高脂血症性急性胰腺炎患者外周血miR-122的表达及临床意义

于嫔，朱蔚远

(邵阳学院附属第一医院 消化内科，湖南 邵阳，422001)

急性胰腺炎(acute pancreatitis， AP)是临床上常见的消化系统急症，在世界范围内发病率为23.33～48.81/10万[1]，且呈逐年上升趋势。AP的主要病因包括胆石症、过度饮酒、高脂血症等。近年来，随着人们生活水平的改善和饮食习惯的变化，我国高脂血症性AP(hyperlipidemic acute pancreatitis，HLAP)的发病率不断升高，已超过酒精性AP，成为仅次于胆源性AP的第二大AP[2]。与其他病因所致的AP相比，HLAP进展快、并发症多、病死率高、且易反复发作[3-4]。目前,针对HLAP早期临床诊断的血清学检查仍以传统的血清淀粉酶为主，而高脂血症往往会干扰血清淀粉酶的检测结果[5]，导致漏诊，延误最佳治疗时机。因此，寻找新的、准确的、独立的HLAP早期诊断指标，具有重大的临床和社会意义。

微RNA(micro RNAs， miRNAs)是一类由19～25个核苷酸组成的内源性非编码RNA[6]，它是关键的转录后调控因子，可以与靶mRNA的3′非翻译区互补位点特异性结合，抑制mRNA的翻译或降解mRNA，进而调控机体的多种病理生理过程[7]。近年有多项研究表明，miRNAs与AP的发生、发展密切相关[8-9]，但有关miRNAs和HLAP的研究尚罕见报道。本研究就HLAP患者外周血标本中miR-122的表达量与其病情严重程度的关系进行初步探究，以期为HLAP患者的临床诊断和病情评估提供新的思路和靶标。

1 对象与方法

1.1 对象

纳入标准：(1)符合我国AP诊断标准[10]；(2)血清三酰甘油≥11.3 mmol/L或血清在5.65～11.3 mmol/L之间呈乳糜状；(3)发病24 h内入院。排除标准：(1)慢性炎症性疾病患者；(2)恶性肿瘤患者；(3)精神疾病患者；(4)妊娠期患者；(5)合并放弃治疗、转院或死亡的患者。选取2020年1月至2021年12月期间邵阳学院附属第一医院消化内科收治的符合纳入标准的70例HLAP患者作为研究对象，并在入院后24 h内完成APACHE Ⅱ评分及MCTSI评分[11]。根据MCTSI评分对HLAP患者进行分组，6分以下为轻中度组(A组，n=39)，7～10分为重度组(B组，n=31)。另选取邵阳学院附属第一医院体检中心同期30例高脂血症而非AP患者(C组)和30例健康体检者(D组)作为对照。本研究通过邵阳学院附属第一医院伦理委员会审批，所有受试者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器

RNA提取试剂NucleoZOL购自德国MACHEREY-NAGEL公司；异丙醇、无水乙醇购自国药集团化学试剂有限公司；反转录试剂盒(编号：638315)、实时荧光定量PCR试剂盒(编号：RR820A)及相关引物均购自日本Takara公司；低温高度离心机购自德国Eppendorf股份公司。NanoDrop One超微量核酸蛋白测定仪、梯度PCR仪、QuantStudio TM 5全功能定量PCR仪均购自塞默飞世尔科技(中国)有限公司。

1.2.2 外周血miR-122检测

(1)所有受试者入院后立即采集外周静脉血5 mL，以3 000 r/min离心10 min后得到血清样本，通过NucleoZOL试剂盒提取血清总RNA，并检测RNA浓度、纯度及完整度，置于-80 ℃冰箱保存待用。(2)通过反转录试剂盒对血清RNA进行反转录，得到cDNA样本，置于-20 ℃冰箱保存待用。(3)取cDNA样本，通过实时荧光定量PCR检测miR-122的表达。PCR反应体系与反应条件依据试剂盒说明书设置。以U6作为内参(引物序列详见表1)，采用2-ΔΔCt法计算基因的相对表达量。

