不同配比花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆的影响

方文富 郭海坤 胡发明 林 静 邓群芳 王丽蓉 黄文英 赖福平 丁维凯 郭 俊

（福建农林大学蜂学学院，福州金山 350002）

蜂花粉是蜜蜂主要的蛋白质营养来源。在科学养蜂中，当外界缺乏花粉时常常通过补充饲喂人工花粉代用品来弥补粉源的不足，促进蜂群繁殖和提高蜂王浆产量。目前，人工花粉代用品已成为科学饲养蜜蜂重要的蛋白质补充饲料[1-3]。有关人工花粉代用品及其添加剂对蜜蜂的作用前人也作了一些有益的探讨[4-15]，即丰富了蜜蜂营养相关生理学理论，又为养蜂生产采用适合的人工花粉代用品提供了科学依据。本文试图通过采用不同配比油菜花粉与黄豆粉的人工花粉代用品饲喂蜜蜂，就其对意大利蜜蜂所产蜂王浆的10-羟基-癸烯酸（10-HDA）、粗蛋白、灰分和水分等含量的影响进行探讨，以为研制更为科学的蜜蜂人工花粉代用品提供借鉴。

1 材料与方法

本实验于2009年3～5月在福州西郊福建农林大学蜂学学院教学蜂场进行。

1.1 实验材料

1.1.1 实验蜂群

实验蜂群为福州本地意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica，简称“意蜂”），40群，蜂群遗传性状一致，群势 1 足框，采用1/2脾蜂箱饲养。实验蜂群分 5 组，每组 8 群。实验期间，实验群巢门均安装蜂花粉采集器（脱粉板圆孔直径4.9 mm），防止蜜蜂把天然花粉带进蜂巢，并同时开始饲喂实验用人工蛋白质饲料。

1.1.2 实验用蛋白质饲料

油菜（Brassica napusL.）花粉2007年产自甘肃省民乐县。

黄豆（Glycine max Merrill）粉来自杭州市萧山区靖江镇；直径0.3 mm。

实验用蛋白质饲料由油菜花粉与黄豆粉按不同比例混合而成。1号饲料：100%花粉，2 号饲料：75%花粉、25%黄豆粉，3 号饲料：50%花粉、50% 黄豆粉，4 号饲料：25%花粉、75%黄豆粉，5 号饲料：100%黄豆粉。

1.2 实验方法

1.2.1 人工蛋白质饲料饲喂方法

实验时，在各实验蜂群分别安装 1 个巢门蜂花粉采集器，截留工蜂从外界携带返巢的花粉，当日开始分别饲喂不同蛋白质饲料，饲喂时将人工蛋白质饲料制成花粉饼，置于蜂群内巢框上梁供蜜蜂自由采食，饲喂的量以略有剩余为度，每 3 d 饲喂 1次，持续到实验结束为止。

1.2.2 实验样本的提取

1.2.2.1 意大利蜜蜂蜂王浆样本的提取

生产供试蜂王浆在不同实验蜂群同一时间进行。方法是：在生产供试蜂王浆前 1 d 用王笼将实验群蜂王扣起来。然后，按常规方法移虫产浆。所生产王浆分别装入大号Eppendorf 管，做好标记，并马上放入有冰块的保温杯中，取浆结束后，统一冷冻保存备用。

1.2.3 蜂王浆中10-HDA含量的测定方法

采用高效液相色谱法测蜂王浆中10-HDA的含量。方法是：

（1）样液的制备 样品解冻至室温后用玻璃棒搅匀，取约0.5 g，置已称重的50 mL容量瓶中，精密称定，加0.03 mol/L 盐酸 1 mL 和水 2 mL，加纯甲醇30 mL，边加入边轻轻摇动，再精密加入内标溶液（每毫升含对羟基苯甲酸甲酯约0.65 mg）10 mL，并用纯甲醇稀释至刻度，摇匀，置超声波浴中超声15 min，放置冰箱过夜后测定。

（2）色谱条件 测定波长：210 nm；柱温度：35℃；流动相（纯甲醇＋0.03 mol/L 盐酸＋重蒸馏水）流速：1 mL/min。

（3）校正因子的测定 精密吸取10-HDA标准溶液0.5、1、2、3、4、5 mL 至10 mL 容量瓶中。精密加入内标溶液 2 mL，用纯甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取此溶液 2 uL。注入色谱仪，用峰面积比值计算，应呈线性，求出校正因子 F 。

