不同乙肝病毒载量与乙肝血清标志物模式、Pre-S1抗原定性结果的相关性分析

王慧　代燕玲

【摘要】  目的    分析不同乙肝病毒載量与乙肝血清标志物模式和Pre-S1抗原定性结果之间的相关性。方法    选择我院2020年3—12月申请血清乙肝DNA定量检测的患者作为研究对象，收集所有的乙肝DNA定量数据，同时用ELISA法检测其乙肝血清标志物和Pre-S1抗原，将结果按照最新的指南进行分类并分析其相关性。结果    本次研究的159例样本中共统计到不同乙肝血清标志物免疫模式有11种；HBV-DNA阳性率为55.97%；Pre-S1阳性率为70.44%；将乙肝五项血清标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb分别采用①、②、③、④和⑤表示。①③⑤模式下，各载量组阳性率：高载量组（87.10%）>中载量组（20.83%）>低载量组（2.94%）>低于检测限组（0），差异具有统计学意义（P<0.05）。①④⑤模式下，各载量组阳性率：低载量组（88.24%）>中载量组（79.17%）>低于检测限组（40.00%）>高载量组（9.68%），差异具有统计学意义（P<0.05）。比较各载量组Pre-S1抗原阳性率，高载量组（100%）、中载量组（100%）>低载量组（97.06%）>低于检测限组（34.29%），差异具有统计学意义（P<0.05）。比较各载量组HBeAg阳性率，高载量组（90.32%）>中载量组（20.83%）>低载量组（2.94%）>低于检测限组（0），差异具有统计学意义（P<0.05）。比较各载量组HBcAb阳性率，中载量组（100%）、低载量组（100%）>低于检测限组（84.29%）>高载量组（96.77%），差异具有统计学意义（P<0.05）。HBV-DNA载量均值与HBeAg阳性率之间存在显著相关性（r=1.000，P=0.000），HBV-DNA载量均值与Pre-S1阳性率之间相关性不显著（r=0.211，P=0.789），HBV-DNA载量均值与HBcAb阳性率之间相关性不显著（r=0.316，P=0.684）。结论    不同乙肝病毒载量与乙肝血清标志物中的HbeAg阳性率存在显著相关性，而与Pre-S1抗原定性结果的相关性不显著；临床应多维度、多方法结合评估患者病情，达到有效治疗的目的。

【关键词】  乙肝病毒载量；乙肝血清标志物；Pre-S1抗原；相关性

Correlation analysis of different HBV loads with HBV serum marker pattern and Pre-S1 antigen qualitative results

Wang Hui 1， Dai Yanling 2. 1 The Chengdu Dongli Hospital，Chengdu，Sichuan  610501；2 The College of Laboratory of Chengdu Medical University，Chengdu ，Sichuan  610500

【Abstract】  Objective    To analyze the correlation between different HBV loads with HBV serum marker pattern and Pre-S1 antigen qualitative results. Methods    HBV DNA data，HBV serum markers and Pre-S1 antigen collected from March to December 2020，were selected as the research objects.According to the latest guidelines，all results were classified and analyzed for difference. Results    According to HBV serum markers，159 samples can be divided into 11 kinds of immune patterns.HBV-DNA positive rate was 55.97%.Pre-S1 antigen positive rate was 70.44%.HBsAg，HBsAb，HBeAg，HBeAb and HBcAb were expressed by①，②，③，④and⑤，respectively.In pattern①③⑤，the positive rate of each load group was as follows：high load group（87.10%）>medium load group（20.83%）>low load group（2.94%）>lower than detection limit group （0），the difference was statistically significant among the four groups（P<0.05）.In pattern①④⑤，the positive rate of each load group was as follows：low load group （88.24%）>medium load group（79.17%）>lower detection limit group（40.00%）>high load group（9.68%），the difference among the four groups was statistically significant （P<0.05）.The positive rate of pre-S1 antigen in all groups：high load group （100%）、medium load group（100%）>low load group（97.06%）>lower than the detection limit group（34.29%），the difference was statistically significant among the four groups（P<0.05）.The positive rate of HBeAg in all groups：high load group（90.32%）>medium load group（20.83%）>low load group（2.94%）>lower than the detection limit group（0），the difference was statistically significant among the four groups（P<0.05）.The positive rate of HBcAb in all groups：medium load group（100%）、low load group（100%）>high load group（96.77%）>lower than that in detection limit group （84.29%），the difference was statistically significant among the four groups（P<0.05）.There was a significant correlation between HBV-DNA mean load and HBeAg positive rate（r=1.000，P=0.000）.There was no significant correlation between HBV-DNA mean load and pre-S1 positive rate（r=0.211，P=0.789）.There was no significant correlation between HBV-DNA mean load and HBcAb positive rate（r=0.316，P=0.684）.Conclusion    HBV loads showed significant difference with HBeAg in HBV serum markers and no-significant difference with Pre-S1 antigen qualitative results.Patients should be evaluated with multi-dimension and multi-method，to improve therapies in clinical diagnosis and treatment.

