慢性荨麻疹患者血浆D二聚体、活化凝血因子Ⅶ及活化凝血因子Ⅻ水平的研究

王朵勤 唐慧 沈燕芸 徐金华

慢性荨麻疹患者血浆D二聚体、活化凝血因子Ⅶ及活化凝血因子Ⅻ水平的研究

王朵勤 唐慧 沈燕芸 徐金华

目的 探讨血浆D二聚体、活化凝血因子Ⅶ（FⅦa）及活化凝血因子Ⅻ（FⅫa）在慢性荨麻疹（CU）患者中的表达及其与CU发病的关系。方法 对50例CU患者及50例健康对照用干式免疫散射色谱法检测血浆D二聚体水平，用酶联免疫吸附法检测FⅦa及FⅫa的水平，并结合患者病情严重程度情况进行分析。对43例CU患者自体血浆皮肤试验（APST）及41例CU患者作自体血清皮肤试验（ASST）结果与其血浆D二聚体水平进行比较。结果 CU患者血浆中D二聚体及FⅦa的水平均明显高于健康对照组（P<0.05），前者升高水平与病情严重程度呈正相关（P<0.05）；CU患者FⅫa水平与健康对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。APST（+）患者的 D 二聚体水平明显高于 APST（-）患者（P<0.05），而 ASST（+）患者 D 二聚体水平与ASST（-）患者比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 凝血机制与CU相关，外源性凝血途径起着作用，针对凝血机制的研究对于CU的病情评估和临床治疗具有一定的意义。

荨麻疹；因子Ⅶa；因子Ⅻa

对象与方法

一、对象

2013年6-12月，复旦大学附属华山医院皮肤科门诊50例CU患者，男19例，女31例，年龄18～75岁，平均（37.67±13.37）岁。病程2个月至10年，另选择50例体检健康者为对照组，其中男18例、女 32例,年龄 22～74岁,平均（37.94 ± 13.17）岁，均P>0.05，两组对象的性别和年龄差异无统计学意义，具可比性。CU患者的入组标准如下：①符合CU的诊断［1］；②排除了食物、药物等明确过敏原；③排除寒冷性荨麻疹，日光性荨麻疹、人工荨麻疹、胆碱能性荨麻疹、接触性荨麻疹、水源性荨麻疹、荨麻疹性血管炎患者；④入组前3 d未使用抗组胺药，治疗前1个月内未用过长效糖皮质激素及免疫抑制剂；⑤非妊娠或哺乳，年龄18～75岁。排除标准：严重心、肝、肾等器官疾病，恶性肿瘤，骨髓造血功能不良及系统性疾病。入选后行症状评分，并于皮损发作期采血。本研究获得复旦大学附属华山医院伦理委员会批准，受试者均签署知情同意书。

二、主要仪器及试剂

D二聚体试剂盒购于挪威Axis-Sheild PoC AS公司，FⅦa及FⅫa测定ELISA试剂盒购于美国RB公司，酶标仪型号为BioTek ELx808。

三、方法

1.标本收集和处理：常规方法抽取静脉外周血3.6 ml，放入消毒玻璃试管中（枸橼酸钠抗凝），600×g离心10 min，无菌分离血浆。取0.05 ml血浆或血清行APST/ASST，其余血浆或血清-20℃保存，待批量检测。

2.检测方法：D 二聚体、FⅦa、FⅫa：50 例 CU患者及50例健康对照行D二聚体、FⅦa及FⅫa的检测。D二聚体检测采用干式免疫散射色谱法，FⅦa及FⅫa的检测应用酶联免疫吸附试验，按照试剂盒说明书进行操作。APST及ASST：50例CU患者中43例行APST，41例行ASST。取自体血浆或血清0.05 ml在前臂屈侧作皮内注射，同时以等量生理氯化钠溶液皮内注射作为阴性对照，盐酸组胺作为阳性对照，注射处相距至少5 cm。结果判定：20～30 min后由专人观察结果，若注射处出现红斑、风团反应且风团直径比对照大3 mm以上即为阳性。

3.症状评分标准：根据EAACI/GA（2）LEN/EDF/WAO 荨麻疹指南［1］病情严重程度标准进行评分：①风团数目：0分为无风团；1分为风团数<20个/24 h；2分为风团数20～50个/24 h；3分为风团数 >50个/24 h或大片融合的风团；②瘙痒程度：0分为无瘙痒；1分为轻度瘙痒，有瘙痒但不引起患者烦恼；2分为中度瘙痒，引起患者烦恼但尚未影响患者日常活动或睡眠；3分为重度瘙痒，影响患者日常活动或睡眠。连续评估1周，计算总分并计算每天平均分值。为方便比较，将0～2分/d定为轻度，3～4分/d定为重度，5～6分/d定为重度。