（4）试样测定 吸取试样溶液 4 uL，注入色谱仪，按“内标法”定量。

1.2.4 王浆中粗蛋白含量的测定方法

采用凯氏定氮法测定粗蛋白含量。方法是：

（1）配制药品 用电子天平称取样品，将待测样品与浓硫酸（20 mL）、CuSO4（0.5 g）和K2SO4（4.5 g）放入消化管中。一部份的消化管装只浓硫酸（20 mL）、CuSO4（0.5 g）和K2SO4（4.5 g）留作空白。

（2）硝化 仪器预热 5 min 后，将装好药品的硝化管放入消化仪器中消化 2 h。硝化结束，冷却30 min。

（3）蒸馏 仪器预热后开始蒸馏。加入适量蒸馏水，再加入适量33%氢氧化钠溶液。用装有20 mL 2%硼酸、3～5 滴甲基红—溴甲酚绿混合指示剂的锥形瓶作为吸收液接取蒸馏物质。

（4）滴定 将吸收液用一定浓度的盐酸标准溶液滴定至由蓝绿色变为粉色为终点。

（5）记录 计算出样品含氮量。每个样品做3次重复测定，取平均值。

1.2.5 王浆中灰分含量的测定方法

采用硫酸盐法测定。方法是：精密称取蜂王浆试样约1.5 g置于已灼烧至恒重并知其精确质量的瓷坩埚中，在电炉上缓缓灼烧至完全炭化，冷却至室温，加入硫酸0.5～l mL，使其湿润，低温加热至硫酸蒸汽除后，放入高温炉，在700～800℃下灼烧至完全炭化，冷至200℃以下后取出放路干燥器内冷却至室温。精确称量后在放入高温电炉反复灼烧至恒重（前后两次质量差＜0.0003）为止。

1.2.5 王浆中水分含量的测定方法

采用常压干燥法。方法是：精确称取蜂王浆1～2 g，放入已干燥至恒重并知其精确质量的称量瓶中，并置于电热恒温鼓风干燥箱中，温度控制在100～105℃。烘 2 h，取出放入干燥器内冷却至室温，称量，再烘 1 h，取出放入干燥器中，冷却、称量，重复此操作至前后两次质量差不超过0.0002 g，即完成测定。

1.3 实验数据统计分析方法

1.3.1 王浆中10-HDA含量计算方法

式中：X：王浆中10-HDA含量（%）；F：校正因子；As：试样中内标物峰面积；Ai：试样中被测组分峰面积；Ms：内标物质量（g）；M1：试样质量（g）。

1.3.2 王浆中蛋白质含量的计算方法

式中：X：蜂王浆中蛋白质含量（%）；0.014：氮的毫摩尔质量；c：盐酸标准溶液的浓度（mol/L）；m：样本的质量（g）；V：样本消耗标准盐酸的体积（mL）；V0：空白样本消耗标准盐酸的体积（mL）；n：稀释倍数

1.3.3 王浆中灰分含量的计算方法

式中：X：蜂王浆灰分（%）；M1：坩埚和样品的重量（g）；M2：恒重后坩埚和灰分的质量（g）；M3：灼烧至恒重的坩埚重量（g）。

1.3.4 王浆中水分含量的计算方法

式中：X：蜂王浆水分（%）；M1：称量瓶和试样的质量（g）；M2：恒重后称量瓶和试样的质量（g）；M3：称量瓶的质量（g）。

1.3.5 差异显著性统计分析方法

采用SPSS17.0统计软件进行 F 检验统计分析实验数据的差异显著性。

2 结果与分析

2.1 不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对王浆中10-HDA含量影响的实验和统计分析结果

饲喂5 种不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆中 10-HDA 含量影响的实验和统计结果显示：饲喂不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料意蜂所产王浆中的 10-HDA 含量之间差异不显著（P＞0.05）。说明不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对王浆中 10-HDA 含量基本不产生影响（表 1 ）。

