乌海市3 918例女性HPV基因分型结果的分析

武燕红　吕伟　郑海燕　王珍　裴刘成



乌海市3 918例女性HPV基因分型结果的分析

武燕红吕伟郑海燕王珍裴刘成★

［摘要］目的探讨内蒙古乌海地区妇女人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染情况及各亚型的分布。方法回顾分析2008年10月至2015年5月在我院妇科就诊的女性患者3 918例，采用PCR＋导流杂交法对其宫颈脱落细胞进行21种HPV基因型检测的结果。结果3 918例样本中阳性1 957例，感染率为49．95%，21种亚型均有检出。HPV16（12．81%）、HPV52（8．65%）、HPV58 （8．58%）、HPV53（5．36%）及CP8304（4．59%）感染率较高，感染年龄主要分布在21岁～49岁，各年龄组间HPV感染率的差异有统计学意义（P＜0．05）。结论乌海地区妇女HPV感染亚型以HPV16、HPV52、HPV58、HPV53、CP8304为主。HPV感染率与年龄有关。

［关键词］人乳头状瘤病毒；基因分型；宫颈病变

作者单位：内蒙古自治区乌海市妇幼保健院检验科，内蒙古，乌海市016000

人乳头状瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一种嗜上皮性的双股环形无包膜DNA病毒，目前已经发现超过200多种，其中超过35种能够感染人类生殖系统［1］。HPV感染被证实是宫颈癌发生的必要原因［2］，其检测已成为筛查和预防宫颈癌的关键问题之一。HPV的感染具有很强的地域性，世界范围内不同国家或地区HPV的感染率及型别分布均存在差异［3］。本文对3 918例就诊者的宫颈脱落细胞进行核酸分子快速导流杂交分型检测，以了解乌海地区妇女宫颈HPV的感染情况及其常见亚型。

1　资料与方法

1．1资料

1．1．1病例来源

2008年10月至2015年5月于本院妇科就诊的女性患者3 918例，年龄16岁～80岁（37．75± 9．8）岁，98．95%（3877／3918）为汉族，居住于乌海市及周边。所有患者均为初次进行HPV检测，检测前未经宫颈或阴道治疗，剔除二次复查及术后或宫颈治疗后检测数据。

1．1．2仪器与试剂

人乳头状瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒（PCR＋膜杂交法）及医用核酸分子快速杂交仪均来源于潮州凯普生物化学有限公司，PCR仪为博日LITTLE GENIUS基因扩增仪。

1．2实验方法

振荡混匀样本管，取保存有宫颈细胞的细胞保存液0．5 mL，以14 000 rpm离心1 min，弃上清后，利用凯普的细胞裂解液严格按照说明书操作步骤提取DNA。

1．2．2PCR扩增HPV DNA

按照凯普说明书比例要求将PCR Mix、Taq酶和DNA模板混匀，低速离心数秒后，按下述反应条件进行PCR扩增：95℃9 min；95℃20 s，55℃30 s，72℃30 s，共40个循环；72℃5 min；最后4℃保存。

1．2．3导流杂交及结果判读

均按试剂盒要求进行，可检测出15种高危亚型（HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68）、6种低危亚型（HPV6、HPV11、HPV41、HPV42、HPV44、CP8304）。

1．3统计学方法

应用SPSS 17．0统计软件进行χ2检验，以α＝0．05为检验水准。

2　结果

2．1HPV感染各亚型分布情况

在大数据时代, 谁掌握了数据，谁就站到了大数据研究的战略制高点，因此，对数据资源的争夺是大数据研究的必然阶段。然而，拥有数据这一重要的战略资源是不够的,保证使用者拿到大数据资源，并能够对其进行有效的分析研究、挖掘使用，才能充分发挥其战略资源的作用。因此，数据资源的整合、开放、共享是实施好大数据发展战略中极为重要的一个环节。这些也同样面临着来自技术、基础设施、政策和法律、数据人才等各方面的挑战。

每批实验均加阴性及阳性对照，阴性对照结果的2个紫蓝色点为质控对照点，详见图1。阳性对照为HPV18型，结果见图2。在3 918例样本中，21种基因亚型均有检出，HPV16是感染率最高的亚型（12．81%，502／3918），其次为HPV52 （8．65%，339／3918）、HPV58（8．58%，336／3918）、HPV53（5．36%，210／3918）、CP8304（4．59%，180／3918）。具体结果见表1。

表1　HPV感染各亚型的排序分布情况Table 1　Sorting in the subtypes and the distribution of HPV infection