4.统计学方法：使用SPSS16.0软件，两组间数据比较采用Mann-Whitney检测，多组间数据比较采用Kruskal-Wallis检测方法，P<0.05表示差异有统计学意义。

结 果

一、血浆D二聚体水平与病情严重程度关系

50例CU患者中，轻度18例（36%），中度21例（42%），重度11例（22%）。图1所示，随着血浆中D二聚体水平逐渐增高，CU患者病情评分也逐渐增高，差异有统计学意义（χ2=18.493，P<0.05），检测结果表明随着CU患者血浆D二聚体水平增加，荨麻疹病情加重。

二、CU患者血浆D二聚体、FⅦa因子和FⅫa因子检测结果的比较

检测结果如表1所示，50例CU患者D二聚体及FⅦa的平均水平均明显高于健康对照（U=772.5、849.0，均P<0.05），而50例CU患者FⅫa因子水平较健康对照比较，差异无统计学意义（U=1 038.5，P>0.05）。

图1 血浆D二聚体水平与病情严重程度关系

表1 慢性荨麻疹患者及健康对照D二聚体、FⅦa、FⅫa的检测

表2 自体血浆皮肤试验（+）与自体血浆皮肤试验（-）患者D二聚体水平比较及自体血清皮肤试验（+）与自体血清皮肤试验（-）患者D二聚体水平比较

三、APST（+）患者与 APST（-）患者 D 二聚体水平比较及ASST（+）患者与ASST（-）患者D二聚体水平比较

43例CU患者中25例自体APST阳性，阳性率为58.14%，41例CU患者中14例ASST阳性，阳性率为34.15%。如表2所示，APST（+）患者血浆中D二聚体水平明显高于 APST（-）患者（U=106，P<0.05）ASST（+）患者血浆中D二聚体水平与阴性组ASST（-）患者比较，差异无统计学意义（U=184，P>0.05）。

讨 论

CU病因尚不明确，其核心发病机制是肥大细胞活化脱颗粒从而引起平滑肌收缩、黏液分泌增加和血管通透性增加。2009年我们的课题组对30例CU的患者及30例健康对照进行了FⅦa、凝血酶-抗凝血酶复合物及D二聚体的检测［4］，结果显示，CU患者的FⅦa、TAT及D二聚体水平较健康对照明显增高（P<0.001）证明了凝血机制的激活与CU的相关性。本研究扩大样本量并进行FⅦa、APST和ASST的检测，结果显示，50例CU患者血浆中D二聚体、FⅦa较健康对照组有明显升高，FⅫa水平与健康对照组相比，差异却无统计学意义。D二聚体是交联后纤维蛋白被纤溶酶降解的特异标志物之一，FⅦa、FⅫa分别是外源性凝血机制及内源性凝血机制的标志，证明凝血机制激活与慢性荨麻疹相关，外源性凝血途径主要参与了CU凝血机制的激活［5-6］。而在CU与D二聚体病情严重程度的相关性中我们发现，中度及重度CU患者的D二聚体的水平明显高于轻度CU患者，由此可见，凝血因子的水平与CU患者病情严重程度密切相关，血浆D二聚体水平的测定对于CU患者病情的评估具有一定价值。另外，CU患者APST的阳性率明显高于ASST，与相关文献一致［7-8］，血浆及血清中都含有自身免疫性抗体，除此之外，血浆中还含有参与凝血途径的蛋白及凝血因子，而血清中却没有［9］，由此我们推测，APST的高阳性率与凝血因子相关联。我们进一步将 APST（+）及 APST（-）患者的D二聚体水平进行比较发现，APST（+）患者的 D 二聚体水平明显高于APST（-）患者，而 ASST（+）患者 D 二聚体水平与ASST（-）患者D二聚体水平比较，差异无统计学意义，由此可见，APST的阳性率明显高于ASST，可能与前者存在凝血因子有关。

