低咖啡因普洱茶提取物的通便功能实验研究

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1.广东省医学实验动物中心，广东 佛山 528248； 2.天士力研究院，天津 300410

便秘是一种常见的消化系统疾病，虽然理论上不会增加病死率，但却可直接降低人们的生活质量。当慢性便秘引起高血压或者排便用力诱发急性心脑血管疾病等并发症时，可严重危害患者的健康[1]。据流行病学调查，随着人们生活方式和饮食结构的改变，伴随精神、心理等社会因素的影响，全球便秘的发病率呈上升趋势，我国功能性便秘的发病率约为10%～15%[2]。

普洱茶为山茶科植物普洱茶的嫩叶，味苦、甘，性寒，归胃、肝、大肠经。普洱茶作为一种传统历史名茶，因其独特的口感和多种保健功能深受人们喜爱。清朝药学家赵学敏在《本草纲目拾遗》中记载：“普洱茶膏黑如漆，醒酒第一。绿色者更佳，消食化痰，清胃生津，功力尤大也”；卷六《木部》又写道：“普洱茶膏能治百病，如肚胀，受寒，用姜汤发散，出汗即可愈。口破喉颡，受热疼痛，用五分茶膏噙口内，过夜即愈”[3]。现代文献记载，普洱茶具有降脂、减肥、抗肿瘤、杀菌、抗疲劳、抗氧化和预防心血管疾病等功能[4]。

本实验的普洱茶产地是云南普洱，通过优化普洱茶的提取工艺得到低咖啡因普洱茶提取物，主要成分组成有茶多酚、茶褐素和茶多糖等。本普洱茶提取物的特点是咖啡因含量低，普通普洱茶提取物中咖啡因的含量为7%～9%，本普洱茶提取物中咖啡因的含量为2%～4%，安全性更高[5]。实验中，通过小鼠的小肠运动实验和排便实验，研究此低咖啡因普洱茶提取物对实验性便秘小鼠的通便作用，评价其作为通便保健产品的开发价值。

1 材料和方法

1.1 实验动物及实验环境 SPF级BALB/c小鼠100只(小肠运动实验50只，排便实验50只)，均为雄性，体重18～22 g，均购于广东省医学实验动物中心〔SCXK(粤)2013-0002〕，实验动物质量合格证编号44007200017304、44007200017388。所有动物实验操作均在广东省医学实验动物中心实验设施内进行，实验动物使用许可证号：SYXK(粤)2013-0002。

1.2 药品与试剂 低咖啡因普洱茶提取物粉末(批号：20130926，云南天士力帝泊洱生物茶集团有限公司)；复方地芬诺酯片(批号：12030401，河南鼎昌药业有限公司)；阿拉伯树胶(批号：20101119，天津市大茂化学试剂厂)；活性炭(批号：20100611，茂名市鸿生活性炭厂)；屈臣氏蒸馏水(批号20150104，广州屈臣氏食品饮料有限公司)。

1.3 仪器 JEA3001型电子天平(精度：0.1 g，上海浦春计器有限公司)；BS223S电子天平(精度：0.001 g，德国sartorius公司)；YP3001N电子天平(精度0.1 g，上海精密科学仪器有限公司)。

1.4 低咖啡因普洱茶提取物的提取工艺[5]取适量的普洱熟茶和生茶，分别加10倍水80 ℃提取2次，每次1 h，过滤，茶渣再加入8倍量的水，80 ℃提取0.5 h，过滤，合并提取液，过300目滤布，滤液减压真空浓缩，离心，分别得到熟茶上清液和生茶上清液。取熟茶上清液，加入95%乙醇，醇沉，过夜离心，加水复溶，离心，得上清，喷雾干燥，得到熟茶提取物；取生茶上清液，喷雾干燥得到生茶提取物。熟茶提取物和生茶提取物以4∶1比例混合均匀，得到本次实验所用普洱茶终提取物。

1.5 分组和干预方法 将小肠运动实验和排便实验的各50只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、普洱茶提取物低、中、高剂量组，各5组，10只/组。以人体推荐量的10倍、20倍和30倍作为普洱茶提取物低(0.5 g/kg BW)、中(1.0 g/kg BW)、高(1.5 g/kg BW)剂量组，正常对照组和模型对照组给予蒸馏水。各组动物分别给予相应的药物，按照0.2 mL/10 g的剂量灌胃给药，连续14 d。本实验所有动物实验操作均经过广东省医学实验动物中心实验动物伦理委员会批准。

1.6 模型建立和墨汁给予方法[6]各组动物灌胃14 d 后禁食16 h，除正常对照组给蒸馏水外，其余各组均灌胃给予复方地芬诺酯(小肠运动实验剂量为5 mg/kg BW，排便实验剂量为10 mg/kg BW)建立实验性便秘小鼠模型。给予复方地芬诺酯0.5 h后，各剂量组分别给予含相应样品的墨汁(以墨汁作溶剂)，动物均单笼饲养，正常饮水进食。正常对照组和模型对照组给予墨汁灌胃，墨汁按照0.2 mL/10 g BW给予。

