对叶百部中的非生物碱类成分*

王 珺，高 羽，张朝凤，张 勉

中国药科大学生药学研究室，南京 211198

百部为临床常用中药，始载于《名医别录》，其性味甘、苦，微温，归肺经，具有润肺止咳、杀虫灭虱的功效，主要用于治疗风寒咳嗽、百日咳、肺结核、老年咳喘、蛔虫病、蛲虫病、皮肤疥癣、湿疹等[1]。《中国药典》2010版一部[2]所收载的百部为直立百部Stemona sessilifolia （Miq.） Miq.、 蔓 生 百 部 S.japonica （Bl.） Miq.或对叶百部 S.tuberosa Lour.的干燥块根，其质量标准的建立一直是该药材的难点，新版药典中只有性状、显微鉴定和生物碱的显色、沉淀反应。本课题组从全国各地收集了30多批次的百部药材样品，经鉴定其基源植物均为对叶百部，说明对叶百部是百部药材市场的主流品种，因此本课题组以对叶百部为研究对象。为了研究和建立对叶百部多类型、多成分质量标准，并累积足够量的化学对照品，对较大数量的对叶百部进行了提取分离。百部类药材的主要化学成分是生物碱类成分，但基于多类型成分质量标准的要求，本课题组对对叶百部的非生物碱类成分也进行了系统的研究，从对叶百部的乙酸乙酯部位分离鉴定了11个非生物碱类化合物，即大黄素甲醚（1），3-羟基-4-甲氧基苯甲酸（2），对羟基苯甲酸（3），（Z）-1，1′-biindenyliden（4），胸腺嘧啶（5），2-（1′，2′，3′，4′-四羟基丁基）-6-（2′，3′，4′-三羟基丁基）-吡嗪 （6）， 掌叶半夏碱戊（7），豆甾醇（8），β-谷甾醇棕榈酸酯（9），β-谷甾醇（10）和β-胡萝卜苷（11）；其中化合物1～9均是首次从该科植物中分得。本研究结果表明了百部类药材中非生物碱类成分的含量较低，类型也较多。

1 材 料

X-4型显微熔点测定仪（温度未校正）；Brucker ACF-300、500 型核磁共振仪；Agilent 1100 LC-MS型质谱仪。

薄层色谱和柱色谱所用硅胶均为青岛海洋化工厂生产；Sephadex LH-20为 Pharmacia公司产品；所用试剂均为分析纯。

对叶百部药材购买于河北省安国市药材市场，经本课题组张勉鉴定为对叶百部（Stemona tuberosa Lour.）的干燥根茎。凭证标本存放于中国药科大学生药学研究室。

2 提取与分离

对叶百部药材52 kg，采用5%Na2CO3浸润后，阴干，95%乙醇反复渗滤提取，直至渗滤液浓缩后，点板基本无碘化铋钾反应为止。渗滤液浓缩，加5%稀盐酸酸化至pH 1～2，过滤，滤液用浓氨水碱化至pH 10，用氯仿萃取，得到总生物碱部分。再将萃取后碱液浓缩，挥干至无氨水味、pH基本为中性，以水混悬，乙酸乙酯萃取，减压回收得到乙酸乙酯部位浸膏。

取乙酸乙酯部位410 g经硅胶柱色谱，用二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脱，根据 TLC 结果合并相同流份，再经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇（100∶0）洗脱部分得到化合物 1（20 mg）、4（8 mg）和 9（20 mg）；二氯甲烷-甲醇 （50∶1） 洗脱部分得到化合物 2 （25 mg）、8（10 mg）和 10 （1 g）；二氯甲烷-甲醇（15∶1）洗脱部分得到化合物 3（210 mg）和 5（10 mg）；二氯甲烷-甲醇（10∶1）洗脱部分得到化合物 11（2 g）；二氯甲烷-甲醇（6∶1）洗脱部分得到化合物 7（350 mg）；二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱部分得到化合物 6（200 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 橘红色针晶 （二氯甲烷-甲醇），mp 197～198℃，Borntrager反应呈红色，醋酸镁反应呈橙红色，推测为蒽醌类化合物。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6） δ：12.16（1H，s，8-OH），11.96（1H，s，1-OH），7.52（1H，s，H-4），7.21（1H，s，H-7），7.20（1H，s，H-5），6.88 （1H，s，H-2），3.94 （3H，s，6-OCH3），2.43（3H，s，3-CH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：189.9（C-9），181.1（C-10），166.1（C-6），164.3（C-8），161.4 （C-1），148.5（C-3），134.8 （C-10a），132.8（C-4a），124.1 （C-2），120.5 （C-4），113.4 （C-9a），109.8 （C-8a），107.6 （C-5），106.5 （C-7），56.3 （6-OCH3），21.4（3-CH3）。 以上1H-NMR、13C-NMR 数据与文献[3]基本一致，鉴定该化合物为大黄素甲醚。

