全血混匀方式对糖化血红蛋白检测结果的影响

田国亮，宋波，李庆（通信作者）

1 淄博市第一医院 （山东淄博 255200）；2 淄博市分子免疫检验医学重点实验室（山东淄博 255200）

糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin，GHb）是 人体血液中血红蛋白糖基化的产物[1]，是临床实验室常用的血糖控制指标[2]。GHb 共包括3 个亚型，分 别 为HbA1a、HbA1b、HbA1c，其 中HbA1a、HbA1b 稳定性差，无法反映GHb 水平。HbA1c 作为结构最稳定的GHb 亚型，可反映受检者过去2～3 个月的平均血糖水平，且不受每日血糖波动、食物和运动的影响[3]。因此，临床以HbA1c 代替GHb 作为反映糖尿病患者近期病情控制情况的最有效和最可靠的指标之一。

HbA1c 的实验室检测方法有多种[4]，目前临床应用广泛的为离子交换高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）[5]，如国内较多实验室采用的美国伯乐D-10 糖化血红蛋白分析仪即是采用HPLC 检测人体全血HbA1c[6]。在实验室实际工作中，我们观察到不同操作人员对标本的处理方式（特别是混匀方式）各有不同，而标本混匀方式是否对检测结果产生影响，目前国内外文献研究较少。本研究探讨检测前标本的不同混匀方式对GHb 检测结果的影响，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料与仪器

收 集 我 院2023 年1—4 月 进 行HbA1c 检 测 的203 份临床患者静脉全血标本，均注入EDTA-2Na 抗凝管中，每管3 ml。采血后立即颠倒混匀8 次，然后送实验室。本研究经淄博市第一医院医学伦理委员会审查批准。

检测仪器采用美国伯乐D-10 糖化血红蛋白分析仪，使用原装试剂及配套校准品和HbA1c质控品。

1.2 方法

将标本在仪器前重新颠倒混匀8 次，然后立即上机检测（混匀检测）；检测结束后的试管静置2 h，待血细胞自然沉降、与血浆分层后，不再混匀直接上机检测（未混匀检测）。（因标本采血时间不一致，血浆分层时间不同，为合理控制变量，使标本混匀程度尽可能接近，所以本研究采取先混匀检测，再通过2 h 自然沉降实现不混匀检测。）

本研究参照WS/T 461-2015《糖化血红蛋白检测》[7]和黄艳萍等[8]的研究结果，认为标本存放2 h对检测结果无影响。每批标本均与两种水平伯乐原装质控品同时检测。

1.3 观察指标

将患者按照年龄（<60 岁、≥60 岁）、血红蛋白水平（男≥130 g/L、女≥115 g/L[9]为正常，否则为贫血）分组，比较各组标本混匀和未混匀检测结果，并计算检测结果间的偏倚。

1.4 统计学处理

采用SPSS 24.0 统计软件进行数据分析。偏态分布的定量资料以[M（Q1，Q3）]表示，采用Wilcoxon符号秩和检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 分组情况

203 例患者按年龄分组，<60 岁组79 例，≥60 岁组124 例；按血红蛋白水平分组，血红蛋白正常组125 例（男61 例、女64 例），贫血组78 例（男38 例、女40 例）。

2.2 不同年龄组标本混匀和未混匀检测结果比较

<60 岁组、≥60 岁组混匀检测结果均高于未混匀检测结果，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 不同年龄组标本混匀和未混匀检测结果比较[%，M（Q1，Q3）]

2.3 不同血红蛋白水平组标本混匀和未混匀检测结果比较

血红蛋白正常组、贫血组混匀检测结果均高于未混匀检测结果，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 不同血红蛋白水平组标本混匀和未混匀检测结果比较[%，M（Q1，Q3）]

2.4 偏倚比较结果

为满足临床医师的决策需求，美国临床病理协会（College of American Pathologists，CAP）组织的室间质评对 HbA1c 产品质量及实验室检测质量保证提出的标准为靶值±6%[10]。根据此标准，以6%为允许总误差，将临床检测项目允许总误差的1/3[11]作为判断标准，计算偏倚。203 例检测结果中，有26 例混匀与未混匀方式的检测结果间偏倚超过1/3 允许总误差，未满足偏倚设定标准。

3 讨论

《中国2 型糖尿病防治指南（2020 年版）》[12]指出，在有严格质量控制的实验室，采用标准化检测方法测定的HbA1c 可以作为糖尿病的补充诊断标准。《中国2 型糖尿病防治指南（2020 年版）》为国内首个将HbA1c 正式纳入糖尿病诊断标准的指南，并对实验室质量控制做出了严格要求。Lee 等[13]研究表明，HbA1c 的早期达标可以有效改善糖尿病患者的预后；而Sun 等[14]研究证实，HbA1c 是接受机械取栓治疗的急性缺血性卒中患者脑出血（特别是症状性脑出血）的独立预测因子。由此可见，HbA1c 为多种疾病的重要实验室指标，加强其检测前、中、后全过程的质量控制[15]，使检测结果更为准确可靠，才能满足临床日益增长的需求。

虽然临床实验室每天进行室内质控、定期参加室间质评，以保证检测质量。但由于日常工作中标本量日益增加、人员轮换频繁等因素影响，不同检测人员检测时的进样方式[16]，尤其是标本混匀方式肯定存在差异。目前，国内外针对HbA1c 的研究大多关注其变异体[17-18]对检测结果的影响。而无论是仪器说明书、试剂说明书还是相关文献，均未明确说明检测前是否需混匀标本。考虑到不同年龄、不同血红蛋白水平患者血液内血细胞的沉降速度不同[19]，因此本研究按照年龄、血红蛋白水平分组，比较各组标本混匀和未混匀检测结果。结果显示，不同年龄、不同血红蛋白水平患者的混匀检测结果均高于未混匀检测结果，差异有统计学意义（P<0.05）；203 例检测结果中，有>12 %的结果间偏倚超出1/3 允许总误差，未混匀检测结果较混匀检测结果出现负偏倚，属于不准确结果。有报道指出，混匀不充分会导致HbA1c色谱图基线斜升[20]，造成误差，本研究结果与之相似。可能为未混匀标本被吸样针吸取时红细胞浓度不足所致。在大规模检测情况下，检测人员会对同一批标本（一般10 个标本为1 批）同时进行混匀，而后逐一检测该批标本。由于每个标本测试时间为3 min，该批次最后1 个标本检测时间与混匀时间相差30 min，此时检测结果的准确性是否可靠值得进一步探讨。特别是因贫血致血细胞沉淀过快的标本，需特别注意防止因吸样针吸取红细胞浓度不足造成的误差。在使用自动进样器连续加载标本的仪器上，因吸样前标本在进样器中等待时间过长会导致红细胞沉降，进而导致吸样针吸取红细胞浓度不足。目前国内仪器厂家生产的糖化血红蛋白分析仪，均未设计标本混匀模块，导致标本吸样前混匀程度不一情况较多见。因此，建议厂家加强研发投入，开发每个标本吸样前自动混匀的功能，以便更好地满足实验室需求。

为进一步获取准确的检测结果，实验室工作人员不应仅关注中文实验室信息系统内枯燥单一的数据结果，还应重视仪器显示屏上的报警信息（报警信息可能会对吸样时红细胞浓度不足进行提示）；对与临床或其他检测指标不符的结果，应进一步分析其色谱图，必要时进行复检。对结果的复检规则[21]，应与血常规复检规则一样，写入实验室SOP 文件中，以期更好地符合ISO15189[22]的要求。