凝血机制与CU密切相关，但凝血机制与肥大细胞活化之间的关系尚待进一步研究。研究表明［10］，凝血酶可通过诱导蛋白酶激活受体1激活，导致肥大细胞黏附于纤维连接蛋白，进一步诱发凝血机制和炎症反应。蛋白酶激活受体是G蛋白偶联受体，包括4个成员-蛋白酶激活受体1～4［11］。另有学者［12］发现，蛋白酶激活受体2表达于人皮肤肥大细胞表面，蛋白酶激活受体2激动剂可作用于相应受体引起Ca2+内流，刺激人皮肤肥大细胞组胺释放，从而诱发荨麻疹等变态反应性疾病，而FⅦa是蛋白酶激活受体2激动剂，因此我们推测凝血过程中，产生的凝血酶和FⅦa可分别作用于人皮肤肥大细胞表面蛋白酶激活受体1和2，分别引起肥大细胞粘附于纤维连接蛋白及Ca2+内流，继而诱导肥大细胞脱颗粒释放组胺，引起或加重CU的发生。

综上所述，凝血机制与CU密切相关，外源性凝血途径起着重要的作用。血浆D二聚体水平的测定对于CU患者病情的评估具有一定价值。CU患者中APST阳性率明显高于ASST，可能与凝血因子有一定关系。凝血因子可能是通过蛋白酶激活受体引起肥大细胞脱颗粒从而诱发CU的发生，针对凝血途径、肥大细胞、蛋白酶激活受体的研究将为临床上治疗CU提供新的思路。

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Levels of plasma D-dimer,activated coagulation factorⅦandⅫin patients with chronic urticaria

Wang Duoqin*,Tang Hui,Shen Yanyun,Xu Jinhua.*Department of Dermatology,Huashan Hospital,Fudan University,Shanghai 200040,China

Xu Jinhua,Email:xjhhuashan@yahoo.com

Objective To measure the levels of plasma D-dimer,activated coagulation factorⅦ（FⅦa）and activated clotting factorⅫ（FⅫa）in patients with chronic urticaria（CU）,and to investigate their relationship with the occurrence of CU.Methods Venous blood samples were collected from 50 patients with CU and 50 healthy human controls.Dry-column immune scattering chromatography was performed to detect the plasma level of D-dimer,and enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）to measure the levels of FⅦa and FⅫa.In addition,autologous plasma skin test（APST）was conducted in 43 patients with CU,and autologous serum skin test（ASST）in 41 patients with CU.A correlation analysis was carried out between the above three parameters and disease severity as well as between the results of APST and ASST and plasma level of D-dimer.Results The levels of plasma D-dimer and FⅦa were significantly higher in patients with CU than in healthy human controls （bothP<0.05）,while no significant difference was found in FⅫa level between the two groups （P>0.05）.Moreover,the degree of increase in D-dimer plasma level was positively correlated with disease severity in the patients with CU.The plasma level of D-dimer was significantly higher in APST-positive patients than in APST-negative patients （P<0.05）,but not significantly different between ASST-positive and-negative patients （P>0.05）.Conclusions Coagulation mechanism,especially the extrinsic coagulation pathway,is related to the occurrence of CU.Studies on coagulation mechanism are beneficial to the evaluation of severity,and clinical treatment,of CU.

Urticaria;FactorⅦa;FactorⅫa

慢性荨麻疹（CU）是指每天或几乎每天都出现一过性的风团，病程 >6周［1］，其发病机制尚不明确。研究表明［2］，35%～40%的CU患者血清中可检测出抗 IgE高亲和力受体ε链（抗 FcεRI），5%～10%的患者可检出抗IgE自身抗体。自身血浆/血清皮肤试验（APST/ASST）是临床筛查CU的常用方法。Asero等［3］将慢性荨麻疹患者对APST和ASST的反应相对比，用柠檬酸钠抗凝血的APST阳性率高于ASST（86%与53%），提示凝血过程可能参与了CU皮损的发展。因此，凝血功能的异常与慢性荨麻疹发病的关系成为近几年研究热点。本研究通过检测CU患者及健康对照血浆中的D二聚体、活化凝血因子Ⅶ（FⅦa）、活化凝血因子Ⅻ（FⅫa）的水平，并结合患者病情严重程度情况进行分析。对部分患者行APST及ASST并进行比较，以探讨CU与凝血机制的关系。

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.01.012

200040上海，复旦大学附属华山医院（王朵勤、唐慧、沈燕芸、徐金华）；上海市静安区中心医院（徐金华）

徐金华，Email：xjhhuashan@yahoo.com

2014-04-09）

（本文编辑：吴晓初）