青钱柳地上部分的化学成分研究*

何 艳 ，殷志琦 **，张 健 ，叶文才 ，3，方升佐

1中国药科大学 天然药物化学教研室，南京 210009；2江苏省中医药研究院 转化医学实验室，南京 210028；3暨南大学 中药及天然药物研究所，广州 510632；4南京林业大学 森林资源与环境学院，南京 210037

青钱柳 Cyclocarya paliurus（Batal.） ljinskaja.又名青钱李（江西）、山麻柳（四川）、甜茶树（贵州）、一串钱（湖北），是胡桃科（Juglandaceae）青钱柳属植物（见图1）。它是我国独有的单种属植物，是国家重点保护的濒危植物之一[1]。据《中国中药资源志要》记载[2]，其树皮、树叶具有清热、解毒、止痛功效，可用于治疗顽癣。其叶甘甜滋润，能生津止渴、清热解暑，被当地老百姓称为“甜茶”、“神茶”[3]，用于治疗糖尿病、高血压、冠心病、神经衰弱等。青钱柳的化学成分研究始于20世纪80年代中期，主要含有三萜皂苷、黄酮、甾体、萜类、有机酸、生物碱等成分[4]。本课题组对青钱柳化学成分进行了研究，从中分离鉴定14个化合物（见图2）；化合物2、3、5和8为首次从青钱柳属中分离得到。

图1 青钱柳树照片

图2 化合物1～14的化学结构

1 仪器与试剂

X-4熔点测定仪（温度计未校正）；Bruker AV-500和AV-300型核磁共振仪；Agilent 1100 Series LC/MSD Trap质谱仪。

柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂）和薄层色谱硅胶 GF254（烟台化工研究所）；Sephadex LH-20（美国Pharmacia公司）；所用试剂均为市售分析纯。

青钱柳药材为2009年6月采集于镇江扬子江林业科技有限公司苗圃，经中国药科大学生药教研室秦民坚教授鉴定为青钱柳Cyclocarya paliurus（Batal）ljinskaja.的地上部分，标本保存于中国药科大学天然药物化学教研室。

2 提取与分离

干燥的青钱柳茎及叶35 kg，80%乙醇加热回流提取3次，每次2 h，提取液减压浓缩至无醇味，加水稀释后依次用氯仿、乙酸乙酯及正丁醇萃取。

乙酸乙酯萃取部位（423 g）经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇梯度洗脱 （100∶5→100∶100），TLC 检识，合并得到8个流份（Fr.1～8）。Fr.2经Sephadex LH-20柱色谱以纯甲醇为洗脱剂纯化，结合重结晶得化合物 1（0.85 g）和 11（300 mg）。Fr.4 经硅胶柱色谱以氯仿-甲醇（100∶8→100∶100）梯度洗脱，Sephadex LH-20柱色谱以纯甲醇为洗脱剂粗分，再通过ODS柱色谱以甲醇-水梯度洗脱（100∶10→100∶0），结合重结晶得化合物 2（2.4 g）、3（30 mg）、4（0.6 g）和 12（1.6 g）。

氯仿萃取部位（268 g）经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇梯度洗脱（100∶1→100∶100），TLC 检识，合并得到8个流份（Fr.1～8）。Fr.3经硅胶柱色谱以石油醚-乙酸乙酯（10∶1→1∶2）梯度洗脱，经反复硅胶柱层析，结合重结晶得化合物13（500 mg）。Fr.5经硅胶柱色谱以氯仿-甲醇（100∶1→100∶100）梯度洗脱，经反复硅胶柱层析及ODS柱色谱，得化合物6（20 mg）和 10（5 mg）。Fr.6经硅胶柱色谱以氯仿-甲醇（100∶5→100∶100）梯度洗脱，经反复硅胶柱层析及ODS柱色谱，最后通过HPLC制备得化合物7（6 mg）、8（10 mg）和 9（15 mg）。Fr.7 经硅胶柱色谱以氯仿-甲醇（100∶10→100∶100）梯度洗脱，合并得到 8个流份A～G馏分，馏分D经ODS柱色谱以甲醇-水梯度洗脱 （100∶75→100∶0）， 经反复硅胶柱层析及ODS 柱色谱，得化合物 5（5 mg）和 14（700 mg）。

3 结构鉴定

化合物 1、4、6、7、9、10、11、12、13、14 与文献比较，数据基本一致，分别鉴定为山柰酚（kaempferol）[5]、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside）[6]、青钱柳酸 B（cyclocaric acid B）[7]、阿江榄仁酸（arjunolic acid）[8]、2α-羟基乌苏酸（2αhydroxyursolic acid）[7]、齐墩果酸（oleanic acid）、槲皮素（quercetin）、异槲皮苷（isoquercitrin）、β-谷甾醇（β-sitosterol）、胡萝卜苷（daucosterol）。

