高效液相色谱法测定咳特灵片中牡荆素含量

韦建乔

（广西壮族自治区河池食品药品检验所，广西 河池 574000）

高效液相色谱法测定咳特灵片中牡荆素含量

韦建乔

（广西壮族自治区河池食品药品检验所，广西 河池 574000）

目的建立测定咳特灵片中牡荆素含量的高效液相色谱法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent SB－C18柱(250 mm× 4．6 mm，5 m)，流动相为乙腈－0．2%醋酸水溶液（14∶86），流速为1．0 mL／min，检测波长为340 nm，柱温为30℃。结果牡荆素质量浓度在0．071 3～0．428 g／L范围内与峰面积呈良好线性关系（r＝0．999 7），平均回收率为97．84%，RSD＝1．01%(n＝5)。结论所建立的方法简便、准确、重复性好，可用于咳特灵片的含量测定。

含量测定；牡荆素；高效液相色谱法；咳特灵片

小叶榕，也称雅榕 Ficus concinna(Miq．)Miq．，榕属植物，根、叶、果实可入药，具有清热、解表、化湿功效，用于流行性感冒、疟疾、支气管炎、急性肠炎、细菌性痢疾、百日咳以及瘀血阻脉所致的胸痹，症见胸闷憋气、心前区刺痛[1]。其化学成分主要含黄酮类化合物牡荆素，牡荆素主要药理作用为抗炎、抑菌、解痉、抗癌[2]。咳特灵片主要由小叶榕干浸膏制成，具有镇咳、祛痰、平喘、消炎功效，主治咳喘及慢性支气管炎[3]。目前，尚未见测定咳特灵片中牡荆素含量的报道[4－10]。为此，笔者建立了采用高效液相色谱法对方中牡荆素进行含量测定的方法，现报道如下。

1 仪器与试药

安捷伦1260型高效液相色谱仪；AUW220D型电子分析天平；KQ－400KDB型高功率数控超声波清洗器。牡荆素对照品（供含量测定用，批号为111687－200602，中国食品药品检定研究院）；咳特灵片（批号150101，150102，150103，广西润达制药有限公司）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent SB－C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流动相：乙腈 －0．2%醋酸水溶液（14∶86）；流速：1．0 mL／min；检测波长：340 nm；温度：30℃，进样量：20 μL。在拟订色谱条件下，牡荆素峰的保留时间约为22 min，理论板数为16 833，与相邻峰的分离度为大于1．5，拖尾因子为1．05。供试品溶液与对照品溶液在同一保留时间有相同的波峰出现，而阴性对照品溶液则无相应的峰，阴性对照品无干扰，色谱图见图1。

2．2 溶液制备

精密称取牡荆素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含23．78 μg的溶液，即得对照品溶液。取样品10片，研细，取约 0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加60%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声波振荡15 min，放冷，再称定质量，用60%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。制备不含小叶榕的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2．3 方法学考察

线性关系考察：取牡荆素对照品适量，分别配制成质量浓度为0．071 3，0．142 7，0．214 0，0．285 4，0．356 7，0．428 0 g／L标准液，按拟订色谱条件注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积(Y)为纵坐标、质量浓度(X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y＝2 385 329．736 5X－13639．413 0，r＝0．9997(n＝6)。结果表明，牡荆素质量浓度在0．071 3～0．428 g／L范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：取同一牡荆素对照品溶液，连续进样6次，测定牡荆素的峰面积。结果的 RSD为 1．46% (n＝5)，表明仪器精密度良好，详见表1。

稳定性试验：取同一供试品（批号为150101）溶液，分别于制备后0，2，4，6，8，12，24 h时测定牡荆素峰面积。结果的 RSD为1．34%（n＝7)，表明供试品溶液在24 h内稳定，详见表2。

表1 精密度试验结果

表2 稳定性试验结果

重复性试验：对同一批（批号为150101）样品5份，按供试品溶液制备方法制备溶液，按拟订色谱条件平行测定，按外标法计算含量。结果平均含量为0．156 mg／g，RSD为2．17%(n＝5)，表明方法的重复性较好，详见表3。

表3 重复性试验结果

加样回收试验：取已知含量的供试品约0．25 g（批号为150101），共5份，分别精密加入牡荆素对照品溶液（质量浓度0．05 g／L）1 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液，分别进样测定，按外标法计算出含量，计算回收率。结果见表4。

表4 牡荆素加样回收试验结果(n＝5)

2．4 样品含量测定

取3批样品（批号分别为150101，150102，150103）依法测定，计算含量，结果见表5。

表5 样品含量测定结果（n＝3)

3 讨论

3．1 提取溶剂试验

对不同溶剂提取样品进行考察，取供试品共6份，每份0．5 g，置具塞锥形瓶中，分别加入乙醇、甲醇、30%乙醇、30%甲醇、60%乙醇、60%甲醇，各25 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定。结果60%甲醇溶液提取时得到的含量高，故选择60%甲醇溶液为提取溶剂。

3．2 提取时间试验

对提取时间进行考察，取供试品共4份，每份0．5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，称定质量，分别超声15 min，30 min，1 h，2 h，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定。结果超声15 min，30 min，1 h，2 h的提取率相当，表明超声15 min基本可以将样品中的牡荆素提取完全，故选择超声时间为15 min。

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草[M]．上海：上海科学技术出版社，1999：1 034－1 036．

[2]孙文基．天然活性成分简明手册[M]．北京：中国医药科技出版社，1998：597．

[3]WS3－B－2743－97．中药成方制剂(第十四册)[S]．

[4]张 锋．大鼠血浆中牡荆素鼠李糖苷的质量浓度测定[J]．中国药业，2010，19(12)：33－34．

[5]王兆龙，杨 蕾，孙 爽．咳特灵胶囊质量标准研究[J]．中国药业，2007，16（13）：16－17．

[6]钟 英，杨尚军，王 菊，等．高效液相色谱法测定山楂叶总黄酮中牡荆素含量[J]．时珍国医国药，2000，10（11）：26－28．

[7]罗娅君，边清泉，陈 佳，等．高效液相色谱法测定牡荆中牡荆素含量[J]．广西植物，2011，31（3）：418－421．

[8]杨冬梅，杨世友．高效液相色谱法测定复方葛酮颗粒中葛根素含量[J]．中国药业，2010，19(5)：19－20．

[9]曹 健，王 芳，陈 琳，等．高效液相色谱法测定眩痛定胶囊中延胡索乙素含量[J]．中国药业，2010，19（3）：26－27．

[10]马春婷，李红艳，邓智怀．高效液相色谱法测定咳特灵片中马来酸氯苯那敏含量[J]．中国药业，2008，17(15)：39－40．

Content Determination of Apigenin8－C－glucoside in Keteling Tablets by RP－HPLC

Wei Jianqiao
(Guangxi Hechi Food and Drug Control,Hechi,Guangxi,China 574000)

Objective To establish an HPLC method for determination the content of Apigenin8－C－glucoside in Keteling tablets．M ethods HPLC method was used．The column type was Agilent SB－C18(250 mm×4．6 mm,5 μm)．The mobile phase was acetonitrile－0．2%acetic acid(14∶86)．The flow rate was 1．0 mL／min．The detective wavelength was 340 nm and column temperature was 30℃．Results The linear range of quercetin was 0．713－0．428 g／L(r＝0．999 7),the average recovery was 97．84% and the RSD＝1．01%(n＝5)．Conclusion The method is simple and accurate,and can be used reliably for the quality control of Apigenin8－C－glucoside．

content determination;apigenin8－C－glucoside;HPLC;Keteling Tablets

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)05－0057－03

2015－07－13)