藏药甘露酥油丸质量标准研究

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【摘要】目的：建立藏药甘露酥油丸的质量标准。方法：运用薄层色谱法对样品进行鉴别；采用高效液相色谱法测定没食子酸的含量：Waters Xselect C18 （250 mm × 46 mm，5 μm）柱，流动相：甲醇-02%磷酸溶液（3∶97），检测波长270 nm；柱温25℃；流速为10 mL/min，进样量10μL。结果：诃子、毛诃子、余甘子的薄层鉴别色谱图斑点清晰，分离度好，阴性对照无干扰；没食子酸浓度在05149～10298μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系（R2=09999），精密度、重复性、稳定性实验的RSD<2%，平均加样回收率为9714%。结论：本研究制定甘露酥油丸的质量标准，为该品种的质量控制提供了参考依据。

【关键词】甘露酥油丸；高效液相色谱法；薄层色谱；没食子酸

【中图分类号】R917【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）01-0009-03

Abstract：

Keywords：

甘露酥油丸系藏族验方，收载于1995年版《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第一册。甘露酥油丸具有滋补强身、延年益寿等作用，临床用于气血亏虚，精液衰损，心悸失眠，老年虚弱，肢体僵直，经络不利，虚损不足之症[1]。在原标准中只有性状，检测方法有限，因此有必要对甘露酥油丸标准方法进行研究，以建立全面完善的质量标准。

1仪器与材料

11仪器Spectra system液相色谱仪（Waters公司）。Mettler XP205型（精密度为十万分之一）和Mettler XP504（精密度为万分之一）电子天平。

12材料没食子酸对照品（批号：110831-200803，纯度为901%，中国生物制品检定研究院）；甘露酥油丸（西藏昌都光宇利民药业有限责任公司）此次样品收集到7批，见表1。 HPLC用色谱纯乙腈和甲醇为Tieda产品，水为纯净水，其它试剂为分析纯。

2薄层色谱鉴别

21诃子薄层色谱鉴别[2]取本品50g，加无水乙醇30mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇5mL使溶解，通过中性氧化铝柱（100～200目，5g，内径为15cm）用稀乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水5mL溶解后通过C18（300mg）固相萃取小柱，用30%甲醇10mL洗脱，弃去30%甲醇液，再用甲醇10mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。取诃子对照药材，按供试品溶液制备方法制备，即得对照药材溶液。取缺诃子的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备，即得阴性样品溶液。 按照中国药典2015版通则0502）[3]试验，分别吸取供试品溶液10μL和对照药材溶液5μL，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-水（12 ∶[KG-*2]10 ∶[KG-*2]1）[JP+1]为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同的蓝色斑点。见图1。[FL）]

[LM]

[FL（2K2]

22毛诃子薄层色谱鉴别取本品90g，加热水20mL搅拌使溶解，离心，取上清液，加乙醇30mL，充分搅匀，静置2h，滤过，滤液蒸至约10mL，搅匀，通过聚酰胺柱（30～60目，5g，内径为15cm，干法），加水50mL洗脱，收集洗脱液，置水浴浓缩至约20mL，用醋酸乙酯提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加水20mL，摇匀，放置分层，分取上层液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。另取毛诃子对照药材10g，加热水20mL煮沸，保持微沸30min，滤过，滤液置水浴浓缩至约10mL，用醋酸乙酯提取2次，每次15mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，即得对照药材溶液。缺毛诃子的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备，即得阴性样品溶液。按照中国药典2015版通则0502[3]试验，吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-二氯甲烷-醋酸酯-甲醇（8∶5∶3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干。在紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同的荧光斑点。见图2。

23[JP2]余甘子薄层色谱鉴别取本品90g，加热水20mL搅拌使溶解，离心，取上清液，加乙醇30mL，充分搅匀，静置2h，滤过，滤液蒸至约10mL，搅匀，通过聚酰胺柱（30～60目，5g，内径为15cm，干法），加水50mL洗脱，收集洗脱液，置水浴浓缩至约20mL，用醋酸乙酯提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加水20mL，摇匀，放置分层，分取上层液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。另取余甘子对照药材10g，加热水20mL煮沸，保持微沸30min，滤过，滤液置水浴浓缩至约10mL，用醋酸乙酯提取2次，每次15mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为对照药材溶液。取缺余甘子的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备，即得阴性样品溶液。按照中国药典2015版通则0502[3]试验，吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶9∶3∶02）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至浅黄色斑点出现，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同的荧光斑点。见图3。[JP]

3含量测定

[JP3]31色谱条件色谱柱：Waters Xselect C18 （250mm × 46mm，5μm）；[JP]流动相：甲醇-02%磷酸溶液（3∶97）；检测波长270nm；柱温25℃；流速为10mL/min，进样量10μL。用紫外检测器检测。在此色谱条件下，没食子酸和其它组分均能達到分离。样品中没食子酸保留时间与对照品保留时间一致。见图4。

32供试品溶液的制备取供试品，剪碎，取约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇溶液25mL，精密称定重量，超声处理30min，冷却至室温，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

33对照品溶液的制备取没食子酸对照品257451mg，用50%甲醇溶解，定容于50mL的容量瓶中，得对照溶液05149mg /mL。

34线性范围的考察精密吸取没食子酸对照品溶液（05149mg/mL）各1、2、4、8、16、20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，得到相应的峰面积。以没食子酸对照品浓度为X坐标，以相应峰面积为Y坐标进行回归处理，得回归方程Y=3E+06X+44703，没食子酸线性范围为05149～10298μg，R2=09999 （n=6）。见图5。

35精密度试验精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，计算精密度，结果6次测定值的RSD低于2%，表明该方法精密度良好。

36重复性试验精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，共6次，记录色谱图，6次测定值的相RSD低于2%，表明该方法重复性良好。

37稳定性试验精密吸取供试品溶液10μL，在上述色谱条件下在0、1、2、8、16、24h测得没食子酸的峰面积，计算其RSD低于2%，表明样品在24h内具有较好的稳定性。

38加样回收试验取已知含量的供试品（没食子酸的含量为53740mg/g）6份，分别精密加入对照品溶液（含没食子酸的量05149mg/mL）50mL，再照供试品溶液的制备法提取，按确定的测定方法进行测定，计算回收率，结果表明：回收率在95%～105%之间，该方法回收率良好。见表2。

39样品测定按上述提取方法和色谱条件，对7批次的甘露酥油丸进行了含量测定，测得每批样品中没食子酸的含量。以平均含量下浮20%作为本品的含量限度标准，故暂定本品每克没食子酸不得少于520mg/g。见表3。

4讨论

参考相关文献[4]诃子、毛诃子、余甘子的主要成分均为没食子酸，故采取高效液相色谱法测定没食子酸总量。

诃子、毛诃子、余甘子的薄层鉴别[2，5]。经过多次试验，在薄层色谱行为的重现性良好，专属性强，Rf值适中，分离效果好，因此可以将此方法定为甘露酥油丸的定性鉴别。

取没食子酸对照品溶液适量，采集200～400nm波长间紫外吸收光谱，发现其在270nm 有最大吸收。且没食子酸对照品色谱峰与其它峰达到良好的基线分离，杂质干扰少，峰形好。

参考文献

[1]卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准（藏药第一册）[S]. 1995.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（第一部） [S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（第四部） [S].北京：中国医药科技出版社，2015：103.

[4]中华本草编委会.中华本草·藏药卷[M].上海：上海科技出版社， 2002.

[5]卫生部药典委员会. 中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集[M].广州：广东科技出版社，1993.

（編辑：穆丽华）