表1 不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆10-HDA含量影响的实验结果（± s ）

表1 不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆10-HDA含量影响的实验结果（± s ）

注：1）小写字母表示差异达显著水平。

处理 n 10-HDA 平均含量（%）3 号饲料 5 1.6700±0.2453 a1）2 号饲料 4 1.6250±0.1066 a 1 号饲料 4 1.6050±0.2342 a 4 号饲料 5 1.5280±0.1522 a 5 号饲料 5 1.3540±0.2730 a

2.2 饲喂不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆粗蛋白含量影响的实验和统计分析结果

饲喂5 种不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆中粗蛋白含量影响的实验和统计结果显示：饲喂 5 号饲料的王浆粗蛋白含量极显著高于饲喂1、2、3、4 号饲料的（P＜0.01）；饲喂 4 号饲料的王浆粗蛋白含量极显著高于饲喂 1、2、3 号饲料的（P＜0.01）；饲喂 3 号饲料的王浆粗蛋白含量极显著高于饲喂 1 号饲料的（P＜0.05），显著高于饲喂 2 号饲料的（P＜0.01）；饲喂 2 号饲料的王浆粗蛋白含量显著高于饲喂 1 号饲料的（P＜0.05）。说明不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆的粗蛋白含量影响显著，蛋白质饲料中黄豆粉的含量越多，生产的王浆中粗蛋白含量越高（表 2）。

2.3 饲喂不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆灰分含量影响的实验和统计分析结果

表2 不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆粗蛋白含量影响的实验和统计分析结果（± s ）

表2 不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆粗蛋白含量影响的实验和统计分析结果（± s ）

注：1）大写字母表示差异达极显著水平，小写字母表示差异达显著水平。

处理 n 粗蛋白平均含量（%）5号饲料 5 19.1180±0.7219 aA1）4号饲料 5 17.3140±0.2185 bB 3号饲料 5 16.3440±0.3829 cCD 2号饲料 5 15.4640±0.6717 dDE 1号饲料 5 14.6620±0.4481 eE

饲喂5 种不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆中灰分含量影响的实验和统计结果显示：饲喂 1 号饲料的王浆灰分含量极显著高于饲喂 3、4、5 号饲料的（P＜0.01），但与饲喂2号饲料的差异不显著（P＞0.05）；饲喂 2 号饲料的王浆灰分含量与饲喂 3、4 号饲料的王浆灰分含量之间无显著差异（P＞0.05），但极显著高于饲喂 5 号饲料的（P＜0.01）；饲喂 3 号饲料的王浆灰分含量与饲喂 4号饲料的无显著差异（P＞0.05），但极显著高于饲喂 5 号饲料的（P＜0.01）；饲喂 4、5 号饲料的王浆灰分含量之间有显著差异（P＜0.05）（表 3）。说明不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆的灰分含量影响较大，而且蛋白质饲料中花粉的含量越多，生产的王浆中灰分含量越高。

表3 不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆灰分含量影响的实验和统计分析结果（± s ）

表3 不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆灰分含量影响的实验和统计分析结果（± s ）

注：1）大写字母表示差异达极显著水平，小写字母表示达差异显著水平。

处理 n 灰分平均含量（%）1 号饲料 5 1.1220±0.0712 aA1）2 号饲料 5 0.9860±0.0841 abAB 3 号饲料 5 0.9280±0.1657 bB 4 号饲料 5 0.9080±0.1132 bBC 5 号饲料 5 0.7020±0.1199 cC

2.4 不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂蜂王浆水分含量影响的实验和统计分析结果

饲喂5 种不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆水分含量影响的实验和统计结果显示：饲喂5 种不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料，意蜂所生产王浆的水分含量之间差异不显著（P＞0.05），说明不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂蜂王浆的水分含量无影响。

表4 不同比例油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆水分含量影响的实验和统计结果（± s ）

表4 不同比例油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆水分含量影响的实验和统计结果（± s ）

注：1）小写字母表示达差异显著水平。

处理 n 灰分平均含量（%）3 号饲料 5 64.9720 ± 2.7461 a1）1 号饲料 5 64.8340 ± 2.2919 a 5 号饲料 5 63.6760 ± 1.0289 a 2 号饲料 4 64.5950 ± 2.4246 a 4 号饲料 5 64.5020 ± 0.3881 a

4 讨论

（1）采用 5 种不同配比油菜花粉与黄豆粉蛋白质饲料对意蜂王浆中10-HDA含量影响的实验结果显示，不同饲料组的王浆中 10-HDA 含量之间差异不显著（P＞0.05），说明不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对王浆中 10-HDA 含量无影响。

