参胶生血颗粒质量标准的研究

庞宇?陆石英

[摘要] 目的 建立参胶生血颗粒的质量控制方法。 方法 采用薄层色谱法对人参、黄芪、首乌进行定性鉴别；用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷的含量。 结果 薄层色谱斑点清晰集中，易于鉴别；黄芪甲苷进样量在0.021～0.063 ?g范围内线性关系良好（r=0.9998），平均加样回收率为98.95%（RSD=1.27）。 结论 本方法灵敏、准确、重现性好、专属性强，可作为参胶生血颗粒的质量控制提供依据。

[关键词] 参胶生血颗粒；质量控制；薄层色谱；含量测定

[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）06-98-03

参胶生血颗粒由人参、黄芪、丹参、制首乌、枸杞子等组成的医院复方制剂。补气生血，益精天髓，能有效促进血细胞的生成，提高免疫力。适用于气血虚弱诸症，贫血症，产后、病后身体虚弱，肿瘤患者放、化疗后白细胞减少等。原质量标准只做了黄芪的鉴别，为了更有效地控制参胶生血颗粒的质量，本文对处方中人参、黄芪、制首乌进行薄层色谱鉴别， HPLC-ELSD测定黄芪甲苷的含量，并对本实验进行方法学研究。黄芪甲苷含量测定的方法主要有薄层扫描法、高效液相紫外法、高效液相-蒸发光散射法[1-3]。本文用高效液相-蒸发光散射法对黄芪甲苷进行含量测定，结果准确，重现性好，适用于本制剂对黄芪的质量控制。

1 资料

1.1 仪器

仪器 LC-2010高效液相色谱仪（日本岛津公司），MODEL400-蒸发光检测器（美国soft公司）；BP211D电子天平（德国塞多利斯仪器公司）；YOKO-ZS 紫外线分析摄影仪（武汉药科新技术开发有限公司）。

1.2 试药

乙腈为色谱试剂（Fisher公司），水为重蒸馏水，其试剂均为分析纯。硅胶G薄层板（自制硅胶G板，青岛海洋化工厂，Merck公司）人参皂苷Rg1 （含量测定用，批号0862-9903）、黄芪甲苷（含量测定用，批号 110781-200613），何首乌对照药材（鉴别用，批号110703-200424），以上对照品和对照药材均由中国药品生物制品检定所提供。参胶生血颗粒（广西医院药剂科，批号20080510、20080920、20091124）。

2 方法和结果

2.1 人参、黄芪的薄层色谱鉴别[4]

2.1.1 供试品溶液配制 取本品，研细，称取粉末1 g，加甲醇100 mL，加热回流提取3 h，放冷滤过，滤液蒸干，残渣用水30 mL溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20 mL，正丁醇液蒸干，残渣用水30 mL溶解，滤过，滤液通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为12 cm），先后用水50 mL、40%乙醇30 mL和70%乙醇50 mL洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5 mL使溶解，溶液备用。

2.1.2 对照品溶液配制 取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品，分别加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液备用。

2.1.3 阴性对照溶液配制 制备方法和制备过程参照上述供试品溶液的制法。

2.1.4 鉴别试验 参照中国药典2010年版一部附录VIB中关于薄层色谱法标明的具体鉴别方法，吸取上述3种溶液各5～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4︰1︰5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，分别显相同颜色的斑点，阴性对照无对应的斑点。见图1。

1.供试品（20080510）；2.供试品（20080920）；3.人参皂苷Rg1；4.黄芪甲；5-缺人参、黄芪的阴性样品

2.2 制首乌的薄层色谱鉴别[4]

2.2.1 供试品溶液配制 取本品2 g，研碎，加甲醇20 mL，超声处理15 min，滤过，用少量甲醇洗涤药渣，滤过，合并滤液使成20 mL，取滤液10 mL，蒸干，残渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作为供试品溶液，备用。

2.2.2 对照药材溶液配制 取何首乌对照药材2 g，依据上述供试品溶液的制备方法同法制成对照药材溶液；取适量的大黄素对照品，用甲醇溶解制成0.5 mg/mL溶液备用。

2.2.3 阴性对照溶液的配制 制备方法和制备过程参照上述供试品溶液的制法。

2.2.4 鉴别试验 参照中国药典2010版一部附录 VIB 中关于薄层色谱法标明的具体鉴别方法，吸取上述两种溶液各2 μL，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15︰2︰1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变成红色，见图2。

1.供试品（20080510）；2.供试品（20080920）；3.供试品（20091124）；4.大黄素；5.何首乌对照药材；6.缺何首乌的阴性样品

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件与系统适应性试验 采用Agilent C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）色谱柱，流动相：乙腈-水（32︰68），流速： 1.0 mL/min，蒸发光检测器。柱温： 30℃， 进样量：20 μL。在本条件下，黄芪甲苷能达到较好分离，样品其他成分对测定无干扰。见图3。可见以甲醇-水，乙腈-水为流动相进行考察，甲醇-水为流动相时出现很多干扰峰，而以乙腈-水为流动相时干扰明显减少，实验结果表明，乙腈-水（32︰68），基线平稳，噪声干扰少，色谱锋型较好。