【Key Words】  HBV Loads；HBV serum markers；Pre-S1 antigen；Correlation

中图分类号：R446        文献标识码：A        文章编号：1672-1721（2023）10-0056-04

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.10.018

乙型肝炎病毒（HBV）引发的乙型肝炎是世界范围内广泛流行的传染病[1]，为导致肝硬化、肝癌等慢性肝病的主要原因，全世界每年约有88.7万人死于 HBV 感染相关疾病。据报道，我国全人群HBsAg流行率为5%～6%，慢性HBV感染者约7 000万例，HBV相关疾病所致的筛查、诊断、治疗等医疗支出给社会和家庭均造成巨大负担[2-4]。目前HBV感染的致病机理尚未完全阐明，临床表现非常复杂，对病情准确诊断和疗效评估都有一定难度。为了节约成本，临床常用HBV血清标志物检测（俗称“两对半”）作为首选检测方法，此方法操作简便、准确性高，但对患者病情严重程度的评估效果并不理想[4]。随着近年来分子诊断技术的发展，血清HBV-DNA定量检测技术不断成熟，已成为评估慢性HBV复制水平及传染性，选择抗病毒时机和疗效监测的金标准；其能明确患者携带的病毒含量，结果最可靠直接，但对实验室条件与技术要求高，基层医院难以普及。另有报道，Pre-S1抗原检测能够更早地反映乙肝病毒的感染及复制情况，成为评估感染情况、复制水平，疗效监测和预后评估的新型标志物[5-6]。本文选择进行血清乙肝DNA定量检测的患者为研究对象，收集所有的乙肝DNA定量数据，同时用ELISA方法检测其乙肝血清标志物和Pre-S1抗原，将所有结果按照《慢性乙型肝炎基层诊疗指南（2020年）》[2]进行载量分类并分析其相关性，旨在寻求更好的乙肝病毒检测方案，为不同临床表现的乙肝患者的病情评估、早诊早治提供依据。

1    资料与方法

1.1    一般资料    选择我院2020年3—12月申请血清乙肝DNA定量检测的患者为研究对象，其中男92例，年龄16～89岁，平均年龄（50.52±18.48）岁；女67例，年龄13～88岁，平均年龄（48.50±20.52）岁。排除标准：（1）伴有甲肝、丙肝、戊肝等传染性肝病；（2）伴有药物性肝病、自身免疫性肝病等其他肝病；（3）合并心脑血管、肺肾及造血系统疾病；（4）妊娠、哺乳期妇女。

1.2    方法

1.2.1    标本采集    所有患者清晨空腹采集静脉血5 mL，室温静置30 min后离心并立即将血清分成3份，保存于-70 ℃备用。注意，脂血标本高速离心10 min后避开脂滴分离。

1.2.2    检测方法    （1）HBV-DNA定量检测：采用磁珠法进行核酸提取，核酸提取仪为之江EX3600，使用上海之江乙肝配套机提试剂盒（试剂货号：Z-ME-0046）。扩增仪器为ABI7500，试剂为乙型肝炎病毒核酸测定试剂盒（上海之江生物科技股份有限公司），本试剂盒经验证在本实验室的线性范围为2×10²～1×10⁸IU/mL。（2）乙肝两对半检测方法：采用酶联免疫法，仪器为艾德康全自动免疫分析仪（型号：ADC ELISA 300），试剂为乙型肝炎病毒五项检测试剂盒[英科新创（厦门）科技股份有限公司]，最低检出量：≤1.0 IU/mL。（3）乙肝前S1抗原检测方法：采用酶联免疫法，仪器为艾德康全自动免疫分析仪（型号：ADC ELISA 300），试剂为乙型肝炎病毒前S1抗原测定试剂盒（郑州安图生物工程股份有限公司）。（4）所有实验均由具有专业资质的人员严格按照标准化操作规程文件进行操作，所有实验室内质控在控，室间质评合格。