化合物2 白色粉末（石油醚-丙酮），mp：215～217℃，FeCl3反应呈阳性。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6） δ：12.43 （1H，s，-COOH），9.78 （1H，s，3-OH），7.43～7.45 （2H，m，H-2，H-6），6.83 （1H，d，J=9.0 Hz，H-5），3.80（3H，s，-OCH3），由1H-NMR 数据推断该化合物可能为苯甲酸的3，4-位羟基和甲氧基的衍生物。由于羟基的+C效应要大于甲氧基，所以与羟基相邻的质子信号一般要比与甲氧基相邻的处于高场，文献[4]报道，甲氧基连在C-4时H-5的δ值为6.84，而羟基连在C-4时H-5的δ值为6.68。通过与文献[4]对照，鉴定该化合物为3-羟基-4-甲氧基苯甲酸。

化合物3 白色粉末 （二氯甲烷-甲醇），mp 213～214℃，溴甲酚蓝反应阳性。ESI-MS m/z：137[M-H]-，1H-NMR （300 MHz，DMSO-d6） δ：12.39（1H，s，-COOH），10.19 （1H，s，4-OH），7.77（2H，d，J=8.7，H-2，H-6），6.82（2H，d，J=9.0 Hz，H-3，H-5）。13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6） δ：167.1（COOH），161.5 （C-4），131.4 （C-2，C-6），121.3 （C-1），115.0（C-3，C-5）。以上数据与文献[5]基本一致，鉴定该化合物为对羟基苯甲酸。

化合物4 白色片状晶体 （氯仿），mp 312～314℃。 ESI-MS m/z：227[M-H]-，1H-NMR（500 MHz，CDCl3） δ：8.79 （2H，d，J=8.5 Hz，H-7，H-15），8.73（2H，d，J=9.0 Hz，H-1，H-9），8.02 （2H，d，J=9.0 Hz，H-2，H-10），8.00 （2H，dd，J=1.5，8.5 Hz，H-4，H-12），7.71 （2H，dt，J=1.5，8.5 Hz，H-6，H-14），7.64（2H，dt，J=1.5，8.5 Hz，H-5，H-13）。13C-NMR（125 MHz，CDCl3） δ：132.2 （C-3，C-11），130.6 （C-8，C-16），128.6 （C-4，C-12），128.3 （C-17，C-18），127.4（C-2，C-10），126.7 （C-6，C-14），126.4 （C-5，C-13），123.2（C-7，C-15），121.2（C-1，C-9）。 以上数据与文献[6]基本一致，鉴定该化合物为（Z）-1，1′-biindenyliden（见图 1）。

化合物5 白色粉末 （二氯甲烷-甲醇），mp 308～310℃。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6） δ：10.96（1H，s，H-3），10.54（1H，s，H-1），7.23（1H，s，H-6），1.72（3H，s，5-CH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：164.8（C-4），151.4（C-2），137.6（C-6），107.8（C-5），11.7（5-CH3）。 以上数据与文献[7]基本一致，鉴定该化合物为胸腺嘧啶（见图1）。

