日粮中添加生物絮团对鲫鱼幼鱼生长与肝脏抗氧化指标影响

邱立疆，郁二蒙，吉 红,3*，谢 骏*，王广军，夏 耘

(1.西北农林科技大学 动物科技学院，陕西 杨凌 712100；2. 中国水产科学研究院 珠江水产研究所，农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室， 广东 广州 510380；3. 西北农林科技大学 安康水产试验示范站，陕西 安康 725021)

生物絮团(Biofloc)是养殖水体中以异养微生物为主,经生物絮凝作用结合水体中有机质、原生动物、藻类、丝状菌等形成的絮状物[1]。作为新兴的技术-生物絮团技术，生物絮团是其絮凝所得的副产品，含粗蛋白20%以上，粗纤维低于18%[2-5]，是一种非常规、价格低廉的蛋白饲料源。研究表明，生物絮团较益生菌可更好地促进南美白对虾的生长[6]。用15N同位素标记生物絮团，发现南美白对虾只能利用生物絮团总量的3%[7]，过量的絮团抑制水生动物的生长[8]。用生物絮团饲养罗非鱼，浓度为DM∶14 mg/cm3的生物絮团最有利于罗非鱼的生长[8-9]。也有学者用罗非鱼养殖池塘中形成的絮团替代饲料原料中的鱼粉或豆粕，发现一定水平(DM∶7.8%与15.6%)的替代可提高罗非鱼的体重[10]。但在已有生物絮团替代饵料或者饲料原料的研究中，生物絮团作为蛋白原料在水产饲料中的最适添加量仍未明确。

项目已完成石坎坡改梯34.58hm2、沉沙凼50m3、排洪沟3879m、水土保持林 1011.96hm2、封禁治理 300hm2、农村饮水900户、田间道路94 446 m、机耕道 48 500 m、蓄水池 4 166.84 m3、渠道12 231 m、经济果木林796.90 hm2和沼气池927座等。完成治理水土流失面积30.25 km2，为计划数的79%。

为研究生物絮团的最佳使用水平，提高其菌体蛋白的利用率，本研究在鲫鱼苗种基础饲料中添加不同水平的生物絮团，研究生物絮团的添加对鲫鱼生长性能、体成分及健康状况的影响，为生物絮团技术背景下饲料资源合理利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验所用生物絮团(CP29.39%，EE2.32%)为本实验室培养，鱼粉(CP53.50%,EE10.70%)及其它饲料原料均购自于珠江水产研究所饲料厂，饲料各原料均粉碎过 80 目筛。

1.2 试验鱼及饲养管理

试验鲫鱼(Carassius cuvieri)来自大宗淡水鱼类产业技术体系华南区南沙实验基地；挑选规格一致的鲫鱼放于水族箱(2401)中暂养两周，同时饲喂含粗蛋白30%的商品饲料。预试验结束后，挑选体重(3.24±0.27) g，体长(4.52±0.51) cm的健康鲫鱼300尾，饲养于水族箱中，每缸25尾鱼，饲养周期为8周。

1.3 试验饲料

(终末鱼体重量+死亡鱼体重量-初始鱼体重量)/初始鱼体重量×100

各原料按比例混匀后用饲料制条机(F-26型双螺杆挤条机)压制成直径 1.5 mm饲料条，然后用制粒机(G-500型造粒机)制成长3 mm的颗粒，制成的饲料晾干后放于冰箱冷藏保存，随用随取；试验饲料配方及营养成分见表1。

1.4 样品采集与分析

表1 试验饲料配方及营养成分组成(干物质，%)Table 1 Formulations and proximate compositions(DM,%)

注：①微生物预混料(mg·kg-1):维生素A 300 IU,维生素D3400 IU,维生素E 3 mg，维生素K32.5 mg,维生素B10.25 mg，维生素B20.25 mg，维生素B60.25 mg，维生素B120.096 mg，泛酸钙 1.2 mg，烟酰胺 0.7 mg，叶酸 0.032 mg，生物素 0.05 mg，肌醇 5 mg，维生素C-酯 8 mg，维生素混合物载体为玉米蛋白粉；②矿物预混料(mg·kg-1):铁 280 mg,铜1.92 mg,锌 64 mg,锰 92 mg,钴 0.8 mg,碘 0.8 mg,硒 0.16 mg。无机盐混合物载体为沸石粉。

Notes:①Vitamin premix(mg·kg-1):vitamin A 300 IU,vitamin D3400 IU,vitamin E 3 mg,vitamin K32.5 mg,vitamin B10.25 mg,vitamin B20.25,vitamin B60.25 mg,vitamin B120.096 mg,Calcium pantothenate 1.20 mg,Nicotinic acid 0.7 mg,floc acid 0.032 mg,biotin 0.05 mg,inositol 5.00 mg,ascorby1-2-monophosphate 8 mg,corn gluten meal was used as a carrier;②Mineral premix(mg·kg-1)：Fe 280 mg,Cu 1.92 mg,Zn 64 mg,Mn 92 mg,Co 0.8 mg,I 0.8 mg,Se 0.16 mg，zeolite powder was used as a carrier.

