高效液相色谱法测定豆制品(腐竹)中吊白块的含量

冯建文

(黑龙江省农业科学院园艺分院，哈尔滨 150069)



高效液相色谱法测定豆制品(腐竹)中吊白块的含量

冯建文

(黑龙江省农业科学院园艺分院，哈尔滨 150069)

目的：建立高效液相色谱法(HPLC)直接测定各类食品中吊白块的特异性，准确度高的方法,以保证人体健康。方法：在酸性溶液中，食品中残留的甲醛次硫酸氢钠分解释放出甲醛和亚硫酸盐，甲醛与2，4-二硝基苯肼发生加成反应生成黄色产物，该产物在HPLC上用乙腈与水做流动相，通过C18柱分离，利用紫外检测器，在365nm波长下测定。结果：其产物有很高的响应值，其色谱峰面积与吊白块的含量呈正相关，r=0.9998，线性范围为0～52μg，回收率94.0%～100.5%，RSD=2.6%。结论：该方法特异性强，准确度高，重复性好，线性关系好，适用于多种食品中添加吊白块的检测。

吊白块(甲醛次硫酸氢钠)；甲醛；高效液相色谱法；二硝基苯肼

0　引言

吊白块, 又称雕白粉，系以福尔马林结合亚硫酸氢钠再还原制得，化学名称甲醛次硫酸氢钠, 分子式NaHSO2· CH2O· 2H2O, 分子量154.11, 常在印染工业和橡胶工业中使用。常温下较为稳定，高温下具有极强的还原性，有漂白作用，易溶于水，遇酸即分解，其水溶液在60℃以上就开始分解出有害物质，120℃以下分解产生甲醛、二氧化硫和硫化氢等有毒气体。[1]

吊白块是一种强致癌物质，对人体的肺、肝脏和肾脏损害极大，普通人经口摄入纯吊白块10克就会中毒致死，其高温分解出来的甲醛能与体细胞的原生质中的蛋白质结合, 改变蛋白质的内部结构并凝固, 从而具有杀伤力。甲醛对中枢神经系统有麻醉作用, 尤其是对视力有强烈的毒害作用；甲醛还能损伤细胞内的遗传物质, 是可疑的致癌物和重要的环境污染物。[2]虽然国家明文规定严禁在食品加工中使用，但还是被一些不法商贩作为增白、防腐、增强韧性用于豆制品、米粉、鱼翅、糍粑等食品加工中，造成食品污染，严重影响人体健康。

本实验采用高效液相色谱法测定豆制品(腐竹)中甲醛含量，间接测定是否添加吊白块，以确保食品质量安全，保障人体健康。

本实验依据GB/T 21126-2007《小麦粉和大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠的含量测定》，采用高效液相色谱法测定豆制品中甲醛次硫酸氢钠含量。[3]该法在酸性溶液中，样品中残留的甲醛次硫酸氢钠分解释放出的甲醛被水提取，提取后的甲醛与2，4-二硝基苯肼发生加成反应,生成黄色的2,4-二硝基苯腙，用正己烷萃取后，经高效液相色谱仪分离，与标准甲醛衍生物的保留时间对照定性，用标准曲线法定量。

1　实验仪器和试剂

1.1仪器

岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪 No：I-HPLC-201010-007(色谱柱：C18柱 检测器：紫外检测器)；Discovery DV215CD电子天平；SHA-C水浴恒温振荡器；组织搅碎机；旋涡混匀器；CU-600恒温水浴锅。

1.2试剂及溶液

所用化学试剂中，乙腈、正己烷为色谱纯，其余均为分析纯；实验用水为重蒸水、

1)甲醛/水溶液(10.4mg/ml；中国计量科学研究院；批号：10001 BW3450)；

2)盐酸-氯化钠溶液：称取20g氯化钠与1000ml量瓶中，用少量水溶解，加60ml37%的盐酸，加水至刻度；

3)磷酸氢二钠溶液：称取18gNa2HPO4·12H2O，加水溶解并定容至100ml；

4)2,4-二硝基苯肼纯化：称取20g2,4-二硝基苯肼于烧杯中，加167ml乙腈和500ml水，搅拌至完全溶解，放置过夜。用滤纸过滤结晶，分别用水和乙醇洗涤5-6次后于干燥器中备用；

