桂枝与白芍配伍的HPLC指纹图谱研究

王连芝，董静艳

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;2.黑龙江省鸡东县人民医院，黑龙江 鸡东 158200)

桂枝为樟科植物肉桂(Cinnamomum cassia Presl)的干燥嫩枝，具有发汗解肌、温通经脉、助阳化气、平冲降气之功效［1］。白芍为毛茛科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall)的干燥根，具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗之功效［1］。桂枝和白芍经常作为药对配伍使用，如张仲景的经典方剂桂枝汤［2，3］，两者经过相互配伍是否使有效成分发生了变化，有必要对桂枝与白芍的配伍进行研究。笔者对此药对进行单煎和合煎提取，并对几种提取物进行指纹图谱比较，以整体角度探讨单煎液和共煎液提取物有否化学组分成分的不同。通过对简单复方－药对的研究，也可以进一步探明中药配伍的规律，为复方化学成分的深入研究打下可靠的基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters 2695型高效液相色谱仪，2996型监测器，Millennium 32色谱处理系统。

1.2 试药

桂皮醛、肉桂酸、芍药苷、原儿茶酸对照品均购于中国药品生物制品检定所(批号分别为111710－200513、110786 － 200503、110736 － 200630，110809 －200503);乙腈为GR级;水为纯化水;其余试剂为AR级;桂枝和白芍饮片购于北京同仁堂哈尔滨药店(产地分别为广东和安徽)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm);柱温:30℃;检测波长:254nm;流速:1.0mL·min－1;流动相:乙腈(A)－0.1%冰乙酸水溶液(B)梯度洗脱，洗脱条件:0min，13%A;30min，35%A;70min，65%A;110min，100%A。

2.2 供试品溶液制备

2.2.1 共煎液提取物样品的制备 桂枝和白芍各1.0g，粉碎成粗粉，加水 100mL，微沸，煎煮 60min，过滤，滤液通过0.4μm的微孔滤膜，即得。

2.2.2 单煎液提取物样品的制备 分别称取桂枝和白芍药材各1.0g，依2.2.1项下方法分别制备桂枝和白芍单味药的提取物样品溶液。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取桂皮醛、肉桂酸、芍药苷和原儿茶酸对照品适量，加入甲醇分别制成对照品溶液。

2.4 结果

2.4.1 共有特征峰的确定 按2.2.1项下方法制备10批供试品溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。获得13个共有特征峰。

2.4.2 指纹图谱色谱峰的标定 吸取2.3项下的对照品溶液进行指纹图谱分析，对照品图与样品图比较结果见图2。对样品图中色谱峰进行标定，样品图中2号峰保留时间为11.9min的色谱峰为原儿茶酸对照品的色谱峰;7号峰保留时间为28.5min的色谱峰为芍药苷对照品的色谱峰;12号峰保留时间为51.7min的色谱峰为桂皮醛对照品的色谱峰;13号峰保留时间为55.2min的色谱峰为肉桂酸对照品的色谱峰。

2.4.3 指纹图谱特征峰的来源认定 吸取2.2.2项下的单煎液依2.1项下的条件进行指纹图谱分析，以确定共煎液指纹图谱共有峰的来源，结果见图3。

图1 桂枝和白芍共煎液指纹图谱

图2 对照品指纹图谱与共煎液指纹图谱的比较图

本实验确定其中的13个峰作为特征组成其指纹图谱，为了便于辨认和分析比较，将整个色谱图分为四个区。

第一区指纹特征(保留时间区段约在0～20min):有4个色谱峰，1和3号峰来自于白芍;2和4号峰来自于桂枝。其中2号峰是原儿茶酸。

第二区指纹特征(保留时间区段约在20～40min):有5个色谱峰，它们均来自于白芍，其中7号峰是芍药苷。

第三区指纹特征(保留时间区段约在40～60min):有6个色谱峰，它们均来自于桂枝，其中12号峰是桂皮醛，13号峰是肉桂酸。

图3 单煎液指纹图谱与共煎液指纹图谱的比较图

第四区指纹特征(保留时间在90～120min):有8个色谱峰，除了16号峰外其他峰面积都比较小，它们共同来自于桂枝和白芍。

3 讨论

本实验获得的色谱条件可以用于快速而准确地分析桂枝和白芍及其共煎液的化学成分，实验方法简便，重现性高。通过指纹图谱的分析可知，桂枝和白芍药材在煎煮的过程中没有新的化学成分产生。本实验同时分析了采用甲醇超生的提取方法，其结果与煎煮法比较，煎煮后桂皮醛减少了近30倍，其他峰面积没有明显的变化，但这种变化是否会影响药效还需要做进一步的研究。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京:化学工业出版社，2005:224－225，68－69.

［2］ 王曼华，孙化萍，梁建伟.经方“药对”配伍理论研究概况［J］.辽宁中医药大学学报，2008，10(1):59－60.

［3］ 金芷君.《金匮要略》中“桂枝－白芍”药对之探讨［J］.国医论坛，2008，23(4):5－6.