顶空毛细管气相色谱法测定克林霉素磷酸酯中甲酸残留量

李超

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121）

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顶空毛细管气相色谱法测定克林霉素磷酸酯中甲酸残留量

李超

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121）

目的 建立测定克林霉素磷酸酯中甲酸残留的顶空毛细管气相色谱法。方法 使用Agilent DB－FFAP毛细管柱（30 m×0．32 mm，0．5 μm）及氢火焰离子检测器（FID），进样口温度200℃，检测器温度250℃；程序升温，初始温度为40℃，保持6 min，然后以30℃ ／min的速率升温至180℃，保持3 min；顶空进样，平衡温度为65℃，平衡时间为30 min。结果 甲酸质量浓度在0．003 743～0．998 0 g／L范围内与峰面积线性关系良好，r＝0．999 2（n＝8），平均回收率为99．30%，RSD为0．64%（n＝12）。结论 该方法简便，灵敏度高，重复性好，结果准确，适用于克林霉素磷酸酯中甲酸残留量的测定。

克林霉素磷酸酯；甲酸；顶空进样法；毛细管气相色谱法；含量测定

克林霉素磷酸酯（clindamycin phosphate）是广泛应用于革兰阳性球菌及厌氧菌所致严重感染的半合成抗菌药物。在其原料药的合成工艺中，多使用原甲酸三乙酯[1－3]。后者在合成过程中会水解生成甲酸和乙醇。甲酸有急性毒性、刺激性和致突变性，而2015年版《中国药典（二部）》[4]并未对甲酸进行检测，亦未发现有关测定克林霉素磷酸酯原料药中甲酸残留的文献。由于甲酸在气相色谱的氢火焰离子检测器（FID）的响应信号很弱，无法用气相色谱仪直接测定，笔者参考文献[5－10]，并根据在硫酸条件下甲酸与乙醇反应生成甲酸乙酯的原理，将甲酸衍生成甲酸乙酯，然后采用顶空气相色谱法进行测定，并按照2015年版《中国药典（四部）》通则9101“药品质量标准分析方法验证指导原则”[7]对方法进行了验证，效果满意。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Clarus680气相色谱仪，FID，TurboMatrix40型顶空进样器（珀金埃尔默公司）；MSU－224S型电子分析天平（赛多利斯公司）。

1．2 试药

3批克林霉素磷酸酯原料药均由A公司提供，根据其批号的不同分别记作S1，S2，S3；无水甲酸，乙醇，硫酸，甲酸乙酯均为分析纯；水为纯化水。

2 方法与结果

实验组经新辅助放化疗后，CR 9例，PR 29例，PD 3例，SD 12例；新辅助放化疗前后患者临床分期变化情况。化疗前：Ⅱ期 34例，Ⅲ 19例；化疗后：Ⅰ期 24例，Ⅱ期 25例，Ⅲ 4例。见表1。

初中数学学科涉及的知识范围广，难度大，平时还有许多考试，需要时间进行复习，因此，对教师的教学进度有一定要求。这使得教师的教学过程往往以提高课堂教学效率为目标，在培养学生独立思考能力方面就会流于表面，只注重形式化的过场，而没有把培养学生独立思考能力的教学活动真正落到实处，学生无法理解独立思考的本质，也就无法提高自身的独立思考能力。

在智慧城市建设公众参与水平评价体系中，各指标最优化的量值处理后为1，用其他量值减去1后取平方，则构成了模糊的差平方复合模糊物元

耐用性试验：分别考察了不同编号的2根Agilent DB－FFAP毛细管柱（30 m×0．32 mm，0．5 μm），初始柱温±2℃，流速±0．2 mL／min，进样口温度±5℃，检测器温度±5℃。经试验，上述测定条件小的变动能满足系统适用性试验要求。

5%（V／V）硫酸水溶液：将50 mL硫酸慢慢加入到950 mL水中，混匀，放冷备用。

15%（V／V）硫酸乙醇溶液：将15mL硫酸慢慢加入到85 mL乙醇中，混匀，放冷备用。

对照品溶液：称取无水甲酸4．990 2 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，用5%硫酸水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（1）；精密量取对照品贮备液（1）1 mL，置50 mL容量瓶中，用5%硫酸水溶液稀释至刻度，作为对照品贮备液（2）；精密量取对照品贮备液（2）1 mL，置20 mL顶空瓶中，精密加入15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，摇匀，作为对照品溶液。

2．1 色谱条件

供试品溶液：称取样品0．20 g，精密称定，置20 mL顶空瓶中，精密加入5%硫酸水溶液1 mL和15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，摇匀，作为供试品溶液。

空白溶液：精密量取5%硫酸水溶液和15%硫酸乙醇溶液各1 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，摇匀，即得。

“二表哥说，因为老太太最疼小女儿，如果让老太太知道小女儿死了，她一定会难过死。又说，他会向大表哥说明一切，大表哥是个孝子，知道出了这种事后该怎么做，最主要的是不惊动老人。

