贾 筠, 杜望磊, 肖广智, 赵春红, 杨西超
(空军军医大学第一附属医院临床免疫科, 陕西 西安 710032)
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以关节滑膜的慢性炎症、血管翳形成,关节软骨及骨破坏为基本病理表现的全身性、慢性自身免疫性疾病,临床表现多为对称性、侵蚀性多关节炎[1]。RA确切发病机制不明,但其是使人类劳动力丧失和残疾的主要病因之一,早期诊断、早期治疗对提升患者预后至关重要[2]。研究发现,维生素D在钙磷代谢、细胞增殖分化、免疫功能调节等方面有着重要作用;破骨细胞分化因子(osteoclast differentiation factor,RNAKL)是前体破骨细胞分化成熟的重要起始因子,故血清趋化因子、RNAKL及25-羟维生素D[25-hydroxy vitamin D,25(OH)D]可能在RA的发生进展中有着重要作用[3,4]。本文旨在研究血清趋化因子配体20(C-C chemokine ligand 20,CCL20)、RNAKL及25(OH)D水平与疾病进展的相关性,现报道如下。
1.1一般资料:回顾性分析2019年1月至2021年12月于我院诊治的289例类风湿关节炎患者,并将其纳入RA组。纳入标准:①患者诊断符合1987年ACR和(或)2010年EULAR类风湿关节炎分类标准[5],见表1和表2;②患者均为新确诊病例,且未曾服用抗风湿药物、活性维生素D药物、糖皮质激素等治疗。排除标准:①半年内服用过维生素D或其类似物;②不能正常进食或长期卧床、不能接受阳光照射者;③合并甲状腺疾病者;④合并严重肝肾疾病、糖尿病等严重疾病或其他严重并发症;⑤临床资料丢失或不详尽者。同时将同期于我院健康体检且体检结果无异常、无重大疾病史手术史的100例体检者纳入对照组。比较RA组及对照组患者的年龄、性别比等一般资料,差异均无统计学意义(P>0.05),见表3。
表1 1987年ACR类风湿关节炎分类标准[5]
表2 2010年EULAR类风湿关节炎分类标准[5]
表3 两组患者一般资料的比较分析
1.2方法:根据RA患者的28个关节疾病活动度评分(disease activity score 28-jointcount,DAS28)对其进行分组,DAS28评分<2.6为RA缓解组,DAS28评分≥2.6为RA活动组[6]。
1.2.1血清趋化因子配体20水平的检测:空腹下,健康者与RA患者均被抽取静脉血10mL,3000r/min,15min离心分离血清,-80℃保存血清待检。使用美国RD System公司的ELISA双抗体试剂盒检测血清CCL20水平。在预先涂有CCL20受体的多克隆抗体微量滴定板中加入待检血清样品,25℃温育90min后洗涤7次;4℃下,用辣根过氧化物酶标记的小鼠单克隆抗体孵育CCL20,30min后洗涤9次;向各孔加入底物溶液;室温下滴定板避光孵育30h;使用终止液将反应终止。使用微量滴定板读数器,测量450nm下样本的吸光度(A值),并根据浓度-A值标准曲线计算出样品浓度。
1.2.2RNAKL水平的检测:采用ELISA法检测待检血清中RNAKL,选用上海江莱生物科技有限公司的试剂盒,并严格按照试剂盒使用说明操作。
1.2.325-羟维生素D水平的检测:采用化学发光法检测待检血清中25(OH)D水平,试剂盒来自德国西门子公司,并严格按照试剂盒使用说明操作。
2.1RA组患者与对照组对象血清CCL20、RNAKL、25(OH)D水平的比较分析:与对照组健康对象比较,RA患者血清CCL20、RNAKL水平显著升高,25(OH)D水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05),见表4。
表4 RA组患者与对照组对象血清CCL20 RNAKL 25(OH)D水平的比较分析
2.2RA缓解组与RA活动组患者血清CCL20、RNAKL、25(OH)D水平的比较分析:RA缓解组患者114例,RA活动组患者175例,RA活动组患者血清CCL20、RNAKL水平显著高于RA缓解组患者,血清25(OH)D水平比较,RA活动组患者显著低于RA缓解组患者,差异均有统计学意义(P<0.05),见表5。
表5 RA组患者与对照组对象血清CCL20 RNAKL 25(OH)D水平的比较分析
2.3血清CCL20、RNAKL、25(OH)D水平与DAS28评分相关性的分析:以DAS28评分作为RA疾病进展的变量,血清CCL20、RNAKL水平与DAS28评分呈正相关(P<0.05),血清25(OH)D水平与DAS28评分呈负相关(P<0.05),见表6。
表6 血清CCL20 RNAKL 25(OH)D水平与DAS28评分相关性的分析
RA的确切发病机制尚不明确,临床表现主要为对称性、侵蚀性多关节炎,是导致人类丧失劳动力、甚至引起人类残疾的主要疾病之一。RA发生与发展是遗传因素、感染因素、环境因素等共同作用,引起异常的免疫反应而导致的损伤和修复过程[7]。目前,RA不能根治,治疗的主要目标是达到临床缓解,没有明显炎症活动症状和体征,或低疾病活动度[8]。因此既可判断RA活动性,又可预测RA疾病进展的生物学指标的寻找至关重要。CCL20又名巨噬细胞炎症蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α,MIP-3α),与其受体CCR6结合后,激发特异性抗原免疫反应,导致炎性细胞因子和炎症介质释放,以多种不同途径参与RA关节滑膜慢性炎症、血管翳形成、关节软骨及骨破坏的病理改变[9]。本研究结果发现,相较于健康对照组,CCL20在RA患者中表达显著升高,且CCL20血清水平与RA疾病的进展呈正相关。这可能是CCL20促进固有免疫细胞及获得性免疫细胞活化,并转移至关节,促进IL-l、IL-6、TNF-α等炎性细胞因子及炎症介质相互募集,导致关节滑膜炎进展。
在RA疾病进展过程中,破骨细胞为关节软骨和骨破坏的效应细胞,RANKL属于周围炎性细胞因子,能够启动前体破骨细胞的分化与成熟,与骨破坏的程度关系密切[10]。CCL20能够通过促进细胞融合、细胞簇的形成及MMP-9的释放,刺激破骨细胞前体细胞群分化,并在RANKL作用下被激活成熟为破骨细胞,造成骨侵蚀[11]。这与本研究血清RANKL水平与RA疾病进展呈正相关的结果一致。
本研究发现,相较于健康对照组,RA患者血清25(OH)D水平显著降低,且相关性分析显示,血清25(OH)D水平与疾病进展呈负相关。25(OH)D是维生素D经过2次羟化后的稳定形式,25(OH)D缺乏,导致淋巴细胞增殖、抗原提呈及抗体表达障碍,IL-2、IL-6等细胞因子释放增多,加重细胞炎性损伤[12]。维生素D受体在树突状细胞、淋巴细胞及巨噬细胞表面高表达,能够通过免疫系统抑制炎症反应,25(OH)D缺乏导致细胞旁分泌及自分泌障碍,炎症反应加重[13]。
综上所述,血清CCL20、RNAKL水平与RA疾病进展呈正相关,血清25(OH)D水平与RA疾病进展呈负相关,CCL20、RNAKL、25(OH)D可作为监测疾病活动性的生物学指标,协助医生综合、全面判断患者病情。