特定生长率(specific growth rate,SGR,%/d)=(ln终末鱼体重量-ln初始鱼体重量) ×100/饲养天数

成活率(survival ratio,SR,%)=

(终末鱼数量/开始鱼数量)×100

从不同水平生物絮团添加对鲫鱼生长(见表2)和生物学性状(见表3)影响结果发现，随着生物絮团添加量的增加，4个处理组间的成活率没有显著差异(P>0.05)；鲫鱼的末均重、增重率、特定生长率都是呈先升高后下降的变化趋势，且Ⅱ组的末均重，增重率，特定生长率显著高于其它组(P<0.05)；末均重Ⅲ组与Ⅳ组没有显著差异(P>0.05)，但是显著低于Ⅰ组(P<0.05)；增重率Ⅳ组显著低于其它各组(P<0.05)，Ⅲ组显著低于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05)。Ⅱ组饲料系数显著低于其它各组(P<0.05)，Ⅲ组与Ⅳ组没有显著差异(P>0.05)，但都显著高于Ⅰ组(P<0.05)。絮团不同水平添加对鲫鱼生物学性状的脂肪指数、肠指数和脾脏指数均没有显著影响(P>0.05)；而Ⅱ组肝指数则显著低于其它各组，Ⅲ组与Ⅳ则没有显著差异(P>0.05)，但是它们都显著高于Ⅰ组(P<0.05)；Ⅱ组肥满度显著高于其余各组(P<0.05)。

配方参考解绶启鲫鱼饲养试验饲料配方[11]。试验所用生物絮团是在室内水泥池中，对草鱼饲以粗蛋白30%某商品饲料，外加碳源(葡萄糖)调节碳氮比为20∶1，24 h不断充氧的条件下培养而成；当絮团总固体悬浮物浓度为200 mg/L时，用200目筛绢网收集并风干；生物絮团的营养成分(干物质)：粗蛋白(29.39±0.42)%，脂肪(2.32±0.07)%，粗纤维(1.22±0.03)%，无氮浸出物(38.60±0.46)%，灰分(17.80±0.32)%，水分(11.50±0.35)%，饲料各原料均粉碎过 80 目筛。

样品采集前试验鱼饥饿24 h；每尾试验鱼测量体重、全长及体长，每缸随机取15尾鱼用MS-222麻醉，另随机取 3 尾鱼采用组织捣碎机进行匀浆作为全鱼样本，其它鱼解剖测量肠长、称空壳重、肝胰脏重、脾脏重及肠重；取肝胰脏组织迅速置液氮中保存，随后转至-20 ℃冰箱保存待用。采用以下公式计算鲫鱼生长性能和生物学性状：

肝胰脏指数(hepatosomatic index，HIS,%)=肝胰脏重/体重量×100

饲料系数(feeding conversion ratio，FCR,%)=投饲总量/(终末鱼体重量+死亡鱼体重量-初始鱼体重量)

肠指数(intestine index，%)=肠重/体重量×100

肥满度(condition factor ,CF,g/cm3)=全鱼重量/体长3×100

1.3.3 相关知识掌握度评估 采用本院自制的量表进行评估，满分100分，包括热量换算、饮食搭配、禁止食用等，掌握度高：评分在92分以上；掌握度一般：评分在70～92分之间；未掌握度：评分在70分以下。

1.2.4 妊娠结局随访 打电话对所有孕妇妊娠结局追踪随访或查阅本院电子病历，包括孕期超声筛查结果、妊娠结局、新生儿体检的外貌、结构、智力发育等。

原文：But he never said a word to Amelia that was not kind and gentler;or thought of a want of hers that he did not try to gratify.译文一：可是他对爱米丽亚总是温柔体贴，千依百顺。