化合物6 白色粉末 （甲醇），ESI-MS m/z：305[M+H]+，1H-NMR（300 MHz，DMSO-d6） δ：8.62（1H，d，J=0.9 Hz，H-3），8.39 （1H，d，J=1.5 Hz，H-5），5.27（1H，d，J=6.3 Hz，H-1′），4.93 （1H，d，J=6.3 Hz，1′-OH），4.65（1H，s，3′′-OH），4.61（1H，s，2′-OH），4.59（1H，s，2′-OH），4.41（1H，s，4′′-OH），4.39（1H，s，3′-OH），4.34（1H，s，4′-OH），3.75（1H，m，H-2′′），3.61（1H，m，H-4′a），3.60（1H，m，H-3′），3.58（1H，m，H-2′），3.54（1H，m，H-4′a），3.44（1H，m，H-4′b），3.40（1H，m，H-4′b），3.36 （1H，m，H-3′′），3.05（1H，m，H-1′′a），2.72（1H，m，H-1′′b）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6） δ：155.6（C-2），153.2 （C-6），143.2（C-5），142.2（C-3），74.9（C-3′′），73.8（C-2′），71.4（C-1′），71.3（C-3′），71.2（C-2′），63.6（C-4′），63.2（C-4′′），39.9（C-1′）。 以上数据与文献[8-9]基本一致，鉴定该化合物为 2-（1′，2′，3′，4′-四羟基丁基）-6-（2′，3′，4′′-三羟基丁基）-吡嗪（见图 1）。

化合物7 无色针晶 （二氯甲烷-甲醇），mp 189～190℃。 ESI-MS m/z：215[M+H]+，1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6） δ：8.59 （1H，s，H-6），8.35（1H，s，H-3），5.26（1H，d，J=6.5 Hz，1′-OH），4.92（1H，d，J=6.5 Hz，H-1′），4.60 （1H，d，J=5.5 Hz，3′-OH），4.37（1H，d，J=7.5 Hz，2′-OH），4.33 （1H，t，J=5.5 Hz，4′-OH），3.64（1H，m，H-4′a），3.62（1H，m，H-3′），3.59（1H，m，H-2′），3.44（1H，m，H-4′b），2.47（3H，s，2-CH3）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6） δ：157.8（C-5），151.5（C-2），141.8（C-3），140.4（C-6），73.7（C-2′），71.5（C-1′），71.2（C-3'），63.5（C-4′），20.9（2-CH3）。以上数据与文献[10]基本一致，鉴定该化合物为掌叶半夏碱戊（pedatisectine E） [2-甲基-5-（1′，2′，3′，4′-四羟基丁基）-吡嗪，2-methyl-5-（1′，2′，3′，4′-tetrahydroxybutyl）-pyrazine]（见图 1）。

图1 化合物4～7的结构式

化合物8 白色片状晶体 （氯仿），mp 167～168℃，5%浓硫酸香草醛 105℃加热显紫红色，Libermann-burchard反应为阳性。1H-NMR（500 MHz，CDCl3） δ：5.35 （1H，d，J=5.0 Hz，H-6），5.16（1H，dd，J=15.5，8.5 Hz，H-22），5.02 （1H，dd，J=15.5，9.0 Hz，H-23），3.53 （1H，ddd，J=18.0，13.0，4.5 Hz，H-3），1.01 （3H，s，19-Me），0.93 （3H，d，J=5.5 Hz，21-Me），0.85 （3H，m，29-Me），0.84 （6H，m，26-Me，27-Me），0.68（3H，s，18-Me）。 以上数据与文献[11]基本一致，鉴定该化合物为豆甾醇。

化合物9 白色粉末 （氯仿），mp 87～88℃，5%浓硫酸香草醛105℃加热显紫红色，Libermann-burchard 反应为阳性。1H-NMR （300 MHz，CDCl3） δ：5.37 （1H，d，J=4.4 Hz，H-6），4.61 （1H，m，H-3），2.30（2H，m，H-4a，H-4b），2.25 （2H，m，H-2′a，H-2′b），1.85（2H，m，H-2a，H-2b），1.02（3H，s，19-CH3），0.88（3H，m，16′-CH3），0.85 （3H，m，26-CH3），0.82（3H，m，29-CH3），0.80 （3H，m，27-CH3），0.68 （3H，s，18-CH3）。以上数据与文献[12]报道的数据基本一致，故确定该化合物为β-谷甾醇棕榈酸酯。

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