5)衍生剂：称取经纯化处理的2,4-二硝基苯肼200mg，用乙腈溶解并定容至100ml；

6)甲醛标准使用液：准确移取甲醛/水溶液500μl，加水溶解并定容至100mL，此溶液每毫升含甲醛0.052mg；

7)样品：腐竹(A厂 批号：0453)，腐竹(B厂 批号：0456)，腐竹(C厂批号：046204650469 )。

2　实验方法

2.1色谱分析条件

化学键合C18柱(4.6mm×250mm)，粒径5μm；流动相乙腈-水(70：30)；流速0.8ml/min；检测波长365nm，进样量10μl；柱温40℃。

2.2样品前处理

精确称取5g豆制品于250ml的具塞三角瓶中，加200ml盐酸-氯化钠溶液，于组织搅碎机中匀浆3min，置于振荡器上振荡提取40min。移取20ml提取液于50ml的离心管中，于12000r/min离心15min，上清液备用。

2.3样品和标准溶液的制备

2.3.1样品溶液的制备

取2.0ml样品处理所得上清液于25ml比色管中，加入1.0ml磷酸氢二钠溶液、0.5ml衍生剂，补加水至10ml，盖上塞子，涡旋混匀。于50℃恒温水浴加热40min，取出用流水冷却至室温。准确加入5.0ml正己烷，将比色管横置，水平方向振摇5次，再将比色管倾斜放置，增加正己烷与水溶液的接触面积。在一个小时内，每隔5min振摇3～5次。再静置30min，取正己烷层，过0.45μm有机相微孔滤膜，直接供HPLC测定。

2.3.2曲线的绘制与样品测定[4]

准确移取甲醛/水溶液500μl，加水溶解并定容100mL，此溶液每毫升含甲醛0.052mg。制成甲醛标准使用液(52μg/ml)。准确移取甲醛标准使用液0μl、50μl、100μl、200μl、500μl、1000μl(相当于0、2.6、5.2、10.4、26、52μg甲醛)于25ml比色管中，分别加入2.0ml盐酸-氯化钠溶液、1.0ml磷酸氢二钠溶液、0.5ml衍生剂，补加水至10ml，盖上塞子，涡旋混匀，按2.3.1处理，即得。取10μl进样，根据保留时间定性，峰面积定量，每个浓度重复做两次，取平均值，以峰面积与甲醛浓度，绘制标准曲线。取样品处理液10μl注入HPLC测得积分面积后从标准曲线查出相应的浓度，计算甲醛含量。

2.4标准曲线及相关系数

通过配制的甲醛标准溶液按2.3.2进行，在最佳实验条件下，做峰面积(Y)与甲醛含量(X)的关系曲线，得到其线性方程为Y=74380X+5194.9(r=0.9998)

表1　标准曲线的相关数据

结果表明，甲醛含量在0-52μg时线性关系良好。

2.5精密度试验

取样品(C厂 批号0465)5g，精密称定，按照2.3.1处理，制备供试品溶液。在相同的色谱条件下测定6次,结果如下：结果表明，精密度良好。

表2　精密度试验

2.6样品稳定性试验

样品0456按2.2项下方法处理，按2.3.1制备供试品溶液，进行稳定性试验，在0h、2h、4h、6h、8h分别测定其峰面积。

表3　样品稳定性试验

结果表明，样品溶液在8小时内稳定性良好，RSD=2.5%。

2.7重复性试验

取同一批样品(A厂 批号0453)，按2.2项下方法处理，按2.3.1制备6份供试品溶液，测得结果如下：

表4　重复性试验

2.8加样回收率试验

精密称取约5g样品(B厂 批号0456)，加入相应量的甲醛标准溶液，按2.3.1制备供试品溶液，依法测定，按下列公式计算回收率。

回收率=(测得量-样品含量)/标准加入量×100%

表5　加样回收率试验

3　样品测定结果

按2.2项下方法处理样品，按照2.3.1制备供试品溶液，分别对5批样品进行含量测定，结果如下：

4　讨论

4.1反应条件的选择

批号称样量生产企业含量(μg/g)04535.0967A厂25.7204565.0098B厂5.3604625.0123C厂3.7904655.0909C厂4.6804695.0979C厂3.86