脾脏指数(spleen index， %)=脾脏重/全鱼重×100

脂肪指数(fat index， %)=腹腔脂肪重/全鱼重×100

焦虑症是比较多见的精神科疾病,每年该疾病发病率都在增加,人们的正常生活、学习和工作受到了极大的影响,导致生存质量下降[3-6]。目前临床中采取的药物和心理治疗方式是主要的方法,可是治疗效果不是十分理想,因为焦虑症患者的病情比较复杂,发病机制还不清楚,单一模式治疗的难度比较大[3]。

干物质测定采用恒温干燥法(105 ℃)；蛋白质采用凯氏定氮法测定；脂肪采用索氏抽提法测定；灰分测定采用马福炉灼烧法(550 ℃)；肝脏组织抗氧化指标采用南京建成生物工程研究中心生产的试剂盒测定。

1.5 数据分析

试验结果用“平均值±标准差”(mean±SD)表示。数据用SPSS18.0软件中的独立样本单因素Duncan's方法进行多重比较，以P<0.05 为显著差异水平，P<0.01为极显著差异水平。

2 结果与分析

2.1 生物絮团添加对鲫鱼生长的影响

增重率(weight gaining rate,WGR,%)=

表2 不同水平生物絮团添加对鲫鱼生长影响Table 2 Effects of different levels of biofloc addition on growth performance of Carassius cuvieri

注：同行肩标不同小字字母表示差异显著(P<0.05)。下同。

Note:Values with different lowercase superscripts in the same column show significant difference(P<0.05).The same below.

表3 不同水平生物絮团添加对鲫鱼生物学性状的影响Table 3 Effects of different levels of biofloc addition on biological parameters of Carassius cuvieri

2.2 生物絮团添加对鲫鱼常规成分的影响

不同水平絮团添加对鲫鱼全鱼、肌肉和肝胰脏的常规成分的影响结果见表4。由表4可知，各试验组全鱼和肝胰脏水分含量没有显著差异(P>0.05)，Ⅱ组肌肉水分显著高于其它组(P<0.05)，Ⅰ组和Ⅲ组没有显著差异(P>0.05)，但显著高于Ⅳ组(P<0.05)；对照组Ⅰ全鱼和肝胰脏粗脂肪显著高于其它组(P<0.05)，而各处理组没有显著差异(P>0.05)，肌肉中粗脂肪没有显著差异(P>0.05)；全鱼粗蛋白各处理组显著低于对照组Ⅰ(P<0.05)，Ⅱ组和Ⅲ组没有显著差异(P>0.05)，但显著高于Ⅳ组(P<0.05)；肌肉中粗蛋白随着絮团添加量的增加，各处理组呈显著上升趋势(P<0.05)，且均显著高于对照组(P<0.05)；肝胰脏粗蛋白Ⅱ组显著高于其它试验组组(P<0.05)。各处理组全鱼，肝胰脏灰分显著高于对照组(P<0.05)，而肌肉中灰分则没有显著差异(P>0.05)。

表4 不同水平生物絮团添加对鲫鱼体成分的影响Table 4 Effects of different levels of biofloc addition on body composition of Carassius cuvieri %

2.3 生物絮团添加对鲫鱼肝脏抗氧化指标的影响

鲫鱼肝胰脏组织抗氧化指标(见表5)，T-SOD，GST， CAT随絮团添加量的上升，均处于先上升后下降趋势，且Ⅱ组均显著高于其它组(P<0.05)，各处理组均显著高于对照组(P<0.05)；肝脏中MDA含量Ⅱ组显著低于其余试验组，而其余试验组之间则没有显著差异(P>0.05)。

工程勘察中经常出现不按照规定进行勘察，例如角点处出现过大的孔间距，达不到规定的孔深与孔距。在工程勘察流程中，因为对试验取样环境不够了解，导致勘探过程中出现突发状况。部分技术人员是在不考虑场地实际情况和土壤条件的情况下根据最低限度试验抽样，没有对取样、测试的均匀性与有效性进行全面考虑。

表5 不同水平生物絮团添加对鲫鱼肝脏抗氧化指标的影响Table 5 Effects of different levels of biofloc addition on antioxidant index in hepatopancrease of Carassius cuvieri

