顶空气相色谱法测定硝酸布康唑中有机溶剂残留量*

刘薇芝，胡汉昆，刘萍，刘巍，张觅，郑保根，2，刘安妮，颜锵，周丽娟，刘一鸣

(1.武汉大学中南医院药学部，武汉 430071；2.武汉大学第二临床学院，武汉 430071；3.武汉大学经济学院，武汉 430071；4.武汉药谷生物工程有限公司，武汉 430000；5.Jackson State University，Jackson 39209)

顶空气相色谱法测定硝酸布康唑中有机溶剂残留量*

刘薇芝1，胡汉昆1，刘萍1，刘巍1，张觅1，郑保根1，2，刘安妮3，颜锵4，周丽娟4，刘一鸣5

(1.武汉大学中南医院药学部，武汉 430071；2.武汉大学第二临床学院，武汉 430071；3.武汉大学经济学院，武汉 430071；4.武汉药谷生物工程有限公司，武汉 430000；5.Jackson State University，Jackson 39209)

目的 建立测定硝酸布康唑原料药中乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺3种有机溶剂残留量的分析方法。方法 采用毛细管气相色谱法，程序升温，检测器：FID；检测器温度：250 ℃；进样器温度：200 ℃；载气：氮气；顶空进样。结果 在上述色谱条件下，乙酸乙酯，三氯甲烷，N，N-二甲基甲酰胺分别在0.066～0.588，0.062～0.556，0.896～8.061 μg·mL-1质量浓度范围内呈良好线性关系。平均回收率分别为99.18%，102.84%，98.71%，RSD分别为3.87%，4.33%，3.71%。结论 该检测方法灵敏、准确、可靠，可用于硝酸布康唑原料药的质量控制。

布康唑，硝酸；色谱法，气相；有机溶剂残留

硝酸布康唑(butoconazole nitrate)是新一代咪唑类抗真菌药，可用于治疗阴道念珠菌感染等妇科炎症。化学名：1-{2-(2，4-二氯苯基)-2-[4-(苯硫)苯基]-甲氧}乙基-1H-咪唑硝酸盐[1]。与现有咪唑类抗真菌药物相比，疗效更佳(对白念珠菌的作用优于已上市的同类药)；用量更小(现有咪康唑类药物的单次给药量为400 mg，是本品用量的4倍)。硝酸布康唑已在美国、欧盟等国家注册上市，国内多家企业正在申报。本课题组与武汉药谷生物工程有限公司开发了3.1类新药硝酸布康唑，现已取得了国家食品药品监督管理总局授予的原料药审批件。由于在该药的合成生产过程中引入了乙酸乙酯、三氯甲烷与N，N-二甲基甲酰胺有机溶剂，根据国际人用药品注册技术要求协调大会规定[2]，乙酸乙酯是第3类溶剂，三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺属第二类溶剂。上述溶剂可对人体产生危害，因此需控制产品中这些溶剂的残留量在规定范围内。乙酸乙酯、三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺控制限度分别为0.5%，0.006%和0.088%。为控制硝酸布康唑原料药质量，本研究采用顶空气相色谱法对硝酸布康唑原料药中乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺有机溶剂残留进行了检查。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津GC-2014C型气相色谱仪(FID检测器)，PEG-20M色谱柱(兰州化物所色谱中心)。

1.2 试药 硝酸布康唑原料药(含量：99.5%，武汉药谷生物工程有限公司，批号：20130705，20130718，20130728，20130812，20130821，20130828)，乙酸乙酯(天津市致远化学试剂有限公司，批号：20130416)、三氯甲烷(天津市东丽区铭诚化学试剂厂，批号：20130521)，N，N-二甲基甲酰胺(天津市凯通化学试剂有限公司，批号：20130325)均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性实验 岛津GC-2014C型气相色谱仪(FID检测器)，固定液为聚乙二醇(PEG-20M)的毛细管气相色谱柱(PEG-20M柱，30 m×0.25 mm，涂布厚度0.25 μm)；载气为氮气(N2)；柱前压为80 kPa；柱温起始温度为80 ℃，维持5 min，以10 ℃·min-1的速率升温至180 ℃，维持5 min；进样口温度为200 ℃；检测器温度为250 ℃。顶空进样瓶平衡温度130 ℃，平衡时间20 min，顶空进样体积1.0 mL，理论板数以乙酸乙酯峰计不低于1 000。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的配制 分别精密称取乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺各0.25，0.30，4.4 g精密称定,同置于1 000 mL量瓶中，加二甲亚砜稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，加盖，密封，即得。