实验用 1～5 号饲料的蛋白质含量分别为24.508%、28.849%、34.3726%、36.755%和38.808%，不同配比油菜花粉与黄豆粉混合饲料的蛋白质含量有较大的差异，但研究结果这5种不同配比蛋白质饲料对王浆中10-HDA含量无影响。这主要可能是蜂王浆中的10-HDA为脂肪酸，其含量多少与饲料中的蛋白质营养水平无必然关系所致。

（2）采用 5 种不同配比油菜花粉与黄豆粉蛋白质饲料对意蜂王浆粗蛋白含量影响的实验结果显示，饲喂 5 号饲料的王浆粗蛋白含量极显著高于饲喂 1、2、3、4 号饲料的（P＜0.01）；饲喂 4 号饲料的王浆粗蛋白含量极显著高于饲喂 1、2、3 号饲料的（P＜0.01）；饲喂 3 号饲料的王浆粗蛋白含量极显著高于饲喂 1 号饲料的（P＜0.05），显著高于饲喂 2 号饲料的（P＜0.01）；饲喂 2 号饲料的王浆粗蛋白含量显著高于饲喂 1 号饲料的（P＜0.05）。说明不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆的粗蛋白含量影响显著，饲料中黄豆粉的含量越多，生产的王浆中粗蛋白含量越高。

由于实验用 1～5 号饲料的蛋白质含量分别为：1 号饲料（100%花粉）24.508%，2号饲料（75%花粉、25%黄豆粉）28.849%，3号饲料（50%花粉、50%黄豆粉）34.3726%，4号饲料（25%花粉、75%黄豆粉）36.755%，5号饲料（100%黄豆粉）38.808%。即黄豆粉含量越多，油菜花粉与黄豆粉混合饲料的蛋白质含量越高。所以实验结果显示的混合饲料中黄豆粉的含量越多，生产的王浆中粗蛋白含量越高的情况这主要是由于油菜花粉与黄豆粉混合饲料的蛋白质含量所致。

据此，鉴于蛋白质是蜂王浆的主要成分之一，在养蜂生产中，可以通过适当提高混合蛋白质饲料中蛋白质含量来提高所生产蜂王浆的粗蛋白含量。

（3）采用5种不同配比油菜花粉与黄豆粉蛋白质饲料对意蜂王浆中灰分含量影响的实验结果显示，饲喂1号饲料的王浆灰分含量极显著高于饲喂3、4、5号饲料的（P＜0.01），但与饲喂2号饲料的差异不显著（P＞0.05）；饲喂2号饲料的王浆灰分含量与饲喂 3、4 号饲料的王浆灰分含量之间无显著差异（P＞0.05），但极显著高于饲喂 5 号饲料的（P＜0.01）；饲喂 3 号饲料的王浆灰分含量与饲喂 4 号饲料的无显著差异（P＞0.05），但极显著高于饲喂 5 号饲料的（P＜0.01）；饲喂 4、5 号饲料的王浆灰分含量之间有显著差异（P＜0.05）（表3）。说明不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆的灰分含量影响较大，而且蛋白质饲料中花粉的含量越多，生产的王浆中灰分含量越高。

蜂王浆 的灰分含量高低反映蜂王浆中矿物质的多寡。不同配比油菜花粉与黄豆粉混合蛋白质饲料中油菜花粉含量越多，生产的蜂王浆中灰分含量越高，这主要是饲料中的矿物质含量不同造成的。

饲喂1、2号饲料的王浆灰分含量之间无显著差异（P＞0.05），说明采用75%花粉与25%黄豆粉构成的混合饲料对蜂王浆中灰分含量不会造成影响。因此，在生产蜂王浆时，可以考虑采用这一比例的混合饲料作为人工花粉代用品饲喂蜜蜂。

（4）采用5 种不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂王浆水分含量影响的实验和统计结果显示：饲喂5 种不同配比的蛋白质饲料，意蜂所生产王浆的水分含量之间差异不显著（P＞0.05），说明不同配比油菜花粉与黄豆粉饲料对意蜂蜂王浆的水分含量无影响。这主要可能是因为饲料的蛋白质营养水平与蜂王浆水分含量没有必然关系的结果。

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