表1 引物序列Table 1 PCR primer sequence

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 受试者一般资料比较

4组受试者性别、年龄、BMI差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 4组受试者一般资料比较

2.2 受试者血清miR-122、三酰甘油、淀粉酶以及APACHE Ⅱ评分比较

A、B组患者血清miR-122表达明显高于C、D组，差异均有统计学意义(P<0.01)；同时，B组患者血清miR-122的表达明显高于A组，差异有统计学意义(P<0.01)；而C、D组之间miR-122的表达差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 4组受试者血清miR-122、三酰甘油、淀粉酶以及APACHE Ⅱ评分比较

2.3 ROC曲线分析miR-122对HLAP的诊断价值

miR-122预测HLAP的曲线下面积(AUC)为0.849(P<0.001)，灵敏度为0.871，特异度为0.633，见图1。

图1 ROC曲线分析miR-122对HLAP的诊断价值Fig.1 ROC curve analyzed the diagnostic value of miR-122

2.4 HLAP患者血清miR-122表达水平与血清三酰甘油、淀粉酶、及APACHE Ⅱ评分的相关性

HLAP患者血清miR-122表达水平与血清三酰甘油呈明显正相关(r=0.794，P<0.001)，与APACHE Ⅱ评分呈明显正相关(r=0.717，P<0.001)，与血清淀粉酶无明显相关性(r=0.075，P=0.537)。

3 讨论

1952年，KLATSKIN等[12]首次提出高脂血症与AP存在关联。随着研究的深入，高脂血症已经被公认为AP最主要的病因之一。相较于其他类型的AP，HLAP患者的发病年龄较低，起病急，常易进展为重症AP，预后欠佳[13]。HLAP的临床表现并无特异性，仍以腹痛、腹胀为主，临床实践中常需与其他各类急腹症相鉴别。而有研究表明，59.62%的HLAP患者血清淀粉酶并没有明显的升高，常引起漏诊、误诊，给广大临床医师尤其是缺乏进一步检查手段的基层医师造成极大困扰[14]。因此，寻找更为精准易行的HLAP诊断新指标，是广大临床医师的共同期望。

miR-122定位于人类18号染色体18q21.31，最早于2002年被发现[15]。多项研究表明，miR-122在脂质代谢过程中起重要调控作用[16-18]。亦有学者发现，在AP大鼠肠系膜淋巴液中miR-122表达明显升高，且与AP严重程度呈正相关[19]。以上研究提示,miR-122与HLAP的发生发展可能存在一定关联，但相应的临床研究尚未见报道。

本研究结果显示，HLAP患者血清miR-122的表达量明显高于高脂血症组和健康对照组，并且其中重度组明显高于轻度组，提示HLAP患者血清miR-122存在高表达，并与病情的严重程度存在一定关联；而高脂血症组和健康对照组相比无明显差别，提示单纯的高脂血症并不会引起miR-122表达的升高。其次，通过ROC曲线分析发现，miR-122诊断HLAP的AUC为0.849，灵敏度为0.871，特异度为0.633，提示miR-122对HLAP具有良好的诊断效能。

APACHE Ⅱ评分是目前评估HLAP患者病情严重程度和预后的常用指标[20]。本研究通过Pearson相关分析发现，miR-122在HLAP患者外周血中的表达与APACHE Ⅱ评分存在明显相关性，进一步提示miR-122可以预测HLAP的严重程度。同时，miR-122在HLAP患者外周血中的表达与三酰甘油存在明显相关性，而与淀粉酶无明显相关性，提示miR-122可能通过参与脂质代谢影响HLAP的进展，其具体机制仍需进一步探究。

综上所述，HLAP患者血清miR-122呈高表达，且与病情严重程度呈明显正相关，提示miR-122具有成为HLAP临床诊断和病情严重程度评估的新型血清学指标的潜力，亦可能成为HLAP基因治疗的潜在靶点。囿于研究条件和病源数量的限制，纳入的受试者人数有限，要进一步论证miR-122的诊断和评估效能，仍需进行多中心、大样本的研究。