树舌多糖GF对荷瘤小鼠H22细胞端粒酶活性的影响

于英君，史海蛟，于水兰

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

树舌(Ganoderm，applan，tum(Per.ex Gray)Pat)，属于胆子菌纲、多孔菌目、灵芝属。树舌多糖GF就是从中分离的一个多糖组分，它对小鼠HepA瘤有明显抑制作用［1］。端粒酶为RNA的核糖核蛋白，有逆转录酶活性，可合成端粒重复序列以维持端粒长度从而使细胞获得异常增殖能力。端粒酶与细胞调控及恶性肿瘤形成密切相关，而端粒酶的调控及其与细胞凋亡的关系已成为人类肿瘤研究的新热点［2］。本文通过体内实验用小鼠端粒酶ELISA试剂盒检测树舌多糖GF对小鼠肝癌H22细胞端粒酶的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 昆明种小白鼠36只，体重(20±2)g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

1.1.2 瘤株 由黑龙江肿瘤研究所引进，腹水传代。

1.1.3 主要药物及试剂 树舌多糖GF注射液(黑龙江中医药大学生物化学教研室制备);注射用环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号:08060321);小鼠端粒酶ELISA试剂盒(美国CHEM ICON公司生产，上海郎卡生物有限公司进口分装)。

1.2 实验方法

1.2.1 建立荷瘤鼠模型及分组 取荷瘤H22腹水调整瘤细胞数至2.0×106个·mL－1。0.2%台盼蓝染色，计活细胞数大于95%。在小鼠右腋皮下注射0.2mL稀释液，制成实体瘤模型。接种6h后，把小鼠随机分为三组，每组12只，分别为阴性对照组、环磷酰胺组和树舌多糖组，各组肌肉注射给药每只0.1mL。树舌多糖组按50mg·(kg·d)－1给药，环磷酰胺组30mg·(kg·d)－1，阴性对照组小鼠给予生理盐水，连续10d。

1.2.2 树舌多糖GF抑瘤率的作用 荷瘤鼠于停药次日取材，计算抑瘤率。抑瘤率(%)=(对照组平均瘤重－给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。

1.2.3 端粒酶提取及测定 取每个新鲜的瘤组织共36个样本各100mg，加入500μL生理盐水，组织匀浆，5000r·min－1离心1min，取上清液。然后按照试剂盒说明书进行。

1.2.4 统计学处理 采用SPSS 15.0统计软件包进行分析，计量资料以(±s)表示，组间比较采用t检验。

2 结果

2.1 树舌多糖GF对肝癌H22小鼠抑瘤率的影响

结果见表1。

表1 树舌多糖GF对肝癌H22小鼠抑瘤率的影响

从表1中可以看出，树舌多糖GF组与阴性对照组比较，瘤重明显降低，抑瘤率达到42.25%。表明树舌多糖GF对肝癌H22小鼠的肿瘤有显著的抑制作用，差异有显著性(P<0.05)。

2.2 树舌多糖GF对肝癌H22小鼠端粒酶活性的影响结果见表2。

表2 树舌多糖GF对肝癌H22小鼠端粒酶活性的影响(±s)

表2 树舌多糖GF对肝癌H22小鼠端粒酶活性的影响(±s)

注:树舌多糖GF组、环磷酰胺组与阴性对照组比较，P<0.05;树舌多糖GF组与环磷酰胺组比较，P>0.05。

组别 n A450nm P阴性对照组12 0.13±0.04 0.05 12 0.22±0.07树舌多糖GF组 12 0.16±0.06 0.05环磷酰胺组

从表2中可以看出，树舌多糖GF和环磷酰胺均能降低端粒酶活性，且二者在降低端粒酶活性作用方面无显著差异。

3 讨论

端粒、端粒酶在人类肿瘤发生发展中起复杂作用。端粒的缩短限制细胞增殖并抑制癌变，但过分缩短又导致基因不稳定，从而增加癌变几率。因此，端粒及端粒酶在肿瘤的抑制和发展中均起重要作用。研究发现，人恶性肿瘤细胞中染色体的端粒和端粒酶的活性均不同于正常体细胞;在许多正常体细胞中检测不到端粒酶活性，而几乎所有的人类恶性肿瘤细胞中的端粒酶均呈现活性［3，4］。且端粒酶阳性率随肿瘤的发展过程而增高，在恶性肿瘤中端粒酶活性较高。因此，端粒酶可做为肿瘤的特异治疗靶点。本研究中，树舌多糖GF对该肿瘤生长的抑制作用机制之一是通过降低荷瘤小鼠H22细胞端粒酶活性实现的。深入机制尚需进一步研究。

［1］ 孙巧红，刘正红，刘丽波，等.树舌多糖对HepA小鼠的抑瘤作用及血清LSA含量的影响［J］.中国中医药科技，1996，6(3):24.

［2］ 程鹏，彭志刚，杨杰，等.芒果甙对白血病K562细胞端粒酶活性和凋亡的影响［J］.中药材，2007，30(3):6 －10.

［3］ Meyerson M，Counter CM，Eaton EN，et al.hEST2，the putative human telomerease catalytic subunit gene，Isupregulated in tumor cells and during immortalization［J］.Cell，1997(90):785.

［4］ Saleh S，Lam AK，Ho YH.Real－ time PCR quantification of human telomerase reverse transcriptase(hTERT)in colorectal cancer［J］.Pathology，2008，40(1):25－30.