1.2.3    主要分组    （1）将乙肝DNA定量监测结果结合《慢性乙型肝炎基层诊疗指南（2020年）》的分类标准和试剂盒的检测上限分为：高载量（>2×10⁷，即7.3<结果对数≤8）、中载量（2×10⁴～2×10⁷，即4.3<结果对数≤7.3）、低载量（2×10²～2×10⁴，即2.3<结果对数≤4.3）、低于检测下限（<2×10²，即结果对数<2.3）。本文HBV-DNA阳性只统计高于检测限的结果。（2）乙肝血清标志物的乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（抗-HBs）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（抗-HBe）、乙肝核心抗体（抗-HBc）分别以序号①、②、③、④、⑤表示。统计所有出现的组合模式数据，标注阳性抗原或抗体编号，未标注的抗原抗体默认为阴性。

1.2.4    主要观察指标    （1）在不同HBV-DNA结果下，乙肝两对半阳性不同组合及占比。（2）在不同HBV-DNA结果下，乙肝前S1抗体的阳性结果情况。

1.2.5    统计学方法    使用SPSS 25.0统计学软件进行数据分析，计数资料以百分比表示，采用χ²检验和Fisher确切概率法检验，相关性检验用Spearman相关性分析，P<0.05表示統计学差异显著。

2    结果

2.1    不同乙肝血清模式下HBV-DNA和Pre S1阳性占比    本次纳入统计的样本总数为159例，其中乙肝血清标志物统计到11种不同免疫模式；HBV-DNA阳性89例，占总样本量的55.97%；Pre-S1阳性112例，占总样本量的70.44%。①③⑤免疫模式中，HBV-DNA阳性率为100%；①④⑤免疫模式中，HBV-DNA阳性率为65%，见表1。

2.2    不同免疫模式及组合中各HBV-DNA载量组阳性占比比较    在159例样本中，HBV-DNA高载量组总数为31例，HBV-DNA中载量组总数为24例，HBV-DNA低载量组总数为34例，HBV-DNA低于检测限组总数为70例。①③⑤模式下，各载量组阳性率：高载量组（87.10%）>中載量组（20.83%）>低载量组（2.94%）>低于检测限组（0），Fisher确切概率法检验结果显示P<0.001，差异具有统计学意义。①④⑤模式下，各载量组阳性率：低载量组（88.24%）>中载量组（79.17%）>低于检测限组（40.00%）>高载量组（9.68%），χ²检验结果显示，χ²=51.006，P<0.001，差异具有统计学意义，见表2。

2.3    不同HBV-DNA载量中Pre-S1抗原、HBeAg、HBcAb的阳性结果对比    比较各载量组Pre-S1抗原阳性率，高载量组（100%）、中载量组（100%）>低载量组（97.06%）>低于检测限组（34.29%），χ²检验结果显示，χ²=78.594，P<0.001，差异具有统计学意义。比较各载量组HBeAg阳性率，高载量组（90.32%）>中载量组（20.83%）>低载量组（2.94%）>低于检测限组（0），χ²检验结果显示，χ²=113.562，P<0.001，差异具有统计学意义。比较各载量组HBcAb阳性率，中载量组（100%）、低载量组（100%）>高载量组（96.77%）>低于检测限组（84.29%），Fisher确切概率法检验结果显示P=0.007，差异具有统计学意义，见表3。

2.4    各指标结果的相关性    HBV-DNA载量均值与HBeAg阳性率之间存在显著相关性（r=1.000，P<0.001），HBV-DNA载量均值与Pre-S1阳性率之间相关性不显著（r=0.211，P=0.789），HBV-DNA载量均值与HBcAb阳性率之间相关性不显著（r=0.316，P=0.684）。