2．2HPV单一及多重感染情况

3918例样本中，HPV感染共1957例，感染率为49．95%（1957／3918）。755例检出2个或2个以上亚型，多重感染率为19．27%（755／3918），结果见表2。多重感染中2重感染（472例）较多，感染最多型别的是9重感染，共3例，实例一见图3。5种最常见的多重感染模式为HPV16和HPV52（61例），HPV16和HPV58（54例），HPV52和HPV53（43例），HPV16和CP8304（42例），HPV58和HPV52（42例）。

2．3HPV感染与年龄的关系

3918例受检者分为5个年龄组。经χ2检验，各年龄组HPV感染率比较，χ2＝38．131，自由度为4，P＝0．000；各年龄组高危型感染率比较，χ2＝11．784，自由度为4，P＝0．019；各年龄组高危型占阳性比率比较，χ2＝20．435，自由度为4，P＝0．000；各年龄组多重HPV感染率比较，χ2＝64．071，自由度为4，P＝0．000；差异均有统计学意义。30岁～39岁、40岁～49岁、≥50岁3组间多重HPV感染率比较，χ2＝3．442，自由度为2，P＝0．179，差异无统计学意义。具体结果见表3。

表2　3 918例标本中HPV DNA单一感染及多重感染情况Table 2　Samples of HPV DNA single infection status andmultipe infection status in 3 918 cases

表3　各年龄组HPV感染情况Table 3　HPV infection status among all age groups

3　讨论

2012年，子宫颈癌居全球女性最常见恶性肿瘤第4位，新发病例为528 000例［4］。目前已公认，宫颈高危型HPV持续感染99%以上是宫颈癌发生的必要条件［5－6］。国外研究［7］得出结论，基于HPV的筛查方法预防浸润性宫颈癌的效果相当于在细胞学检查方法的基础上提高60%～70%。因此HPV检测是宫颈癌筛查的有效方法之一，可以达到早发现，早治疗的目的。降低宫颈癌的发生率最好做到防治并举，预防首先要了解各地区的感染状况及型别分布特点。有文献报道，HPV16亚型是目前世界范围内共同的最常见的基因型，在宫颈癌中的阳性率可高达51．00%～81．25%［8］，HPV52和HPV58是亚洲特有的2个基因亚型，在中国、日本等亚洲国家有较高的检出，而在世界其他地区很少或者没有检出［2］。之前的研究表明，HPV16是中国大部分地区尤其是北方地区的主导亚型，HPV52和HPV58排在第2位或第3位［9－11］。有些南方地区，尤其是东南地区如湖北、上海、江苏、江西、湖南、海南以及广东一些地区人群中HPV感染以HPV52、HPV16 和HPV58型为主，HPV52排在第一位［12－14］。内蒙古中西部地区HPV感染排在前3位的是HPV16、HPV58和HPV52型［15］。本研究中乌海市HPV感染HPV16共检出502例，检出率为12．8%，排第一位，是本地区的主导亚型。HPV52检出率达8．65%，排第2位。目前HPV58检出率为8．58%，排第3位，与HPV52相差仅3例，HPV58型常超越HPV52型排在第2位。乌海市地处中国内蒙古西部，此结果符合HPV感染的地域特征。在本研究中HPV18检出率为3．32%，相对较低，排在第9位；众多研究［16－17］显示HPV18型感染率低，但致瘤性高，所以也不容忽视。由于乌海市的优势型别除了HPV16外，HPV52和HPV58型也具有显著优势，因此乌海地区的宫颈癌防治除了重视HPV16、HPV18型之外，还要重视HPV52及HPV58型的防治，乌海市地区妇女HPV感染的型别与宫颈病变的关系将在下一步研究。

HPV在我国妇女宫颈病变中平均感染率为46．51%（5 632／12 110），其中北方地区HPV平均感染率高于南方（55．67%和42．06%，P＜0．01）［18］。本研究对乌海地区女性进行HPV检测，阳性检出率为49．95%，较接近我国妇女宫颈病变平均感染率，高于内蒙鄂尔多斯杭锦旗（蒙古族人口占50%以上）的23．89%［19］。并且高于2011年对内蒙古中西部地区HPV感染的调查研究结果——HPV感染总阳性率23．3%（975／4 188）［15］。乌海市属于内蒙西部经济不发达地区，本地区妇女的卫生及自我保健意识相对较差。受经济条件限制，很大一部分人在细胞学检查结果异常时才愿意接受HPV的检测，这是本地区HPV检出率较同省其它地区高的原因之一。细胞学检查作为筛查手段已经使子宫颈癌的发病率大幅下降，而HPV亚型测定作为一个细胞学检查附属的筛查方法使宫颈病变的早期筛查更敏感更有效率［2］。加强本地区的健康教育，使人们对HPV感染与预防有一定的认识，是相对有效的措施。地区感染率的差异也可能与检测人群有关，今后随着筛查的普及，这种影响也会排除。

