赶黄草慢性肾脏毒性研究*

谢惠波，汤艳，刘青青

(泸州医学院公共卫生学院，泸州 646000)

赶黄草慢性肾脏毒性研究*

谢惠波，汤艳，刘青青

(泸州医学院公共卫生学院，泸州 646000)

目的 对赶黄草的慢性肾脏毒性进行研究，为赶黄草在食品、药品中的开发应用提供科学依据。方法 将48只SD大鼠随机分为0.9%氯化钠溶液组和生药5，10，20 g·kg-1赶黄草组，每组12只，每天灌胃1次，每周6天，星期日停1天，持续3个月。取血检查血清尿素(Urea)、尿酸(UA)、肌酐(Cre)，苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏的形态结构。结果 赶黄草各组大鼠体质量与0.9%氯化钠溶液组比较均差异无统计学意义(P>0.05)；赶黄草各组动物血清尿素、尿酸、肌酐等肾功能指标与0.9%氯化钠溶液组比较均差异无统计学意义(P>0.05)；赶黄草各组肾脏脏器系数与0.9%氯化钠溶液组比较差异无统计学意义(F=1.37，P=0.268)；赶黄草各组大鼠肾脏组织学观察无明显异常，仅见间质内少量炎性细胞浸润、水肿与点状坏死。结论 长期给予赶黄草灌胃对大鼠肾脏的形态结构和功能无明显的损伤。

赶黄草；毒性，肾脏，慢性

赶黄草(PenthorumchinensePursh)为虎耳草科扯根菜属植物赶黄草的干燥地上部分，主要分布于华北、华东、中南及陕西、四川和贵州等地。近年来逐渐采用家种，大量种植于四川省古蔺县境内[1]。赶黄草全草性温、味甘、无毒，具清热、利尿、解毒、活血、平肝、健脾、祛黄疸等功效，主治黄疸、水肿、经闭、血崩、带下、跌打损伤，以及各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等[2]。目前针对赶黄草的药物作用研究比较多，对于其毒性作用研究甚少。肾脏是体内最大的排泄器官，故笔者以斯泼累格·多雷(Sprague Dawley，SD)大鼠为研究对象，研究赶黄草的慢性肾脏毒性，为赶黄草的开发利用提供科学的实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物 清洁级SD大鼠48只，体质量90～120 g，雌雄各半，活动能力相近。购自泸州医学院实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK(川)2008-0017。用全营养饲料及自来水喂养，动物房自然采光，室温(25±1)℃，相对湿度(50±10)%，每天换垫料，每周消毒2次。

1.2 试药 赶黄草来源于四川古蔺宏安药业公司，经泸州医学院药学院孙琴教授鉴定为虎耳草科植物扯根菜(PenthorumchinensePursh)的干燥全草，将全草用水浸煮后干燥成粉。

1.3 仪器 FA1104N型电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司，感量：0.1 mg)；BECKMAN CS-15R台式离心机(美国Beckman公司)；LEICA EM UC7 切片机(德国LEICA公司)；奥林巴斯BX51生物显微镜及图像分析系统(日本Olympus公司)；西门子ADVIA1800全自动生化分析仪及原厂配套肾功检测试剂(德国Siemens公司)。

1.4 实验分组及处理 将大鼠自然喂养1周后随机分为：0.9%氯化钠溶液组，生药5，10，20 g·kg-1赶黄草组，每组大鼠12只，雌雄各半。将赶黄草棕褐色粉末(含量为生药13.5 g·g-1)溶于双蒸水，赶黄草组各自分别按生药5，10，20 g·kg-1进行赶黄草灌胃，0.9%氯化钠溶液组给予生药20 g·kg-1赶黄草组等容量0.9%氯化钠溶液灌胃，每天灌胃1次，每周6天，星期日停一天，连续灌胃3个月。