A.黄芪甲苷对照品；B.供试品；C.阴性对照

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并制成0.1050 mg/mL，的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备 供试品溶液的制备 取本品适量研细，称取4 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40 mL，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5 cm，长12 cm），以水50 mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，备用。

2.3.4 线性关系的考察 精密量取黄芪甲苷对照品溶液（0.1050 mg/mL）2.0、3.0、4.0、5.0、6.0置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，分别精密吸取5、10 μL注入液相色谱仪，记录色谱。以进样量的对数（X）对峰面积的对数（Y）进行线性回归，得黄芪甲苷的回归方程为Y=3.782032X+1.206451，r=0.9990。在（0.021～0.063 μg）范围内具有良好的线性关系。

2.3.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样5次，记录峰面积。结果黄芪甲苷的峰面积的RSD 为1.6%。

2.3.6 稳定性试验 取参胶生血颗粒样品（批号20080510）的供试品溶液，分别于（0、2、4、8、12、24 h）进样20 μL记录峰面积，结果黄芪甲苷的峰面积的RSD分别为2.2%、2.5%、2.8%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.7 重现性试验 取同一批次的参胶生血颗粒各5份，按供试品制备方法制备成供试品溶液，注入色谱仪，记录峰面积，计算含量。结果黄芪甲苷含量平均值（n=5）分别为0.024 54 mg/g、 0.024 12 mg/g、 0.024 28 mg/g；RSD分别为1.9%、2.5%、2.2%。

2.3.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的参胶生血颗粒（20080510）黄芪甲苷含量0.024 54 mg/g），精密加入黄芪甲苷对照品溶液（ 0.1050 mg/mL）0.6、0.7、0.8 mL按供试品溶液制备方法制备，注入色谱仪，记录测定，测定结果见表1。

2.3.9 样品测定 分别取3批参胶生血颗粒样品，按2.2.3项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取2.2.2项下的混合对照品溶液10 μL及供试品溶液20 μL进样，记录峰面积，以外标两点法对数方程计算黄芪甲苷的含量，结果见表2。

3 讨论

本实验建立的舒血灵质量标准的研究与原有的质量标准相比增加了人参、何首乌和女贞子的薄层鉴别及黄芪的含量测定，其中黄芪的含量测定已收载在中国药典2010年版一部[5-6]。本文直接采用药典方法。实验结果表明，该方法简便易行，结果准确，重现性好，适用于本制剂对黄芪的质量控制。

3.1 对提取方法的考察[7]

比较索氏提取法和超声提取法，以不同的提取时间进行对比，结果发现，采用索氏提取法的提取率更高。

3.2 对提取时间的考察

对同一样品用甲醇索氏提取，以1、2、3、4和5 h不同时间进比较，提取4 h与5 h的结果含量、回收率差异无显著性。故选本法提取。

3.3 对流动相的考察[8]

以甲醇-水，乙腈-水为流动相进行考察，甲醇-水为流动相时出现很多干扰峰，而以乙腈-水为流动相时干扰明显减少，实验结果表明，乙腈-水（32︰68），基线平稳，噪声干扰少，色谱锋型较好。

[参考文献]

[1] 陆益，黎远冬，梁宁生等.高效液相色谱法测定复方华蟾胶囊中黄芪甲苷的含量[J].中国医院药学杂志，2007，27（12）：1773.

[2] 马涵涛，沈新伦，杜雄军.HPLC-ELSD 法测定补心气口服液中黄芪甲苷的含量[J].中国药房 2012，36：3444-3445.

[3] 张玲，赵建平，王桂梅.薄层扫描法测定脑清通胶囊中黄芪甲苷含量[J].时珍国医国药 2005，3（9）：125-126.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2005：281，527.

[5] 陈毅华，杨志华，刘镇峰.中药制剂复方薏蓝颗粒中黄芪甲苷的含量分析[J].中国当代医药，2012，19（06）：54-55.

[6] 潘涛，文晓柯，欧阳波，等.胎乐颗粒中黄芪甲苷的提取工艺研究[J].中国医药导报，2012，9（7）：107-108.

[7] 郑丽丽，李嗣斌.HPLC测定当归补血汤颗粒中黄芪甲苷含量的方法分析[J].中外医学研究，2012，10（24）：46-47.

[8] 郭新华，牛卫宁，胡玉霞.小儿生血颗粒质量标准研究[J].中国中医中药信息杂志，2008，15（3）：45-46.

（收稿日期：2013-02-18）