化合物2 淡黄色粉末（甲醇），mp 246～248℃，盐酸-镁粉反应和Molish反应均呈阳性。ESI-MS（m/z）：433[M+H]+， 分子式为 C21H20O10。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ：12.62（1H，s，5-OH），10.95（1H，s，7-OH），10.22（1H，s，4′-OH），7.75（1H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′），6.95 （1H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），6.41 （1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.21 （1H，d，J=2.0 Hz，H-6），5.29 （1H，s，Rha-1），0.79 （3H，d，J=5.6 Hz，CH3）。13C-NMR（DMSO-d6，75 MHz） δ：177.7（C-4），164.2（C-7），161.2（C-5），159.9（C-4′）），157.2（C-9），156.5（C-2），134.2（C-3），130.6（C-2′，6′），120.5（C-1′），115.4（C-3′，5′），104.1（C-10），101.8（C-1′′），98.7（C-6），93.7（C-8），71.1（C-4′′），70.5（C-3′′），70.3（C-2′′），70.0（C-5′′），17.4（C-6′′）。与文献[9]比较，鉴定化合物2为山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranoside）。

化合物3 淡黄色粉末（甲醇），mp 231～233℃，盐酸-镁粉反应和Molish反应均呈阳性。ESI-MS（m/z）：447[M-H]－， 分子式为 C21H20O11。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ：12.62（1H，s，5-OH），10.82（1H，s，7-OH），10.18（1H，s，4′-OH），8.06（2H，d，J=8.9 Hz，H-2′，6′），6.87 （2H，d，J=8.9 Hz，H-3′，5′），6.43 （1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.20 （1H，d，J=2.0 Hz，H-6），5.40 （1H，d，J=7.6 Hz，H-1′′of Gal）。13CNMR（DMSO-d6，75 MHz） δ：177.5（C-4），164.2（C-7），161.2 （C-5），159.8 （C-4′），156.4 （C-9），156.3（C-2），133.2（C-3），130.9（C-2′，6′），120.9（C-1′），115.1 （C-3′，5′，103.8 （C-10），101.7 （C-1′′），98.7（C-6），93.7（C-8），75.8（C-5′′），73.1（C-3′′），71.2（C-2′′），67.9（C-4′′），60.2（C-6′′）。 与文献[10]比较，鉴定化合物3为山柰酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷（kaempferol-3-O-β-D-galactopyranoside）。

化合物5 淡黄色粉末（甲醇），mp 246～248℃，盐酸-镁粉反应和Molish反应均呈阳性。ESI-MS（m/z）：577[M-H]－， 分 子 式 C30H26O12。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ：12.58（1H，s，5-OH），10.19（1H，s，7-OH），δ 7.75 （2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′）、7.58 （2H，d，J=8.7 Hz，H-5′′′,9′′′）、7.48 （2H，d，J=15.9 Hz，H-3′′′）、7.00 （2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′）、6.82（2H，d，J=8.6 Hz，H-6′′′，8′′′），6.43（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.28（2H，d，J=15.9 Hz，H-2′′′），6.23（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），5.39 （1H，d，J=1.1 Hz，Rha-1），0.69（3H，d，J=6.2 Hz，Rha-CH3）。13C-NMR（DMSO-d6，75 MHz） δ：177.6 （C-4），166.0 （C-1′′′），164.4（C-7），161.3（C-5），160.2（C-7′′′），159.9（C-4′）），157.6（C-9），156.6（C-2），144.7（C-3′′），133.7（C-3），130.7（C-2′，6′），130.4（C-5′′，9′′′），125.1（C-4′′′），120.4（C-1′），115.6（C-3′，5′），115.3（C-6′′′，8′′′），114.3 （C-2′′′），104.2 （C-10），101.1 （C-1′′），98.8（C-6），93.8（C-8），72.9（C-4′′），70.0（C-2′′），68.0（C-3′′），67.9（C-5′′），17.1（C-6′′）。 与文献[11]比较，鉴定化合物 5 为山柰酚-3-O-α-L-（4′′-E-p-香豆酰基）吡喃鼠李糖苷[kaempferol-3-O-α-L-（4′′-E-p-coumaroyl）-rhamnopyranoside]。

化合物8 白色无定形粉末 （甲醇），mp 300～304℃，Liebermman-Burchard反应阳性，硫酸香草醛显蓝紫色。 ESI-MS（m/z）：487[M-H]－，分子式为C30H48O5。1H-NMR （C5D5N，300 MHz） δ：5.48（1H，br s，H-12），4.23（3H，m，H-2、23），3.74（1H，d，J=10.5 Hz，H-3），2.63 （1H，d，J=11.2 Hz，H-18），1.16、1.09×3 （each 3H，s，Me-24、25、26、27），0.98（3H，d，J=6.4 Hz，H-29），0.94 （3H，d，J=6.0 Hz，H-30）。13C-NMR（C5D5N，75 MHz） δ：180.2（C-28），139.9 （C-13），126.0 （C-12），78.7（C-3），69.4 （C-2），67.1（C-23），54.1（C-18），48.6（C-1，17），48.4（C-5，9），44.1（C-14），43.1（C-4），40.6（C-8），40.0（C-19），39.9 （C-20），38.8 （C-10），37.9 （C-22），33.7（C-7），31.6（C-21），29.2（C-15），25.4（C-16），24.4 （C-29），24.4 （C-27），24.3 （C-11），21.9 （C-30），19.0（C-6），18.0（C-25），17.9（C-26），14.8（C-24）。 与文献[12]比较，鉴定化合物 8 为 2α，3β，23-三羟基-12-烯-28-乌苏酸 （2α，3β，23-trihydroxy-12-ene-28-ursolic acid）。

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