1.5 指标观察

1.5.1 一般常规观察 实验期间每天观察大鼠一般状态、体征、摄食量、饮水及粪便状况。以间隔15 d的大鼠体质量为体质量指标。

1.5.2 肾功指标检查 取血检查血清尿素(Urea)、尿酸(uric acid，UA)、肌酐(creatinine，Cre)等肾功能指标。

1.5.3 病理学检查 处死大鼠并进行详细的系统尸检，解剖中注意观察肾脏的色泽、质地、肿块及空腔脏器的黏膜完整性及色泽，并根据体质量计算其脏器系数[脏器系数= 器官(湿)质量/体质量(mg·g-1)]。肾脏经10%中性甲醛溶液固定后，于相同部位分别取一块组织，经梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、切片(厚4 mm)、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色，进行病理组织学镜检，记录组织改变，并观察有无肾结晶。

1.6 统计学方法 应用SPSS13.0版软件进行统计分析，多组间均数比较采用单因素方差分析，两两比较用SNK法，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况 在实验周期内，赶黄草各组大鼠的精神状态，摄食量、饮水及粪便等一般情况与0.9%氯化钠溶液组比较无明显异常改变。赶黄草各组大鼠体质量与0.9%氯化钠溶液组比较均差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2 赶黄草对大鼠肾功指标的影响 赶黄草连续灌胃3个月后，赶黄草各组动物Urea、UA、Cre等肾功指标与0.9%氯化钠溶液组比较未见明显变化，均差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.3 系统尸检及脏器系数 给予赶黄草3个月后，各组大鼠肾脏均无肉眼可见的病理改变(图1)。赶黄草生药5，10，20 g·kg-1赶黄草组肾脏脏器系数依次为(5.33±0.53)，(5.04±0.89)，(5.49±0.53)，与0.9%氯化钠溶液组(5.47±0.57)比较，差异无统计学意义(F=1.37，P=0.268)。

2.4 组织学检查 赶黄草给药3个月后，进行病理组织学检查，赶黄草各组大鼠肾脏组织学无明显异常，仅见间质内少量炎性细胞浸润、水肿与点状坏死。见图2。

3 讨论

赶黄草是虎耳草科扯根菜属植物扯根菜的干燥地上部分，为苗族传统药物[3]。张中贤等[4]研究发现赶黄草水提物能明显促进正常大鼠胆汁的分泌，抑制胆管结扎和1-萘异硫氰酸酯所致的大鼠胆汁淤积，降低血清中总胆红素的含量，以及碱性磷酸酶、谷酰转肽酶、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartale aminotransferase，AST)的活性。张蕊[5]研究发现赶黄草茶剂作用于50%乙醇诱导的小鼠肝损伤模型，血清转氨酶有明显降低作用，其低、中、高剂量组均能明显降低小鼠血清中ALT、AST的活性。丁庆[6]用赶黄草提取物进行抗突变动物实验，结果表明高低剂量总皂苷对环磷酰胺引起的小鼠微核率均有明显对抗作用。袁叶飞等[7]用赶黄草原料药提取而成的肝苏颗粒，对82例乙型肝炎患者进行保肝治疗，患者治疗后血清肝纤维化指标HAHPCⅢ水平明显降低。以上研究表明赶黄草具有保肝、利胆、抗肝纤维化等作用。

本研究对大鼠给予赶黄草连续灌胃3个月，3个剂量组分别相当于临应用量的20，40和80倍，结果显示大鼠行为活动正常，一般情况良好，各组大鼠血清Urea、UA、Cre等肾功指标未见异常，大鼠肾脏均无肉眼可见的病理改变，大鼠肾脏组织学观察仅见间质内少量炎症细胞浸润及水肿与点状坏死，提示长期赶黄草灌胃对大鼠肾脏的形态结构和功能无明显的损伤。