宫颈高危型HPV感染的相关因素包括初次性生活的年龄、性伴侣数、吸烟、长期口服避孕药、免疫缺陷与抑制等，年龄是影响宫颈高危型HPV感染最重要的因素之一［20］。本调查结果显示＜20岁、20岁～29岁、30岁～39岁、40岁～49岁、≥50岁5个年龄组HPV的感染率分别为79．31%、56．83%、48．83%、47．56%、43．34%，经χ2检验，P＜0．001；高危型HPV感染率分别为64．00%、47．72%、43．58%、43．39%、40．10%，经χ2检验，P＜0．05。说明HPV的感染率与年龄有关，本研究显示随着年龄的增长有下降的趋势，可能与性生活频率有关。各年龄组高危HPV占阳性比，经χ2检验，P＜0．001，显示随着年龄的增长HPV感染有增长的趋势，可能随着年龄的增长，免疫力下降，导致更易感染高危型HPV，这样得宫颈癌的风险就相对较高。很多研究结果显示＜20岁年龄组HPV阳性率较其它年龄组高，于莉和张刘东［21］认为可能是由于青春期其免疫系统还未被致敏，导致初次性生活时极易感染。张咏梅［22］认为年轻女性宫颈不成熟，感染HPV的机会多。本研究中＜20岁年龄组HPV感染率最高，但检测人数较少，只有29人。20岁以下有性生活史的女性占少数，来医院做常规检查的更少，临床症状严重时才来医院就诊，这也可能是其感染率高的一个原因。本研究HPV感染年龄主要集中在20岁～49岁年龄段，HPV感染数占总感染数的89．52%（1 752／1 957）。≥50岁年龄组感染率最低，但是高危型占阳性比最高，此年龄段的检查也是不容忽视的。

除了年龄外多重感染也是与子宫颈癌和HPV感染相关的危险因素［2］。多重感染在我们的研究中占所有HPV感染的19．27%（755／3 918），高于以前对内蒙古自治区调查的多重感染率6．2%［15］，低于中国整体的多重感染率28．98%［23］。本研究中多重感染率29岁以下2个年龄段较其它年龄段高（P＜0．05），感染最多型别的是9重感染，共3例，为多性伴或伴侣多性伴者，其中一例58岁，另外2例和7重感染1例、8重感染2例均在20岁～29年龄段。多重感染型别多者可能与性伴的数量及性生活的频率有关。很多关于多重感染与宫颈癌的关系的研究结果不一致，我们将继续积累这一方面的数据，进行进一步的研究。

参考文献

[1]Siddiqa A, Zainab M, Qadri I, et al. Prevalence and genotyping of high risk human papillomavirus in cervical cancer samples from punjab, pakistan [J]. Viruses, 2014, 6(7):2762-2767.

[2]赵颖,林敏,潘美晨,等. HPV分型及高危八型定量检测在宫颈病变中的意义[J].分子诊断与治疗杂志, 2013, 5(2):102-106.

[3]Berman NR. Cervical cancer screening today. The role of HPV DNA testing[J]. Advance For Nurse Practitioners, 2006, 14(4):24-29.

[4]Bray F, Ren JS, Masuyer E, et al. Global estimates of cancer prevalence for 27 sites in the adult population in 2008[J]. Int J Cancer, 2013, 132(5):1133-1145.

[5]Yildirim JG, Arabaci Z. Innovations in HPV vaccination and roles of nurses in cervical cancer prevention [J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2014, 15(23):10053-10056.

[6]Demir F, Kimiloglu E, Igdem AA, et a1. High risk HPV in situ hybridization, p16 INK 4A, and survivin expressions in cervical carcinomas and intraepithelial neoplasms evaluation of prognostic factors [J]. Eur J Gynaecol Oncol, 2014, 35(6):708-717.

[7]Ronco G, Dillner J, Elfstr觟m KM, et al. Efficacy of HPV-based screening for prevention of invasive cervical cancer: follow-up of four European randomised controlled trials[J]. The Lancet, 2014, 383(9916):524-532.

[8]Canales NA, Marina VM, Castro JS, et al. A1BG and C3 are overexpressed in patients with cervical intraepithelial neoplasiaⅢ[J]. Oncol Lett, 2014, 8(2):939-947.

