渐下降，恢复正常[6-8]。C反应蛋白被广泛应用于感染的诊断与鉴别诊断，是鉴别细菌或病毒感染的一个首选指标，用于评估感染的严重程度、抗生素的疗效监测[9-11]，且C反应蛋白与多种儿科感染性疾病相关，并在临床上常与PCT等其他指标共同应用于疾病诊断[12-15]。C反应蛋白与PCT联合检测常用于新生儿感染的诊断[16-20]。而全血C反应蛋白的检测快速、方便、经济实惠、结果准确可靠、创伤小，容易被患儿及家长接受[21]。

从本研究验证结果看，Astep Plus特定蛋白分析仪测定hs-CRP的批内精密度和批间精密度均较好，完全符合厂家要求；准确度验证结果显示，与厂家校准品的偏倚为4.47%，特别与国际参考品相比，偏倚仍然很低（仅-2.72%），说明此项目有很好的溯源性，检测结果准确；线性范围的验证实验显示，血清模式线性范围是1.6～320 mg/L，全血模式线性范围是0.5～225 mg/L；携带污染率≤1%；仪器间比较发现20份全血标本中偏倚≤12.5%有16份，计算得出80%的标本偏倚≤12.5%，符合实验要求。相比于旧款的半自动Nephstar Plus仪器，Astep Plus特定蛋白分析仪为全自动，有血清和全血两种模式可选，仪器自动进行结果换算，操作简单，检测速度快（180测试/h），用血量少（仪器吸血量为13 μL），可使用静脉全血管和0.5 mL EP管直接上机检测，特别是直接使用0.5 mL EP管上机检测时，标本最少只需要17μL，特别适合儿科使用。

综上所述，Astep Plus特定蛋白分析仪测定hs-CRP的各项指标能达到厂家声明的性能，结果准确、稳定，符合临床质量要求，满足实验室和临床需要。

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