2.2.2 供试品溶液的配制 取本品1.0 g，精密称定，置20 mL顶空瓶中，精密加入二甲亚砜5 mL，充分摇匀，加盖，密封，即得。

2.3 专属性实验 分别取对照品溶液、供试品溶液、二甲亚砜空白溶剂在130 ℃平衡20 min，分别抽取顶空气体1.0 mL注入气相色谱仪，记录色谱图，如图1。结果表明，乙酸乙酯保留时间3.505 min、三氯甲烷保留时间4.325 min、N，N-二甲基甲酰胺保留时间9.710 min，三者之间分离度均大于2.0。溶剂二甲亚砜出峰在10 min以后，不干扰测定，3种溶剂完全分离，可同时对它们进行测定。

2.4 线性关系考察 分别精密称取乙酸乙酯0.326 6 g，三氯甲烷0.308 8 g和N，N-二甲甲酰胺4.478 1 g同置100 mL量瓶中，加二甲亚砜稀释至刻度，摇匀，精密吸取溶液1，3，5，7，9 mL分别至50 mL量瓶中，加二甲亚砜稀释至刻度，摇匀，即得标准溶液。精密量取标准溶液各5 mL分别置顶空进样瓶中，加盖，密封，在130 ℃平衡20 min，抽取上部气体1 mL注入气相色谱仪，记录色谱图及峰面积，其线性关系见表1。结果表明，在上述色谱条件下，乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺在各自浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系。

2.5 精密度实验 精密量取5份乙酸乙酯、三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的浓度分别为 0.25，0.30与4.40 mg·mL-1的标准溶液5 mL，分置5个顶空进样瓶中，加盖，密封，在130 ℃平衡20 min，各抽取顶空气体1 mL连续注入气相色谱仪，记录色谱图及峰面积。结果表明乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺RSD分别为3.34%，4.88%，5.83%，精密度实验结果符合《中华人民共和国药典》2010年版二部附录ⅧP外标测定法的要求(RSD≤10%)。

A.空白溶媒溶液；B.对照品溶液；C.供试品溶液；1.乙酸乙酯；2.三氯甲烷；3.N，N-二甲基甲酰胺；4.二甲亚砜

A.blank solution；B.control solution；C.test solution；1.ethyl acetate；2.chloroform；3.N，N-dimethylformamide；4.dimethy sulfoxide

Fig.1 Gas chromatogram of three kinds of solution

表1 3种有机溶剂线性关系实验结果

Tab.1 Results of linear relationship test on three kinds of organic solvent

n=5

2.6 加样回收率实验 分别精密称取1.0 g样品9份，置9个顶空进样瓶中，分别精密加入高、中、低浓度对照品溶液5 mL，加盖，密封，振摇使样品溶解，在130 ℃平衡20 min，按样品测定方法计算回收率，结果乙酸乙酯、三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺回收率均在95%～106%之间。见表2。

表2 3种有机溶剂加样回收率实验结果

2.7 检测限 分别单独配制3种溶剂的二甲亚砜溶液，适当稀释直到溶剂的色谱峰高是基线噪音的3倍，作为最低检测限。乙酸乙酯、三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的检测限分别是0.65，0.62和8.96 μg·mL-1。

2.8 样品中溶剂残留量的测定 取样品6批，按“2.2”项下分别配制成供试品溶液，在30 ℃平衡20 min，分别抽取顶空气体1.0 mL注入气相色谱仪，“2.1”项下相应的色谱条件下测定。按外标法计算，结果表明，本品中未检出乙酸乙酯、三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺，说明样品中乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺基本无残留。见表3。