图1　对照品液相色谱图

图2　供试品色谱图

试验中通过高效液相色谱法测定产物2，4-二硝基苯腙的含量，间接求出样品中甲醛含量，在试验中加入磷酸氢二钠，且水浴温度控制在50℃的原因是：产物苯腙熔点较低，且在酸性条件下可水解为原来的醛，为防止苯腙水解，需控制溶液的pH值、反应温度在一定范围内.[6]实验表明，在50℃时有利于苯腙的合成反应，又不会造成其他成分的分解，色谱峰稳定清晰。

4.2萃取

用正己烷萃取水溶液中的苯腙时，需每隔5min振摇3～5次，使两种非均相溶剂充分混合，提高萃取效率。试验中易发生乳化现象，使两液相不能很清晰地分开，可采用以下方法处理:[7]1)较长时间放置；2)因碱性原因产生乳化，可加入几滴稀硫酸振摇后破除乳化；3)还可加入破坏乳化的物质如乙醇，增大苯腙在有机相中的溶解度，更好得溶于正己烷中。

4.3结果分析

由于食品中大多含有不同水平的甲醛本底值,[8]按照实验方法测得的甲醛含量超过国家标准上限值10ug/g时，需要考虑是人为添加的吊白块分解产生的甲醛，还是由于食品本身在该实验条件下处理分解产生的甲醛。即存在不确定因素，有待继续探索研究。

5　结语

本方法采用酸水解的方法解离出豆制品中甲醛后，通过2，4-二硝基苯肼衍生—高效液相色谱法测定样品中甲醛的含量，具有良好的线性关系，灵敏度高，重复性好，适用于豆制品中甲醛含量测定.[5]通过甲醛含量的测定值，可以间接检测出食品中是否添加吊白块，即甲醛次硫酸氢钠含量是否超过国家标准值。

[1]冯婧媛.食品中添加吊白块的危害及检测方法[J].保鲜与加工， 2011，11(4)：43-47.

[2]余明池.食品中吊白块的测定方法研究进展[J].安徽预防医学杂志，2009，8(4):280-281. [3]GB/T21126-2007.小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定[S].

[4]蔡宝昌.中药制剂分析[M].高等教育出版社，2007:90-93.

[5]马敬军，周德庆，柳淑芳等.二硝基苯肼衍生—高效液相色谱法测定水产品中甲醛含量的研究[ J]. 海洋水产研究，2005, 26(1): 28-31.

[6]倪沛洲.有机化学[M].6.人民卫生出版社，2010:281-282.

[7]宋毛平，刘宏民，王敏灿.有机化学实验[M].郑州大学出版社，2004:64-65.

[8]邓红，刘晓莉，魏强等.淀粉及面制品中吊白块的鉴定试验探讨[J]. 中国食品卫生杂志，2002, 14(3): 21-24.

(编辑马海超)

The Determination of Sodium Sulfoxylate Formaldehyde in Bean Products by HPLC

FENG Jianwen

(Department of Gardening, Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150069, China)

Objective: Establish a method with high specificity and accuracy for the direct determination of sodium sulfoxylate formaldehyde in foods by high performance liquid chromatography (HPLC), in order to keep people’s health. Methods: The sample was analyzed to sulfur dioxide and formaldehyde under acidic conditions. Formaldehyde and 2,4-Dinitrophenyl hydrazine produce a yellow substance. The product in HPLC by water and acetonitrile mobile phase, was separated by C18column, using UV detection. The absorbance was determined by pararosaniline hydrochloride colorimetric at 365 nm．Results: The products have a high response value. And the chromatographic peak area was positively correlated with the content of sulfoxylate, r=0.9998; and linear range was 0～52μg; recovery is 94.0%～100.5%; and RSD=2.6%．Conclusions: This method has a strong specificity, high accuracy, good repeatability, and good linear relationship, which is suitable for determination of most kinds of foods with sodium sulfoxylate formaldehyde．

sodium sulfoxylate formaldehyde (SSF); formaldehyde; high performance liquid chromatography (HPLC); dinitrophenyl hydrazine

2016-03-01

冯建文(1988.03—)，科员。主要研究方向：蔬果加工。

S-3

B

1672-0601(2016)06-0001-04