3    讨论

乙型肝炎病毒是一种主要通过血液、体液、母婴传播及性传播的传染性肝脏疾病。我国作为乙肝大国，乙肝相关疾病呈现人口基数大、发病率高、患者众多、诊断治疗困难、防治难度大等特点，其医疗支出给社会和家庭均造成巨大负担[7]。乙肝致病机理较为复杂，至今尚未完全阐明。有研究表明，HBV 并不直接杀伤肝细胞，而是通过免疫应答造成肝细胞损伤和炎症坏死，而持续存在或反复出现的炎症坏死是疾病发展为肝纤维化、肝硬化甚至肝癌的重要原因[8-11]。

乙肝病毒感染的诊断与分期目前通过临床症状体征、既往病史、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶 （AST）、乙肝血清标志物（俗称“乙肝两对半”）、乙肝DNA定量、乙肝Pre-S1抗原等综合判断，而实验室指标由于检测方法和原理的不同，又各有侧重点和优势。血清ALT和AST水平可敏感反映肝细胞炎症损伤的程度，但与病情轻重不完全平行，通常认为高度的ALT、AST异常可提示肝损伤，但有报道指出长期低水平的ALT、AST异常也提示有肝脏损伤。乙肝血标志物作为乙肝诊断中最常用指标，具有简便、 准确率高、耗时短等优点，可以直观表现机体对病毒的免疫反应状态。但因其免疫模式复杂多样，临床无法准确判断患者体内病毒载量情况、评估复制状态及传染性大小，易造成漏诊和误诊，对病情严重程度的评估价值有限。随着近年来分子诊断技术的发展，血清HBV-DNA定量检测技术不断成熟，已成为评估慢性 HBV 复制水平及传染性，选择抗病毒时机和疗效监测的金标准。另有报道，Pre-S1抗原检测能够更早地反映乙肝病毒的感染及复制情况，成为评估感染情况、复制水平、疗效监测和预后评估的新型标志物[12-16]。

本次纳入统计研究的样本总数为159例，其中乙肝血清标志物统计到11种不同免疫模式，查阅相关资料发现，免疫模式的多少可能与样本量大小，患者种类，开单医生的侧重点等有关。结果显示HBV-DNA阳性89例，占总样本量的55.97%；Pre-S1阳性112例，占总样本量的70.44%。免疫模式①③⑤中，HBV-DNA阳性率为100%，而①④⑤中，HBV-DNA阳性率为65.00%，说明 “大三阳”的核酸阳性率高于 “小三阳”。159例样本中HBV-DNA高载量31例，中载量24例，低载量34例，低于检测限70例。①③⑤免疫模式在各载量中占比，高载量组>中载量组>低载量组（P<0.05），说明“大三阳”患者的核酸携带浓度更高，传染性更强，应注意隔离与抗病毒治疗。而①④⑤免疫模式在各组的占比，低载量组>中载量组>高载量组（P<0.05），提示“小三阳”患者仍然携带一定量的病毒，不可低估其传染性，并应注意持续肝功监测，降低进一步加重可能。值得注意的是，本次研究中没有发现免疫模式为②④⑤、②⑤、③⑤、⑤且HBV-DNA结果为阳性的病例，与魏颖[17] 、张良等[18]的报道有差异。推测原因为样本量过少、医生认知差异所致此类患者开单量少，此次样本量过少不足以统计到，所以不应就此认为此类模式均为低于检测限或者阴性，后期我们会扩大样本量，加大宣传，统计一个更大样本群体的结果。

比较各载量组Pre-S1抗原阳性率，高载量组、中载量组>低载量组>低于检测限组（P<0.05）。比较各载量组HBeAg阳性率，高载量组>中载量组>低载量组>低于检测限组（P<0.05）。比较各载量组HBcAb阳性率，中载量组、低载量组>低于检测限组>高载量组（P<0.05）。HBV-DNA载量均值与HBeAg阳性率之间存在显著相关性（P<0.05），HBV-DNA载量均值与Pre-S1阳性率之间相关性不显著（P>0.05），HBV-DNA载量均值与HbcAb阳性率之间相关性不显著（P>0.05）。但此次研究时间短，收集的样本量少，需要进一步扩大样本量，进行更多维度研究分析。

综上所述，不同乙肝病毒载量与乙肝血清标志物中的HBeAg结果存在显著相关性，而与Pre-S1抗原定性结果的相关性不显著。临床诊疗中应采用联合检测的方法，对患者病情进行多维度评估，從而确定诊疗方案，以达到有效治疗的目的。

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（收稿日期：2023-01-14）