[9]杨琳,李霓,郭兰伟,等. 2010年黑龙江省大庆市妇女人乳头状瘤病毒感染状况及其危险因素调查[J].中华预防医学杂志, 2013, 47(2):118-123.

[10]秦宇,杨立娟,刘欧.导流杂交基因芯片技术检测人乳头瘤病毒结果分析[J].疑难病杂志, 2013, 12(11)865-867.

[11]侯萌,李娜,朱广霞,等.妇科门诊患者宫颈人乳头瘤病毒感染情况调查[J].西安交通大学学报(医学版), 2013, 34(2)229-232,262.

[12]管建花,张蓉,侯文静,等.上海奉贤地区部分妇女宫颈HPV阳性感染特征分析[J].山东医药, 2012, 52(37): 39-41.

[13]蔡静芬,杨幼易.无锡市113207名妇女感染人乳头瘤病毒感染状况分析[J].中国医药导报, 2014, 11(7):104-107.

[14]李发涛,廖灿,李焱,等.人乳头状瘤病毒感染妇女的年龄及其亚型分析[J].中华医院感染学杂志, 2014, 24 (17):4345-4347.

[15]宿瑞俊,杜瑞军.内蒙古自治区中西部地区妇女宫颈人乳头瘤病毒感染现状调查分析[J].分子诊断与治疗杂志, 2011, 3(3):173-176.

[16]Park JS, Kim YT, Lee A, et al. Prevalence and type distribution of human papillomavirus in cervicall adenocarcinoma in Korean womenn [J]. Gynecol Oncol, 2013, 130(1):115-120.

[17]Cuschieri K, Brewster DH, Graham C, et al. Influence of HPV type on prognosis in patients diagnosed with invasive cervical cancer[J]. Int J Cancer, 2014, 135(11): 2721-2726.

[18]张东红,林美珊.人乳头瘤病毒在国人宫颈病变中感染及型别分布特征的Meta分析[J].中国全科医学, 2010, 13(12):1287-1290.

[19]段仙芝,张瑞请,田晶,等.应用HPV和液基细胞筛查内蒙古杭锦旗宫颈病变的研究[J].中国民族医药杂志, 2012, 18(12):65-68.

[20]Martinez SB, Palomares JC, Artura A, et al. Comparison of the amplacor human papillomarirus and the linear arraytests for detection of HPV types 16 and 18 in cervical samples[J]. J Virol Methods, 2012, 180(1-2):7-10.

[21]于莉,张刘东.儋州地区女性感染人乳头瘤病毒基因亚型分析[J].海南医学, 2013, 24(15):2271-2273.

[22]张咏梅. 7455例人乳头瘤病毒检测临床分析[D].河北省石家庄市:河北医科大学, 2013.

[23]Li N, Yang L, Zhang K, et al. Multiple human papillomavirus infections among Chinese women with and without cervical abnormalities:a population-based multicenter cross-sectional study[J]. Front Oncol, 2011, 1:38.

•论著•

Analysis of HPV genotypes in 3 918 female patients in Wuhai city

WU Yanghong, LV Wei, ZHENG Haiyan, WANG Zhen, PEI Liucheng★
(Department of Laboratory Medicine, Wuhai Maternity and Child Health Care Hospital, Wuhai, Inner Mongolia, China, 016000)

[ABSTRACT]Objective To study the epidemiology of human papilloma virus (HPV) infection and the distribution of its different subtypes among women in wuhai, Inner Mongolia. Methods 3 918 cases of female patients who visited our gynecologic clinic between October, 2008 and May, 2015 were retrospectively analyzed. PCR and flow-through hybridization were used to test for the 21 genotypes of HPV in the cervical exfoliated cells from the patients. Results Of 3 918 cases, 1 957 were positive for HPV, with the infection rate of 49.95%. All the 21 genotypes were detected, with higher detection rates seen in certain genotypes than others, such as, HPV16 (12.81%), HPV52 (8.65%), HPV58 (8.58%), HPV53 (5.36%) and CP8304 (4.59%). The highest risk for the infection fell in the age group between 21 and 49 years, and the differences in the infection rates among all age groups were statistically significant (P<0.05). ConclusionHPV16, HPV52, HPV58, HPV53, and CP8304 were the main genotypes of HPV infecting women in Wuhai area. The infection rate correlates with age.

[KEY WORDS]Human papilloma virus; Gene subtypes; Cervical pathological changes

通讯作者：★裴刘成，E-mail：39947629＠qq．com