表1 4组大鼠体质量的变化

Tab.1 Variation of body weight in four groups of rats

组别灌胃前/灌胃后15d30d45d60d75d90d0.9%氯化钠溶液组126.35±18.31146.68±27.32207.09±52.34269.47±58.23311.35±77.45309.34±56.34349.34±97.34赶黄草 生药5g·kg-1组125.91±12.46143.45±24.55205.50±33.28262.40±46.51302.70±64.18310.33±66.94331.71±77.27 生药10g·kg-1组121.75±14.37153.08±25.42215.91±48.97273.33±75.13304.83±95.97310.82±88.41368.00±107.09 生药20g·kg-1组124.92±11.40147.46±16.25211.31±29.42272.61±51.63294.53±74.90300.15±61.87336.77±71.39F0.1990.3040.2830.1180.1150.0890.261P0.8970.8230.8370.9490.9510.9660.853

表2 4组大鼠连续灌胃3个月后肾功能指标

A.0.9%氯化钠溶液组；B.生药5 g·kg-1赶黄草组；C.生药10 g·kg-1赶黄草组；D.生药20 g·kg-1赶黄草组

图1 4组大鼠肾脏肉眼观察

A.0.9%sodium chloride solution group；B.crude drug 5 g·kg-1group；C.crude drug 10 g·kg-1group；D.crude drug 20 g·kg-1group

Fig.1 Appearance of kidneys in four groups of rats

A.0.9%氯化钠溶液组；B.生药5 g·kg-1赶黄草组；C.生药10 g·kg-1赶黄草组；D.生药20 g·kg-1赶黄草组

A.0.9%sodium chloride solution group；B.crude drug 5 g·kg-1group；C.crude drug 10 g·kg-1group；D.crude drug 20 g·kg-1group

Fig.2 Histopathology of kidneys in four groups of rats(HE，×200)

[1] 宋丽，臧志和，廖洪利，等.赶黄草的研究进展[J].西南军医，2007，9(2)：87-88.

[2] 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编：下册[M].北京：人民卫生出版社，2000：480.

[3] 中国科学院植物研究所.中国高等植物属检索表[M].北京：科学出版社，1979：205.

[4] 张中贤，黄剑臻.赶黄草水提取物利胆退黄作用的研究[J].热带医学杂志，2008，8(2)：125-127.

[5] 张蕊.赶黄草用于酒精性肝病茶剂的制备方法：四川.CN201010165639.7[P].2010-09-15.

[6] 丁庆.扯根菜总皂苷及其抗肝炎和抗突变作用：北京.CN200410039582.0[P].2005-08-24.

[7] 袁叶飞，胡祥宇，欧贤红.赶黄草与槲皮素预防酒精性脂肪肝的比较研究[J].中国药学杂志，2011，46(21)：1635-1638.

Study on Chronic Nephrotoxicity ofPenthorumchinense

XIE Huibo, TANG Yan, LIU Qingqing

(SchoolofPublicHealth,LuzhouMedicalCollege,Luzhou646000,China)

Objective To study chronic nephrotoxicity ofPenthorumchinense.To provide a scientific evidence for the development and application ofPenthorumchinensein food and drug. Methods 48 SD rats were randomly divided into 4 groups (n=12), 0.9% sodium chloride solution group and threePenthorumchinensetreated groups.ThePenthorumchinensegroups were treated by intragastric administration with 5，10，20 g·kg-1crude drug once a day for 3 months.The levels of Urea, UA, Cre in serum were detected, and the HE dyeing was chosen to observe the kidney morphology. Results The body weight, nephritic organ quotiety, and the level of Urea, UA, and Cre in each exposure group have no statistically significant difference compared with 0.9% sodium chloride solution group (P>0.05).There were no obvious kidney morphology changes in thePenthorumchinensegroup(F=1.37，P=0.268). Conclusion The kidney morphology and function of rat shows no apparente injury after long-term intragastric administration ofPenthorumchinense.

Penthorumchinense；Toxicity，kidney，chronicity

2013-11-12

2014-02-15

*泸州市科技局2012年自然科学基金资助项目[2012-S-36(1/14)]

谢惠波(1961-)，男，江苏常州人，教授，学士，功能性食品研发及卫生毒理学。电话：(0)18989132788，E-mail：lzxiehuibo@163.com。

R282.71；R285.5

A

1004-0781(2015)08-1007-03