1.7 指标检测方法

1.7.1 小肠运动实验 给予墨汁25 min 后颈椎脱臼处死动物，测量小肠总长度，计算墨汁推进率。

墨汁推进率(%)= 墨汁推进长度(从幽门至墨汁前沿)/小肠总长度(幽门至回盲部)×100%。

1.7.2 排便实验 从灌墨汁开始，记录每只动物首粒排黑便时间，5 h内排黑便粒数及重量。

2 结果

2.1 墨汁推进率(数据转换后进行统计) 与正常对照组比较，模型对照组小鼠的墨汁推进率转换值降低(P<0.01)，提示模型建立成功。与模型对照组比较，普洱茶提取物低、中剂量组小鼠的墨汁推进率转换值未见统计学差异(P>0.05)，普洱茶提取物高剂量组小鼠的墨汁推进率转换值升高(P<0.01)。见表1。

组别墨汁推进率/%墨汁推进率转换值(X)正常对照组87 10±10 061 13±0 28模型对照组51 70±8 220 55±0 10△△普洱茶提取物低剂量组59 20±12 160 64±0 17普洱茶提取物中剂量组65 60±12 870 74±0 22普洱茶提取物高剂量组80 10±14 321 01±0 34∗∗

注：与正常对照组比较，△△P<0.01；与模型对照组比较，**P<0.01。

2.2 首次排黑便所需时间、5 h内排黑便粒数和5 h内排黑便重量 与正常对照组比较，模型对照组小鼠的首次排黑便时间延长、5 h内排黑便粒数和重量均减少(P<0.01)；与模型对照组比较，普洱茶提取物低、中、高剂量组小鼠的首次排便时间缩短、5 h内排黑便粒数增多和黑便重量加重(P<0.05或P<0.01)。见表2。

3 讨论

从实验结果可以看出，本实验的低咖啡因普洱茶提取物可以增加小鼠小肠运动实验中的墨汁推进率、缩短小鼠排便实验中的首次排便时间、增多5h内排黑便粒数和增加5 h内排黑便重量，具有促进小鼠通便的功能。

组别首次排黑便时间/s5h内排黑便粒数/粒5h内排黑便重量/g正常对照组64 2±30 526 6±5 70 38±0 11模型对照组230 5±34 5△△10 0±8 4△△0 15±0 15△△普洱茶提取物低剂量组180 7±33 6∗∗16 9±7 9∗0 29±0 14∗普洱茶提取物中剂量组191 2±40 4∗18 6±7 4∗∗0 30±0 13∗普洱茶提取物高剂量组119 5±39 4∗∗20 5±3 8∗∗0 34±0 07∗∗

注：与正常对照组比较，△△P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

对于便秘的治疗，西医学主要有灌肠、口服和外用西药等的方法，中医学主要有口服中药、针灸治疗、推拿按摩等方法[7]。美国结肠和直肠外科医师学会(ASCRS)在2016年《临床实践指南：便秘的评估和管理》中提出：便秘最初的治疗是饮食调整，包括水和膳食纤维的补充[8-9]。所以预防和治疗慢性便秘除了饮食调配和常用的药物治疗外，饮用具有通便功能的茶类保健品，也是一种较好的选择，日常调理方便且易于坚持。

本普洱茶提取物具有低咖啡因的特点。茶中含有的咖啡因对大脑有兴奋作用，对心脏有一定的刺激作用，它可以导致神经细胞活动增高，引起心跳加快、血压增高等副作用[5]。本普洱茶提取物通过优化提取工艺，有效地降低了咖啡因的含量，具有辅助小鼠通便的功能，具有一定的开发价值。对于通便的作用机理，还需后续进一步研究。

参考文献

[1]王佩佩,罗雯,禹铮,等.慢性便秘的研究进展[J].中国全科医学,2017,20(3):370-374.

[2]崔龙.便秘治疗的再认识[J].临床外科杂志,2016,24(6):411-412.

[3]云南天士力帝泊洱生物茶集团有限公司.一种普洱茶提取物在制备调节肠道菌群及通便的药物或食品中的应用:中国,CN201310295829.4[P]. 2015-01-21.

[4]屈用函,邵宛芳,侯艳.普洱茶功效的研究进展及展望思茅师范[J].高等专科学校学报,2010,22(1):10-13.

[5]云南天士力帝泊洱生物茶集团有限公司.一种低因茶粉及其制备方法:中国, CN201210019755.7[P]. 2013-07-31.

[6]中华人民共和国.保健食品检验与评价技术规范(2003版)[S].159-161.

[7]张天琦,黄涛,房耘耘,等.中医药治疗便秘的研究进展[J].中医药导报, 2016, 22(23):84-90.

[8]Paquette IM,Varma M,Ternent C,et al.The American Society of Colon and Rectal Surgeons’ Clinical Practice Guideline for the evaluation andmanagement of constipation[J]. Dis Colon Rectum,2016,59(6):479-492．

[9]刘晓峰.慢性便秘非手术治疗的进展[J].中华消化病与影像杂志,2017,7(2):49-52.