3 讨 论

3.1 生物絮团添加对鲫鱼生长的影响

生物絮团作为蛋白源添加到饲料中的研究相对于其它蛋白源(棉粕，豆粕，菜粕，肉骨粉、羽毛粉等)较少，目前饵料替代研究主要集中在罗非鱼、对虾和鳙鱼等[12-14]养殖中。本试验结果显示，当生物絮团添加量为10%时，鲫鱼生长效果显著优于其它试验组(P<0.05)，肥满度也显著高于其它各组(P<0.05)，而当絮团添加量上升时，鲫鱼的生长受到抑制。有研究用生物絮团直接饲喂鳙，发现生物絮团对鳙的末均重，增重率，特定生长率，肥满度显著高于配合饲料组(P<0.05)[14]。将越冬罗非鱼苗种放入生物絮团池，罗非鱼的肥满度显著高于对照组(P<0.05)[15]。本研究中,10%添加组的肝指数显著低于对照组和其它试验组(P<0.05)，说明絮团的添加对鲫鱼肝脏代谢有显著影响(P<0.05)。用不同水平絮团替代虾料中的鱼粉和豆粕，处理组虾的增重率和特定生长率显著高于对照组(P<0.05)[10]，这与本试验的结果一致。目前关于生物絮团促进水产动物生长的具体原因还不清楚，有研究者称可能是生物絮团是菌类蛋白，其氨基酸组成有利于水生动物的吸收；生物絮团含有益生菌是促进生长的另一个原因[10,16-17]。研究发现生物絮团对鲫鱼的脂肪指数、肠指数、脾脏指数没有显著影响，说明生物絮团的添加不会对鲫鱼的生物学性状(肥满度和肝指数除外)产生显著影响(P<0.05)。

3.2 生物絮团添加对鲫鱼常规体成分的影响

常规成分含量是衡量饲料原料的利用率的一个重要因子，可为评价饲料原料优劣提供参考。本试验条件下的结果显示，鲫鱼全鱼和肝脏的水分、肌肉中的粗脂肪及灰分均不会随着絮团添加水平的升高而变化；而全鱼中粗蛋白、脂肪显著低于对照组(P<0.05)；灰分、肌肉中粗蛋白和肝脏中粗蛋白及灰分则显著高于对照组(P<0.05)。研究用羽毛粉替代鲫鱼饲料中鱼粉，全鱼中的水分也不受添加水平的影响，但处理组全鱼粗蛋白显著高于对照组(P<0.05)，这可能是因为羽毛粉含有较高的粗蛋白(CP∶70.91%)所致[18]。絮团组肌肉中粗蛋白显著高于对照组(P<0.05)，说明生物絮团添加有利于蛋白在肌肉中的形成，这是因为生物絮团含有一定量的必需氨基酸(精氨酸2%，蛋氨酸0.5%、赖氨酸2.1%)[17],有利于氨基酸吸收。用水解棉粕替代鲫鱼饲料中鱼粉，全鱼中粗蛋白显著高于对照组(P<0.05)，而对脂肪含量没有影响[19]；肝脏中粗蛋白结果显示，过量添加导致肝组织中的蛋白含量显著降低(P<0.05)，其原因未知；处理组全鱼和肝脏的灰分含量显著高于对照组(P<0.05)。解绶启研究不同水平的藻粉(CP∶30.6%)添加对鲫鱼全鱼灰分含量显示，发现处理组显著高于对照组(P<0.05)，与本文结果一致[20]，猜测这可能与絮团含有较高的灰分有关。

3.3 生物絮团添加对鲫鱼肝脏抗氧化指标的影响

生物絮团是一种混合单细胞蛋白原料[21],关于其对抗氧化性的研究尚未见报道，本研究结果显示：生物絮团添加对肝脏T-SOD，GST、 CAT和MDA有显著影响，添加10%时，其抗氧化性能得到提高，而过量添加抗氧化性能则受到抑制。此效果可能与生物絮团含有益生菌-芽孢杆菌[22]有关。在水体施用或者饲料中添加芽孢杆菌与对照组相比，处理组草鱼肝脏总抗氧化力(T-AOC) 显著升高(P<0.01), 而肝脏中丙二醛(MDA)含量显著下降(P<0.01)[23-24]， 这与本文的研究结果一致。

1.1 对象 2011年10月选择上海市长宁区6所2级医院，按主管护师:护师:护士为1∶4∶5比例采用分层抽样法中抽取护理人员200名。纳入标准:具有国家规定的护士执业证书;在临床护理中能接触到静脉治疗。200名护理人员中，职称:主管护师21名，护师79名，护士100名;学历:中专54名，大专115名，本科及以上31名。护龄:0～4年92名，5～9年36名，10～14年27名，15～19年14名 ，20年以上31名。

4 结 论

适量的生物絮团添加可以促进鲫鱼生长，提高肝脏抗氧化性能，而过量添加则会抑制鲫鱼生长和导致鲫鱼肝脏受到应激胁迫。本研究结果显示，生物絮团在鲫鱼饲料中的添加量应该在10%左右。

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