12月7日4版《加快上海咨询业转型升级》，其“树立和增强加快现代咨询服务业发展的迫切感和使命感”，用“增强加快现代……迫切感和使命感”为准；树立迫切感和使命感，此话不通。

2．3 方法学考察

系统适用性试验：取2．2项下对照品溶液、供试品溶液、空白溶液和甲酸乙酯溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图（见图1）。结果，衍生物峰与甲酸乙酯峰一致，与相邻峰分离度均不小于1．5，空白溶剂对测定无干扰。

色谱柱：AgilentDB－FFAP毛细管柱（30m×0．32mm，0．5 μm）；检测器：FID检测器；程序升温：初始温度40℃，维持6 min，然后以30℃ ／min的速率升至180℃，保持 3 min；进样口温度：200℃；检测器温度：250℃；顶空进样：平衡温度65℃，平衡时间30 min，进样时间0．08 min。

线性关系考察：精密量取 2．2项下对照品贮备液（1）适量，用5%硫酸水溶液稀释成甲酸质量浓度分别为 0．003 743，0．049 900，0．099 800，0．249 500，0．399 200，0．499 000，0．748 500，0．998 000 g／L的溶液，取上述溶液各1 mL，置20 mL顶空瓶中，精密加入15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，摇匀，按拟订色谱条件进样。以甲酸质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝3．733 6×106X＋1．538 6×104，r＝0．999 2（n＝8）。结果表明，甲酸质量浓度在0．003 743～0．998 0 g／L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密量取对照品溶液，按拟订色谱条件连续进样6次，记录色谱图，测量甲酸乙酯峰面积。结果的 RSD为1．09%（n＝6），表明仪器精密度良好。

甲酸乙酯溶液：称取甲酸乙酯164．6 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，用5%硫酸水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置20 mL顶空瓶中，精密加入15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，摇匀，即得。

加样回收试验：分别配制相当于2．2项下对照品贮备液（2）质量浓度的 0．75%（定量限浓度），50%，100%，120%作为回收对照品溶液。称取已测得甲酸残留量的编号为S1的样品9份，各0．20 g，精密称定，分别置20 mL顶空瓶中，分别精密加入回收对照品溶液1 mL和15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，摇匀，每个浓度平行制备3份。按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图，计算回收率。结果见表1。

稳定性试验：取同一供试品(编号为S1)溶液，分别于室温下放置0，2，4，6，8 h，按拟订色谱条件进样，测定峰面积。结果的 RSD为1．38%（n＝5），表明样品在室温下8 h内稳定。

图1 气相色谱图

定量限和检测限试验：取对照品溶液适量，用5%硫酸水溶液逐步稀释，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图。以信噪比为10∶1时对照品的质量浓度为定量限，甲酸的质量浓度为3．13 μg／mL；以信噪比为3∶1时的对照品质量浓度为检测限，甲酸的质量浓度为0．94 μg／mL。

重复性试验：取编号为S1的样品6份，各0．20g，精密称定，置20 mL顶空瓶中，精密加入5%硫酸水溶液1 mL和15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，按拟订色谱条件进样测定。结果样品中甲酸的含量为0．001 6%，RSD为1．68%（n＝6），表明方法重复性良好。

表1 甲酸加样回收试验结果（n＝12）

2．2 溶液制备

教育素养是指父母为了合格地担当家庭教育实施者的角色，在教育子女的过程中应当具备的特殊品质，包括教育知识、教育观念与教育能力。[2]年轻父母对家庭教育问题失察，受到家庭教育本身特点的影响，也和年轻父母自身的素养及行为方式有密切关系。

2．4 样品含量测定

宇航员在宇宙空间中穿的衣服和在地面上差不多，比如T恤和短裤。他们不像在地面时那样经常换衣服——毕竟，在空间站里没有洗衣机。

按2．2项下方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图，按外标法计算供试品中甲酸的含量。结果样品编号为S1，S2，S3的溶液中甲酸的相对百分含量分别为0．001 6，0．001 7，0．001 8（限度为0．500 0%）。

路面基层检测合格及模板安装完成后，进行钢筋网安装。先将横筋按设计尺寸布置于底层，再将纵筋布置横筋上方，在此过程中要注意钢筋在板厚方向的高度，预留足够的保护层厚度。钢筋布置完成后进行钢筋连接，纵向钢筋接头采用电弧单面焊接，搭接长度为16cm，焊接接头处应错开布置，接头连线与路面行车方向成45°夹角，纵向钢筋与横向钢筋交叉处采用钢丝绳绑扎。采用φ16钢筋弯拉制做成“Ω”形置于横向钢筋下作为钢筋支架，并采用电焊连接，横向布置间隔约为150cm，纵向布置间隔约为120cm。