3 讨论

3.1 溶剂的选择 为保证其中的残留有机物完全释放，必须选择适合的溶剂完全溶解待测样品。隋雪峰等[3]报道了采用气相色谱法测定硝酸布康唑中乙酸乙酯等有机溶剂残留量的方法，所选用的溶剂为N，N-二甲基甲酰胺。虽然可有效溶解样品，但是N，N-二甲基甲酰胺是布康唑合成过程中主要反应溶剂，也存在残留问题。因此，如选用N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，则无法检测N，N-二甲基甲酰胺的残留。为更好检测有机溶剂残留，课题组经过实验发现，原料药及有机溶剂在二甲亚砜中溶解性好，且二甲亚砜沸点较高，其溶剂色谱蜂不干扰残留溶剂测定，故选择二甲亚砜为溶剂。

表3 样品测定结果

Tab.3 Results of sample analysis %，n=5

“-”未检出

“-” not check out

3.2 色谱柱的选择 课题组曾选用不同毛细色谱柱DM-624、OV-1301柱、PEG-20M色谱柱进行分离。研究发现，聚乙二醇PEG-20M分离效果较好。考虑到顶空进样中产生的水蒸气易造成聚乙二醇色谱柱涂膜性质的改变，因此采用程序升温法进行检测，以达到色谱柱在线老化，保证较好的分离效果。

本研究建立了顶空气相色谱法测定硝酸布康唑中有机溶剂残留量的方法，该方法精密度好，回收率高，可用于硝酸布康唑原料药的质量控制。

[1] 胡汉昆，颜锵，刘萍.抗真菌新药——硝酸布康唑[J].医药导报，2010，29(7)：893-895.

[2] 周海钧.药品注册的国际技术要求：质量部分(ICH指导委员会)[M].北京：人民卫生出版社，2000：88.

[3] 隋雪峰，滕学厚，曹悦兴.气相色谱法测定硝酸布康唑有机溶剂残留[J].齐鲁药事，2009，28(2)：81-83.

DOI 10.3870/yydb.2015.08.022

Determination of Organic Solvents Residue in Butoconazole Nitrate by Headspace Gas Chromatography

LIU Weizhi1, HU Hankun1, LIU Ping1, LIU Wei1,ZHANG Mi1, ZHENG Baogen1,2, LIU Anni3，YAN Qiang4, ZHOU Lijuan4，LIU Yiming5

(1.DepartmentofPharmacy,ZhongnanHospitalWuhanUniversity,Wuhan430071，China； 2.TheSecondClinicalCollegeofWuhanUniversity，Wuhan430071，China； 3.SchoolofEconomics,WuhanUniversity,Wuhan430071，China；4.WuhanYaoguBio-techCo.,Ltd，Wuhan430000，China；5.JacksonStateUniversity，Jackson39209，USA)

Objective To establish a gas chromatograph method for determing Chloroform, ethyl acetate andN,N- dimethyl formamide in butoconazole nitrate. Methods The samples was detected by Headspace Gas Chromatography.Temperature programming method was adpoted and FID was used as detector.The injector temperature was 200 ℃,and the detector temperature was reach 250 ℃.Nitrogen was used as carrier gas in the experiment. Results In the mentioned chromatographic conditions, Chloroform, ethyl acetate andN,N-dimethyl formamide had good linear relationships in the ranges of 0.066-0.588，0.062-0.556 and 0.896-8.061 μg·mL-1respectively.The average recoveries were 99.18%，102.84% and 98.71%.RSD were 3.87%，4.33% and 3.71%. Conclusion The detection method is sensitive, accurate, reliable, and can be used as a quality control for butoconazole nitrate.

Butoconazole, nitrate；Chromatography，gas；Organic solvent residue

2014-05-12

2014-08-13

*2013年湖北省重大科技创新计划(2013ACA006)；光谷第七批“3551光谷人才计划”创新人才项目

刘薇芝(1982-)，女，湖南邵阳人，主管药师，硕士，研究方向：新药研究。电话：027-67813197，E-mail：liuweizhi2001@126.com。

胡汉昆(1970-)，男，湖北武汉人，主任药师，硕士生导师，研究方向：新药研究。电话：027-67812902，E-mail：whyhlz@163.com。

R978.5；R927.1

B

1004-0781(2015)08-1072-03