3 讨论

甲酸又称蚁酸，为无色液体，有明显刺激性臭味，也是强还原剂，在饱和脂肪酸中酸性最强。甲酸作为有机化工原料，广泛应用于化工行业的有机合成，轻工行业中的皮革、造纸等，也是生产农药、医药的重要原料[8]。甲酸可经皮肤吸收，对皮肤及黏膜的刺激性强，其腐蚀性与强无机酸相似。高体积分数（75%～80%）甲酸溶液可造成灼伤和组织坏死，其表现与盐酸、硫酸等无机酸中毒相似，但误服后较少造成食道狭窄，稀甲酸溶液（9%）对口腔黏膜的损害也较轻[9]。甲酸在体内经广泛氧化代谢，最后生成为二氧化碳和水[10]。

甲酸是药品残留溶剂测定的第3类溶剂，是很多药品生产中必须使用的原料。由于甲酸性质活泼，具有较强的酸性、腐蚀性和还原性，且分子量较小，出峰响应低，直接测定较困难[11]。甲酸的测定方法有气相色谱法、液相色谱法、离子色谱法。离子色谱法仪器特殊，而在液相色谱法中，甲酸保留时间很短，干扰较多，故本研究中采用气相色谱法对甲酸进行测定。由于甲酸在FID检测器上响应极低，不便于检测。如采用气相色谱－质谱联用（GC－MS）法可对甲酸进行测定，但成本过高。本研究中采用酯化反应法，在硫酸条件下将甲酸与乙醇定量生成甲酸乙酯进行测定，显著改善了在FID检测器的响应值，提高了方法灵敏度。本研究中考察了65，80，85，90℃ 4个顶空温度对测定的影响。结果显示，随着平衡温度的升高，甲酸乙酯的峰面积虽然逐渐增大，但是出现的干扰峰也随之增多，影响测定结果，为保证准确性，最终选择65℃作为平衡温度。顶空平衡时间考察了20，25，30，40 min，结果甲酸乙酯的峰面积随时间的增加逐渐增大，且30 min和40 min的峰面积较接近，最终选择30 min作为顶空平衡时间。本研究中过量加入了硫酸和乙醇，通过甲酸乙酯溶液计算对照品溶液中反应生成的甲酸乙酯的量，实际测得对照品溶液中生成的甲酸乙酯量与甲酸完全反应生成甲酸乙酯的理论量的比值为1．005。说明本研究中甲酸能完全反应生成甲酸乙酯。且由于3批样品均检出了甲酸乙酯，故有必要对其进行控制，以确保药品质量的稳定可控。

综上所述，本研究中建立的方法安全、准确，灵敏度高，可用于克林霉素磷酸酯中甲酸残留的测定。

[1]蒋忠良，许凌月，马东旭，等．克林霉素磷酸酯的合成研究[J]．同济大学学报(自然科学版)，2004，32（12）：1693－1695．

[2]李有桂，崔 盛，张道俊，等．克林霉素磷酸酯的合成克林霉素磷酸酯的合成[J]．广州化工，2012，40（11）：87－88．

[3]李 利，吴 磊．克林霉素磷酸酯的合成[J]．安徽化工，2000，20（6）：15－16．

[4]国家药典委员会．中华人民共和国药典（二部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2015：441－443．

[5]吴小英．毛细管气相色谱法测定卡泊三醇中甲酸残留量[J]．安徽医药，2012，16（3）：308－309．

[6]信清华，尹洪银，程 虎．顶空气相色谱法测定药品的甲酸残留的研究[J]．中国卫生检验杂志，2010，20（8）：1921．

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[8]宋志新，张 华，丁建文．顶空气相色谱法测定帕肝素钠中的残留溶剂[J]．食品与药品，2016，18（3）：183－185．

[9]任新安，李艳妮，刘俊爱，等．液相色谱法测定茶碱中甲酸残留量[J]．河北化工，2007，30（8）：79－80．

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Content Determination of Formic Acid in Clindamycin Phosphate by Headspace Capillary GC

Li Chao
（Chongqing Institute For Drug and Food Control，Chongqing，China 401121）

Objective To establish an headspace capillary GC method for the content determination of formic acid in clindamycin phosphate．M ethods Agilent DB－FFAP capillary column（30 m×0．32 mm，0．5 μm）and FID were adopted．The inlet temperature was 200℃and the FID detector temperature was 250℃．The oven temperature was initially held at 40℃ for 7 min and was then programmed to 150℃ at 30℃ ／min and held for 3 min．The head－space sampling was used at heated temperature 65℃ for 30 min．Results The concentration of formic acid was linear in the range of 0．003 743－0．998 0 g／L，r＝0．999 2（n＝8）．The average recovery rate was 99．30%，RSD＝0．64%（n＝12）．Conclusion The method is simple，sensitive，reproducible and accurate．It is suitable for the content determination of formic acid residue in clindamycin phosphate．

clindamycin phosphate；formic acid；head－space injecting method；capillary gas chromatography；content determination

R917；R927．11

A

1006－4931(2017)14－0014－03

2017－03－15；

2017－04－10)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．14．005

李超，女，汉族，重庆人，硕士研究生，主管药师，主要从事药物质量控制工作，（电子信箱）179320851＠qq．com。